Encyclopedia of Experiments: Biology
A subscription to JoVE is required to view this content.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- Coloque um peixe eutanizado em uma cama de dissecção e use uma lâmina cirúrgica para decapitar o peixe ao nível das brânquias. Segure a cabeça com o lado ventral voltado para cima e remova os tecidos moles até ver o quiasmo óptico, uma estrutura feita de nervos ópticos que conecta o cérebro aos olhos.
Corte os nervos ópticos e remova os olhos. Agora, oriente o peixe com o lado dorsal voltado para cima e remova as partes do crânio para isolar o cérebro. Transfira o cérebro para uma placa de Petri contendo um meio de dissecção para manter um pH constante do tecido. Observe as partes do cérebro.
As lâmpadas olfativas são um par de estruturas na extremidade anterior conectadas aos órgãos olfativos que detectam sinais de odor.
O tectum óptico é um centro de processamento de informações sensoriais. O cerebelo desempenha um papel na função e equilíbrio motor somático. E a medula retransmite informações da medula espinhal para o cérebro. No protocolo a seguir, isolaremos o cérebro de um zebrafish adulto para coletar células-tronco neurais de diferentes regiões.
Para começar, prepare uma cama de dissecção preenchendo uma placa de Petri com embalagens de gel. Em seguida, cubra a placa com sua tampa correspondente e incuba-a a menos 20 graus Celsius. Uma vez que o gel esteja congelado, retire o prato do congelador e coloque um quadrado limpo de papel filtro em cima de sua tampa.
Em seguida, trate todos os instrumentos de microdiscção com 70% de etanol. Coloque essas ferramentas esterilizadas ao lado de um microscópio dissecando e posicione o leito de dissecção completa sob o microscópio com iluminação de fibra óptica. Coloque imediatamente uma amostra de cabeça previamente preparada em cima do leito de dissecção e oriente-a para que seu lado dorsal esteja voltado para baixo.
Em seguida, use uma tesoura para fazer um corte longitudinal através do tecido mole da parte de trás da cabeça para a boca. Depois, exponha a base do crânio com fórceps e remova todo o tecido adjacente. Em seguida, corte uma das paredes laterais do crânio começando na parte de trás da cabeça e movendo-se em direção à região tectum do cérebro. Repita este processo para o lado contralateral.
Finalmente, vire a cabeça para cima. Retire a parte mais apical do crânio para expor o cérebro. Depois, transfira o cérebro e quaisquer partes restantes do crânio para um prato contendo meio de dissecção que é composto de DMM F12 suplementado com estreptomicina de penicilina.
