Encyclopedia of Experiments: Biology
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- 心肌病是一种心肌衰弱和失去抽血能力的情况。这种情况可以在斑马鱼中复制。首先，稀释汉克斯平衡盐溶液中负责心毒性的药物的库存溶液，以准备几个工作浓度。 接下来，在解剖显微镜下将一条三角麻醉鱼（腹侧）放在一个保持海绵上。将针头从水平角度置于 45度角的骨盆鳍之间。
现在轻轻将针头推入腹腔1至2毫米，慢慢注射药物溶液。等待五秒钟，然后拔出针头，以防止溶液泄漏。立即将鱼转移到含有新鲜系统水的干净水箱中。 记录每天因严重心毒、心肌损伤而死亡的鱼的数量。药物与心肌细胞膜上的死亡受体结合，并引发凋亡，导致严重的心毒性。
创建一个生存曲线，一个显示每个药物浓度的存活概率的图表。在示例中，我们将注射多索鲁比辛（DOX）以两种方式诱导成年斑马鱼的心肌病。
在给鱼注射DOX之前，将鱼禁食24小时。接下来，对鱼进行分组。麻醉时，使用干净的滤纸干燥每条鱼并测量其体重。制作一组体重在相同体重 10% 以内的鱼，以便每组鱼可以注射相同剂量的 DOX。 接下来，计算每个组的 DOX 的工作浓度，以便每个组注射五微升溶液，并按体重接收相同剂量的 DOX。
然后，在1x HBSS 中稀释 DOX 的库存。 将稀释与涡流混合，然后脉冲旋转稀释，使其聚集在管中。 对于注射，请准备一个注射平台。在干净的100毫米培养皿中，放置一块海绵。 在解剖显微镜的帮助下，将一个腔切入海绵中，以容纳一条鱼，四厘米通常有效。
接下来，在34口径的针头上，附上一个10微升的微注射器，然后用1倍HBSS冲洗针头，以去除注射器和管子上的任何气泡或方块。现在，用三卡因短暂麻醉成年鱼。然后，用三卡因将海绵浸泡在胚胎水中，将鱼转移到海绵上，腹部向上注射。 现在，通过快速将针头以45度角插入骨盆鳍之间约1至2毫米深的中线，在腹腔内注射DOX溶液。
然后，慢慢释放所有的DOX解决方案。在收回针头之前，等待五秒钟。 或者，鱼可以横向定位，内部向右。 然后，将侧线注射到骨盆鳍上方，斜面以45度角和3到 4 毫米深指向7 点钟。如果任何一种注射方法都成功，腹部会有红色色调。
注射后，迅速将鱼转移到一个干净的交叉罐，里面装满了新鲜的系统水，在那里它可以恢复。 然后，用 HBSS 冲洗针头，然后继续注射下一条鱼。 稍后，将注射的鱼返回循环运行但与主系统分离的系统，以避免交叉污染。 在接下来的24小时内，继续禁食鱼。 在第一周，注射后，一定每天检查鱼，并删除任何死鱼。
