Zebrafisch Kardiomyopathie Modell: Drogeninduzierte Kardiotoxizität

- Kardiomyopathie ist ein Zustand, in dem der Herzmuskel schwächt und verliert die Fähigkeit, Blut zu pumpen. Dieser Zustand kann in Zebrafischen repliziert werden. Zuerst verdünnen Sie eine Stammlösung eines Medikaments, das für die Kardiotoxizität in Hanks' Balanced Salt Solution verantwortlich ist, um mehrere Arbeitskonzentrationen vorzubereiten. Als nächstes legen Sie einen Trikuinanästhestenanästhesten, ventrale Seite nach oben, auf einen Halteschwamm unter einem Sezierendes Mikroskop. Positionieren Sie die Nadel zwischen den Beckenflossen in einem 45-Grad-Winkel von der Horizontale.

Drücken Sie nun vorsichtig die Nadel 1 bis 2 Millimeter in die Peritonealhöhle und injizieren Sie langsam die Medikamentenlösung. Warten Sie fünf Sekunden, bevor Sie die Nadel herausziehen, um zu verhindern, dass die Lösung austritt. Übertragen Sie die Fische sofort in einen sauberen Tank mit frischem Systemwasser. Erfassen Sie die Anzahl der Fische, die jeden Tag aufgrund schwerer Kardiotoxizität sterben, Schäden am Herzmuskel. Das Medikament bindet an Diekorzeporen, die auf der Kardiomyozytenzellmembran vorhanden sind, und löst eine Poptose aus, die zu einer schweren Kardiotoxizität führt.

Erstellen Sie eine Überlebenskurve, ein Diagramm, das die Überlebenswahrscheinlichkeit im Laufe der Zeit für jede Wirkstoffkonzentration anzeigt. Im Beispiel werden wir Doxorubicin oder DOX injizieren, um Kardiomyopathie bei einem erwachsenen Zebrafisch auf zwei Arten zu induzieren.

Vor der Injektion des Fisches mit DOX Schnell die Fische für 24 Stunden. Als nächstes gruppieren Sie die Fische. Während der Anästhesie, verwenden Sie ein sauberes Filterpapier, um jeden Fisch zu trocknen und sein Körpergewicht zu messen. Machen Sie Gruppen von Fischen, die alle innerhalb von 10% des gleichen Körpergewichts sind, so dass jede Gruppe mit der gleichen Dosis von DOX injiziert werden kann. Als nächstes berechnen Sie die Arbeitskonzentration von DOX für jede Gruppe, so dass jede Gruppe mit fünf Mikrolitern Lösung injiziert wird und die gleiche Dosis von DOX erhält.

Dann verdünnen Sie den Vorrat von DOX in 1x HBSS. Mischen Sie die Verdünnung mit einem Wirbel und dann Puls drehen Sie die Verdünnung, um es zusammen in der Röhre zu halten. Für die Injektion, bereiten Sie eine Injektionsplattform. In einer sauberen 100 Millimeter Petrischale, legen Sie einen Schwamm. Mit Hilfe eines Seziermikroskops, schneiden Sie einen Hohlraum in den Schwamm, um einen Fisch zu halten, vier Zentimeter in der Regel funktioniert.

Als nächstes, auf eine 34-Spur-Nadel, befestigen Sie eine 10-Mikroliter-Mikrospritze. Dann spülen Sie die Nadel mit 1x HBSS, um Alle Blasen oder Blöcke aus der Spritze und Schläuche zu entfernen. Nun, kurz betäuschen die erwachsenen Fische mit Tricain. Dann tränken Sie den Schwamm im Embryowasser mit Tricain und übertragen Sie einen Fisch auf den Schwamm mit seinem Bauch für die Injektion. Jetzt intraperitoneally injizieren DOX-Lösung durch schnelles Einsetzen der Nadel in einem 45-Grad-Winkel in die Mittellinie zwischen den Beckenflossen etwa 1 bis 2 Millimeter tief.

Dann lösen Sie langsam die gesamte DOX-Lösung. Bevor Sie die Nadel einziehen, warten Sie fünf Sekunden. Alternativ kann der Fisch seitlich mit dem Inneren nach rechts positioniert werden. Dann wird die seitliche Linie über der Beckenflosse mit der Abschrägung in Richtung 7 Uhr in einem 45-Grad-Winkel und 3 bis 4 Millimeter tief injiziert.

Nach der Injektion, schnell übertragen Sie die Fische in einen sauberen Überlauftank mit frischem Systemwasser gefüllt, wo es sich erholen kann. Dann spülen Sie die Nadel mit HBSS und fahren Sie fort, den nächsten Fisch zu injizieren. Später, geben Sie die eingespritzten Fische zu einem System mit laufendem Kreislauf, aber getrennt vom Hauptsystem, um Kreuzkontamination zu vermeiden. Für die nächsten 24 Stunden, weiter die Fische zu fasten.