インドのインクインフレーション:腫瘍結節を可視化する染色法

手術用ベッドの上に安楽死させたマウス腹側を置き、動物の手足を固定することから始めます。はさみを使用して、リブケージを通って唾液腺まで正中線に沿って切断する。気管の下にピペットチップを置き、それを高め、分離します。手術用ベッドを180度回転させます。インドのインク汚れを含む注射針を気管に挿入し、抵抗を感じるまでインクを肺に注入します。

がん細胞は、細胞表面に強い負電荷を発生させる大量の乳酸を分泌する。これらの細胞がインドのインク、酸性染色で染色されると、細胞表面は汚れを反発し、染色されていないままである。

はさみを使って気管を切り、肺の下にピンセットをスライドさせます。動物の体から肺をそっと引っ張り出します。肺を水ですすぎ、フェケテの溶液を含むバイアルに移して過剰な汚れを取り除き、ヒュームフードで組織を固定します。腫瘍結節は暗い背景に対して白く見える。

次のプロトコルでは、インドのインクインフレーション技術を実行して肺転移を検証します。

肺への原発性腫瘍の転移を検証するには、まずポリスチレンボード上の位置にマウスを置き、気管への妨げのないアクセスを確保するために脚を固定する。70%エタノールでマウスをスプレーします。次に、はさみを使用して、肋骨ケージを通ってマウスの中腹部の中腹に沿って、唾液腺に向かって切開を行います。気管を識別します。次に、鉗子を使用して周囲の組織を除去する。

次に、ピペットチップを片手に持ち、先端を気管の下に通し、組織を体からそっと持ち上げます。気管を高く保ち、解剖プラットフォームを180度回転させます。その後、気管に27ゲージの結核注射器を半分挿入し、強い抵抗が感じられるまでインドのインクで肺を完全に膨らませます。

その後、はさみを使用して、気管を切断します。マウスを1つの鉗子で所定の位置に保持し、肺の下に別の鉗子を挿入し、マウスから肺葉を引き出す。肺を水のビーカーで短時間すすいで、組織をヒュームフードに移します。次に、3ミリリットルのFekete溶液を含むガラスシンチレーションバイアルに肺を入れ、バイアルをキャップして溶液が蒸発するのを防ぎます。数分後、ペトリ皿に肺を移し、単一の白い転移性腫瘍結節の数を数える。