Encyclopedia of Experiments: Cancer Research
A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
Begynd med at placere en aflivet mus ventral side op på en kirurgisk seng og sikre dyrets lemmer. Brug saks, skæres langs midterlinjen gennem brystkassen op til spytkirtlerne. Placer en pipettespids under luftrøret for at hæve og isolere den. Drej den kirurgiske seng 180 grader. Indsæt en sprøjtenål, der indeholder en indisk blækplet, i luftrøret, og indsprøjt blækket i lungerne, indtil du føler modstand.
Kræftceller udskiller en stor mængde mælkesyre, der genererer en stærk negativ ladning på celleoverfladen. Når disse celler er plettet med Indien blæk, en sur plet, cellen overflade frastøde pletten og forblive unstained.
Brug en saks til at skære luftrøret og skub et par pincet under lungerne. Træk forsigtigt lungerne ud af dyrets krop. Skyl lungerne i vand og overfør dem til et hætteglas, der indeholder Feketes opløsning, for at fjerne overskydende plet og fastgøre vævet i en røghætte. Tumor knuderne vises hvide mod den mørke baggrund.
I den følgende protokol, vil vi udføre Indien blæk inflation teknik til at validere lunge metastaser.
For at validere metastasen af den primære tumor til lungerne skal du først placere musen i liggende stilling på et polystyrenbræt og sikre benene for at sikre uhindret adgang til luftrøret. Sprøjt musen med 70% ethanol. Brug derefter en saks til at lave et snit langs midterlinjen af musens midten af musen gennem brystkassen og op mod spytkirtlerne. Identificer luftrøret. Brug derefter pincet til at fjerne det omgivende væv.
Dernæst holder en pipettespids i den ene hånd, tråd spidsen under luftrøret og forsigtigt løfte vævet op og væk fra kroppen. Hold luftrøret forhøjet, drej dissekeringsplatformen 180 grader. Derefter indsættes en halv cc 27-gauge tuberculin sprøjte i luftrøret og helt puste lungerne med Indien blæk, indtil en stærk modstand mærkes.
Derefter skæres luftrøret ved hjælp af en saks. Hold musen på plads med en pincet, indsæt en anden pincet under lungerne og træk lungeflipperne ud af musen. Skyl lungerne kort i et bægervand og overfør vævet til en røghætte. Placer derefter lungerne i et glasscintillationsglas, der indeholder 3 milliliter Feketes opløsning, og afkæmpning af hætteglasset for at forhindre opløsningen i at fordampe. Efter et par minutter overføres lungerne til en petriskål og tæller antallet af enkelt, hvid, metastatisk tumor knuder.
