Encyclopedia of Experiments: Cancer Research
A subscription to JoVE is required to view this content.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
Begynn med å plassere en euthanized mus ventral side opp på en kirurgisk seng og sikre dyrets lemmer. Bruk saks, kutt langs midtlinjen gjennom ribbeburet opp til spyttkjertlene. Plasser en pipettespiss under luftrøret for å heve og isolere den. Roter den kirurgiske sengen 180 grader. Sett inn en sprøytenål som inneholder en blekkflekk i India, i luftrøret og injiser blekket i lungene til du føler motstand.
Kreftceller utskiller en stor mengde melkesyre som genererer en sterk negativ ladning på celleoverflaten. Når disse cellene er farget med India blekk, en sur flekk, celleoverflaten avviser flekken og forblir unstained.
Bruk saks til å kutte luftrøret og skyv et par pinsett under lungene. Trekk forsiktig lungene ut av dyrets kropp. Skyll lungene i vann og overfør dem til et hetteglass som inneholder Feketes løsning for å fjerne overflødig flekk og fikse vevet i en avtrekkshette. Tumorknutlene ser hvite ut mot den mørke bakgrunnen.
I følgende protokoll vil vi utføre Indias blekkinflasjonsteknikk for å validere lungemetastase.
For å validere metastase av den primære svulsten til lungen, plasser først musen i liggende stilling på et polystyrenbrett og sikre bena for å sikre en uhindret tilgang til luftrøret. Spray musen med 70% etanol. Bruk deretter et par saks for å gjøre et snitt langs midtlinjen av musens midt underliv gjennom ribbeburet og opp mot spyttkjertlene. Identifiser luftrøret. Bruk deretter tang for å fjerne det omkringliggende vevet.
Deretter holder du en pipettespiss i den ene hånden, trer spissen under luftrøret og løfter forsiktig vevet opp og bort fra kroppen. Hold luftrøret forhøyet, roter dissekeringsplattformen 180 grader. Sett deretter en halv cc 27-gauge tuberkulinsprøyte inn i luftrøret og blås helt opp lungene med India-blekk til en sterk motstand er følt.
Deretter, ved hjelp av en saks, kutt luftrøret. Hold musen på plass med en tang, sett inn en annen tang under lungene og trekk lungelobene ut av musen. Skyll lungene kort i et beger med vann og overfør vevet til en avtrekkshette. Plasser deretter lungene i et hetteglass med glasssculler som inneholder 3 milliliter Feketes oppløsning, og kapp hetteglasset for å forhindre at oppløsningen fordamper. Etter noen minutter, overfør lungene til en Petri-tallerken og tell antall enkle, hvite, metastatiske tumorknuter.
