SJL小鼠诱导实验性自身免疫性垂体炎

自身免疫性垂体炎的特征是垂体肿大和一种或多种垂体激素缺乏。自身抗原的病因仍然未知。配套视频演示了制备小鼠垂体免疫原的方案，此处将用于创建类似于人类自身免疫性淋巴细胞垂体炎的小鼠模型。

垂体免疫原被注射到易感小鼠品系中。然后在 14 天后 7 天后重复注射，收集血液用于生物标志物研究。在第 28 天，从处死的小鼠中收获垂体，切片和染色以确定白细胞浸润的程度。

自身免疫性垂体炎是一种越来越公认的疾病，很难与细胞中出现的其他非激素分泌性肿块区分开来。尽管这种疾病在大约 50 年前首次被描述，但在自身免疫性垂体炎中，患者的免疫系统识别的自身抗原仍然难以捉摸。2008 年，我们发表了一种小鼠模型的开发，该模型密切概括了它旨在模拟的人类疾病。

该小鼠模型可用于发现所涉及的垂体自身抗原，并更多地了解垂体炎的发病机制和自然病程。该模型基于将小鼠垂体蛋白注射到 SJL 菌株等易感菌株中。这些蛋白质需要与强佐剂混合，以产生局部炎症环境，最终诱导垂体自身反应性淋巴细胞的出现。

首先在引流注射部位的淋巴结中，然后在垂体中。该模型需要注射相对大量的垂体蛋白，每只小鼠总共注射 2 毫克。这表明 cosset 自身抗原或自身抗原在生育腺中存在微量注射适当制备的 emerge 对于疾病的诱导至关重要，因为它转化为在注射部位缓慢、连续地释放垂体蛋白，最终支持垂体特异性淋巴细胞的产生和激活。

在配套视频中，该视频介绍了一种制备垂体免疫原的方法。从安乐死小鼠中分离的垂体通过低速离心匀浆和澄清。通过比色法、BCA 测定法评估蛋白质混合物的数量，并通过聚丙烯酰胺凝胶电泳评估质量。

然后将水性蛋白匀浆与含有失活结核分枝杆菌杆菌的油性佐剂混合，以产生垂体乳剂。如配套视频所示制备乳剂后，从 1 毫升注射器中取出微量乳化针头，并连接 25 号针头。每只要注射的小鼠需要 100 微升垂体乳剂。

用 Everton 麻醉小鼠后，确保对脚趾捏没有反应，然后在左背侧后腿区域皮下注射 50 微升乳剂。确保针尖完全在皮肤下，并且没有乳液从注射部位渗出。接下来，在右侧腹股沟区域注射 50 微升。

同样，确保没有任何东西渗出。请注意，乳液是白色的，在注射后 SGL L 小鼠皮毛的白色背景下可能难以区分。将鼠标放回笼子并监控其恢复情况。

在注射后的前三天每天监测注射的小鼠，以确保没有发生极度痛苦。佐剂具有促炎作用，因为它含有灭活的结核分枝杆菌。杆菌在第 7 天，在解剖两侧重复注射。

在右侧背侧胼腿区域注射 50 微升，在左侧腹股沟区域注射 50 微升。像以前一样监测小鼠，将在免疫反应发生后评估实验结果。血液是小鼠还活着时最常用于评估实验结果的组织。

第一次免疫接种后 14 天常规抽血，以测量垂体抗体或其他标志物（如细胞因子和趋化因子）的血清水平。要从活老鼠身上采集血液，请牢牢抓住动物的脖子，并找到颚骨的后部。一旦这个位置明确，就用 4 毫米的柳叶刀刺破下颌下维管束。

血液将开始从穿孔区域流出。将 6 滴血液收集到微量离心管中。用湿纸巾清洁穿孔区域以止血。

将采血管放入离心机中，以 2000 G 离心 20 分钟。这种离心分离血细胞，这些血细胞最终会从血清 snat 中分离出来。将血清转移到新的微量离心管中。

将血清储存在零下 80 摄氏度，直到需要为止。免疫小鼠大约需要一个月的时间才能发展为全面的自身免疫性垂体炎。因此，通常在第一次免疫后 28 天处死小鼠。

切开颅骨后，抬起大脑并向后翻转，露出垂体。病变的垂体腺表现为肿胀，并且更牢固地粘附在周围的脑膜上。在垂体周围移动锋利的镊子尖端，使脑膜松动。

一旦垂体在这个 phen 骨上自由移动，用镊子抓住腺体的一端，小心地将其从这个 phen 骨上提起。将组织放入含有 1 毫升 betded 溶液（一种锌基固定剂）的微量离心管中，并在室温下固定腺体过夜。第二天，将垂体转移到一张镜片纸上。

垂体包裹在镜片纸中，并将其放入组织学盒中。通过孵育和增加酒精浓度来处理样品，然后在处理后增加二甲苯的浓度。取出镜片纸，将垂体放入金属模具中。

然后用石蜡覆盖垂体。将纸巾盒放在模具顶部，并填充额外的石蜡。最后，将组件放在冰上，让石蜡凝固。

石蜡凝固后，使用切片机切下 5 微米厚的切片。在载玻片上拾取切片。从每个小鼠垂体收集同一张载玻片上的至少五个非连续切片。

使用自动组织染色站用血红素和伊红对载玻片进行染色。用光学显微镜检查载玻片以收集结果。发生垂体炎的垂体腺的主要特征是淋巴细胞浸润，淋巴细胞表现为蓝色小细胞，孤立地渗透垂体实质或形成簇状。

淋巴细胞与垂体正常内分泌细胞的不同程度的破坏有关。垂体淋巴细胞浸润和破坏最严重的部分由两名对实验条件不知情的研究人员选择进行评分。评分基于对损坏程度的主观估计。

零分表示垂体正常或淋巴细胞和其他造血单核细胞很少见。1 分表示单核浸润占垂体前叶总面积的 2% 至 20%。2 分表示单核浸润占垂体前叶总面积的 20% 至 30%。

3 分表示单核浸润占垂体前叶总面积的 30% 至 50%。4 分表示单核浸润占据垂体前叶区的 50% 至 90%，5 分表示单核浸润几乎占据了整个垂体前叶区。一旦掌握，即可在 15 分钟内将免疫原注射到一只小鼠中。

尝试免疫程序时，可以在 5 分钟内完成从一只小鼠身上收集外周血，并在 6 小时内准备用于组织病理学的载玻片。在麻醉和注射免疫原后密切关注小鼠的健康状况非常重要。除了 pit pitu 组织病理学。

该程序可用于使用各种方法收集大量实验结果，例如通过流式细胞术评估引流淋巴结中的 invoice 亚群。使用组织提取物对诱导和自身免疫性疾病进行免疫的技术为自身免疫领域的研究人员发现疾病发病机制中的关键事件铺平了道路。看完这个视频，它应该对如何对小鼠进行免疫以诱导实验性自身免疫性垂体炎以及如何评估其事件和严重程度有一个很好的了解。

不要忘记使用 microtone 刀片可能会很危险。因此，应始终采取预防措施，例如戴手套和在良好的照明条件下工作。