鱼的胚胎植入前基因诊断

该程序的目的是使用荧光原位两种杂交技术来确定有遗传异常风险的体外人类胚胎的性染色体或易位状态。这是通过裂解、从第 3 天的胚胎到载玻片上对单个细胞进行活检并风干细胞核来实现的。第二步是编码 D 性质，并将靶核 DNA 与用不同颜色的荧光染料标记的 DNA 探针杂交。

接下来，使用严格的洗涤去除多余的探针，并用 DNA 特异性荧光染料对细胞核进行染色。最后一步是使用荧光显微镜观察细胞核并捕获数字图像。最终，可以通过荧光显微镜获得显示目标染色体区域拷贝数的结果。

通常，刚接触该技术的个体会很挣扎，因为它处于荧光原位杂交技术的极限。提前 24 小时，准备用于扩散细胞的细胞裂解缓冲液。过滤溶液并将 1 毫升等分试样分配到 10 至 15 个 1.7 毫升无菌微量离心管中，关闭并标记试管，然后在活检程序前在零下 20 摄氏度下冷冻

在室温下解冻裂解缓冲液。使用金刚石笔在胺涂层载玻片的底面划出一个直径约 5 毫米的小圆圈，然后使用用乳胶手套预先标记载玻片 BLO 的硬四 H 铅笔。要去除任何石墨粉尘，请按数字顺序为每个喷砂镜使用单独的载玻片。

现在将少量裂解缓冲液放入圆圈内。将活检 blaster 转移到裂解缓冲液中。根据需要添加裂解缓冲液以裂解细胞。

观察细胞核以确保它保持在圆圈内并且不会丢失。如果细胞没有细胞核或有多个细胞核，则对另一个细胞进行活检。让玻片在室温下风干。

首先，在室温下使用磷酸盐缓冲盐水在 coplan 罐中预洗样品 5 分钟。然后在无菌蒸馏水中冲洗两次，用乙醇系列脱水，在室温下脱水，每次 2 分钟，然后风干。确保载玻片完全浸入，如果任何石墨粉尘漂浮到表面，请用干净的纸巾吸收。

通过使用相差显微镜观察来记录圆内细胞核的位置。然后在室温下用 100% 乙醇将样品脱水 2 分钟并风干。现在涂抹 2 微升探针混合物，并用 9 x 9 毫米的盖玻片覆盖。

用橡胶水泥密封盖玻片的边缘。执行编码的 naturing。在 75 摄氏度的加热块上踩 5 分钟，然后在 37 摄氏度的加湿室中杂交每个偶联罐过夜。

71 摄氏度的水浴中平衡 50 毫升 0.4 倍 SSC 严格洗涤液。将 Strictly 洗涤瓶和空偶联瓶放入室温水浴中，加热至 71 摄氏度 pH 值，将 Strictly 洗涤液倒入交趾罐中。继续小心地从每张载玻片上去除橡胶胶水，并在室温下使用四倍 SSC 0.05%tween 20 pH 7 冲洗盖玻片。

在 71 摄氏度下用 0.4 倍 SSC 严格洗涤样品 5 分钟，然后在室温下用 4 倍 SSC 0.05%吐温 20 洗涤 2 分钟。对于间接标记的探针，排空玻片上多余的液体，并在 20 x 20 毫米见方的形体下涂抹 20 μL 荧光偶联抗体。在 37 摄氏度的加湿室中孵育 15 分钟。

取下段膜并在室温下进行以下洗涤 2 分钟。在 PBS 中 SSC 0.05%吐温 20 次 4 次，2 次 2 分钟。排空载玻片后，将 6 微升含有 DPI 的矢量盾封固剂涂抹到 22 x 22 毫米的支架上。

将盖玻片编号为零，然后将载玻片倒置在盖上。用透明指甲油印迹并密封盖玻片的边缘。最后，通过荧光显微镜分析样品。

由两名独立分析师对每个核心进行评分。此外，使用成像软件捕获细胞核的图像，以确认视觉诊断，并将图像存档作为实验室质量保证的一部分。在这里，中期扩散和由外周血淋巴细胞制备的间期核表明 5 号和 9 号染色体短臂之间相互易位的载体，在 5 P 14.3 和 9 P 2 处有转折点，4.1。

Fish 探针可照亮 9 号染色体信号的反式片段和中心片段。从第 3 天开始，在界面爆炸中，可以捕获胚胎，然后合并以形成合成图像。每个探针的两个信号表示每个基因座的两个拷贝，这与正常或平衡的补体一致。

对于易位染色体，有色信号表示 5 号染色体易位段的 1 个拷贝、9 号染色体反位段的 3 个拷贝和 CH 9 号染色体中心段的 2 个拷贝。该数据与 5 P 14.3 至 5 PT 的 man somi 和 9 P 2、4.1 至 9 pt 的三体性的不平衡乘积一致。观看此视频后，您应该对如何分析从人类胚胎中活检的单个细胞以及使用荧光原位杂交技术制备单个细胞核有很好的了解。

这对于获得可重复和最佳的测试结果以确定胚胎的性染色体、补体或易位状态非常重要。