Farelerde parabiyoz: Detaylı Bir Protokol

Bu prosedürün genel amacı, paylaşılan bir dolaşım sistemini incelemek için iki farenin parabiyotik birleştirmesini gerçekleştirmektir. Bu, önce hayvanların bitişik taraflarına bir kesi yapılarak gerçekleştirilir. Fasya ayrıldıktan sonra, iki fare dirsek ve diz eklemlerine sıkıca bağlanır.

Son adım, iki hayvanın derisini sürekli bir dikişle birbirine bağlamaktır. Sonuç olarak, akış sitometrik analizi, işlemden sonraki 10 ila 14 gün içinde kan kimerizmini gösterebilir. Bu tekniğin kemik iliği nakli veya hücre enjeksiyonu gibi mevcut yöntemlere göre en büyük avantajı, immünosupresyon gerektirmemesi ve aynı zamanda CX dolaşımının uzun süre korunmasına izin vermesidir.

İşlemi gösteren punctu çene olacaktır. Laboratuvarımdaki hayvan cerrahı En az iki hafta önceden, aynı cinsiyetten, tercihen dişi, aynı genetik ve benzer boyut ve ağırlıkta birkaç fare çifti kafesi kurdu. Uyumlu bir çift seçildikten sonra, parabiyozu temiz bir hayvan ameliyathanesinde gerçekleştirin.

Tüm temas yüzeylerinin, aletlerin ve eldivenlerin steril olduğundan emin olun. Fareleri, bir izo flor buharlaştırıcıya bağlı bir PAI contalı indüksiyon odasında uyuşturun. Anestezi indüklendikten sonra, prosedür boyunca koruyun.

Daha düşük bir konsantrasyonda flor sağlayan bir burun konisi kullanarak, şimdi karın kürklerini zıt taraflarda tıraş edin ve oftalmik merhem uygulayın. Sonra aseptik olarak. Traş edilen bölgeleri betadin batırılmış mendillerle ve ardından alkollü mendillerle iyice silerek hazırlayın.

Daha sonra, fareleri steril bir ped ile kaplanmış ısıtılmış bir pede aktarın. Analjezi için carprofen ve buprenorfin kullanın. Fareleri, traşlı alanlar yukarı bakacak şekilde sırt sırta gelecek şekilde yan yatırın.

Daha sonra fareleri steril bir örtü ile örtün ve sadece operasyon alanını açığa çıkarın. Keskin bir makas kullanarak, diz ekleminin yarım santimetre altından başlayarak ve dirseğin yarım santimetre üzerinde bitirerek, her bir hayvanın yanlarına uzunlamasına deri kesileri yapın. İnsizyonu takiben, cildi bir çift kavisli forseps ile tutarak ve fasyayı ikinci bir çift ile ayırarak cildi deri altı fasyadan nazikçe ayırın.

Yarım santimetre serbest cilt oluşturmak için, LEC'ler ve diz eklemleri açıkça ayırt edilebilir. Deri kesisini takiben, sol ve sağ LEC'leri birleştirmeye başlayın. Önce ilk farenin dirseğini bükün ve 3.0 sütürün iğnesini Theon'un altından geçirin.

İkinci olarak, ikinci farenin dirseğini bükün ve aynı dikişi altından geçirin. Eklemleri çift cerrahi düğümle sıkıca tutturun. Ardından, aynı prosedürü izleyerek diz eklemlerini bağlayın.

Eklemlerin takılmasını takiben. İki hayvanın derisini sürekli emilebilir beş oh Vicryl sütür ile bağlayın. Deri yırtılmasını ve ayrılmasını önlemek için dirsekten ventral olarak başlayarak.

Dirsek ve diz çevresindeki bölgedeki cildin sıkı bir şekilde kapatılmasını sağlayın. Deri farelerinin bağlanması, bu prosedürün kritik bir adımıdır. Ameliyattan sonra yırtılma ve ayrılmayı önlemek için farelerin sıkıca birleştirildiğinden emin olmak önemlidir.

Bu nedenle, her dört ila beş ayda bir, cildin sıkıca birleştiğini doğrularız. Ventral cilt bağlantısı tamamlandıktan sonra, fareleri yüzüstü pozisyona getirin ve çift cerrahi düğümle biten dikişe dorsal olarak devam edin. Sütürün sürekliliğini doğrulayın ve açıklıkların olmadığını onaylayın.

Dehidrasyonu önlemek için her hayvana deri altına yarım mililitre% 0.9 Sodyum klorür uygulayarak ameliyatı bitirin. Hayvanları iyileşene kadar ısıtılmış ped üzerinde tutun. Para biyotik varlığına uyum sağlarken yiyeceğe ulaşma zorluğunu en aza indirmek için her bir para biyotik çiftini nemli gıda peletleri ile temiz bir kafeste saklayın.

Yiyecek peletlerini kafes zeminine yerleştirin. Ayrıca, ameliyat sonrası ilk 48 saat içinde yuvalama materyali sağladığınızdan emin olun. Her 24 saatte bir carprofen uygulayın ve iki hafta boyunca her gün her 12 saatte bir buprenorfin uygulayın.

Hayvanları titreme, uyuşukluk, kuyruk çiğneme, kemerli sırt, tımar eksikliği vb. gibi ağrı ve sıkıntı belirtileri açısından izleyin. Ameliyattan sonraki ilk 10 gün içinde bakteriyel enfeksiyonları önlemek için, fareleri su şişelerinde oral sülfametoksazol ve trimetoprim süspansiyonu ile tedavi edin. Ameliyattan 10 ila 14 gün sonra kan sisi oluşacaktır.

Bu nedenle, iki hafta sonra, bunun gerçekleştiğini doğrulamak için kuyruk damarlarından kan alın. Kanı analiz etmek için akış sitometrisi kullanın. 500 mikrolitre 10 milimolar EDTA içinde iki ila üç damla seyreltin.

Daha sonra seyreltmeyi PBS'de 500 mikrolitre% 2 Dekstrin ile iyice karıştırın. Kan karışımını 37 santigrat derecede 30 dakika inkübe edin ve ardından süpernatanı toplamak için aşağı doğru döndürün. Pratikte için.

Probiyotik çiftleri dokuz ay boyunca bir arada tutulabilir ve herhangi bir komplikasyon olmadan ayrılabilir. Steril bir cerrahi yüzey üzerinde ters prosedürü gerçekleştirin. Daha önce tarif edilenle aynı anestezi protokolünü kullanın ve ilk dikişi çevreleyen alandan kılları çıkarın.

Aseptik olarak traş edilmiş cildi hazırladıktan sonra, analjezikleri uygulayın ve cerrahi alanı keskin bir makas kullanarak bir örtü ile örtün. Eklemleri ayırmak için fareleri lateral sütür boyunca uzunlamasına bir kesiden ayırın, dikişin düğümlerini kesin ve bunları her fareye bağlayın. Kenarları yumuşatmak için kesi boyunca cildi kesin.

Daha sonra dehidrasyonu önlemek için cildi emilebilir sürekli beş oh kaplı Vicryl sütür ile yeniden takın, deri altına yarım mililitre% 0.9 sodyum klorür uygulayın ve ardından hayvanları anesteziden kurtulana kadar ısıtılmış bir evcil hayvan üzerinde tutun. Daha önce tarif edildiği gibi aynı analjezik ve antibakteriyel postoperatif tedavileri kullanın, iki organizmanın parabiyozunun beklenen sonucu, her bir hayvan dolaşım sisteminin ortak bir kan dolaşımına eşit katkısıdır. Parabios Wild tipi ve GFP pozitif farelerden alınan kanın dengelenmesi, önceki çalışmalarla tutarlı olarak akış sitometrik analizi ile araştırıldı.

Yabani tip fareden alınan kan, yaklaşık yarısı GFP pozitif ve yarısı vahşi tip kan hücreleri tarafından belirtildiği gibi kimerizmin varlığını ortaya çıkardı. Bu teknik, uygun şekilde uygulanırsa 45 ila 60 dakika içinde yapılabilir.