原发性生肌前体细胞/成肌细胞从基底哺乳动物支系文化准备

该程序的总体目标是从硬骨中培养产肌前体细胞，以在体外进行肌生成。这是通过首先从生物体中解剖 epaxal muscle 来实现的。第二步是机械解离分离的组织。

接下来，组织被酶解离以分散所需的细胞。最后一步是将分离的肌原前体细胞接种在底物中的 Lamin 上。最终在体外。

肌生成用于显示各种治疗对基因调控和表达变化、蛋白质表达和细胞表型变化的影响。本视频将演示如何从硬骨 Myogenic 前体细胞建立原代培养系统。这种技术的视觉演示是必不可少的，因为某些解离步骤可能难以学习。

适当和充分的解离对于分离足够的细胞沉淀以供以后培养至关重要。首先，准备该程序所需的所有培养基和溶液。接下来，组装组织分离所需的其他物品。

必要时事先高压灭菌。请务必为协助解剖过程的每个人准备额外的材料。手头的其他物品包括 70% 乙醇、天平无菌、50 毫升锥形管和每 5 克要解剖的组织的冰块。

将 25 mL 分离培养基分装到无菌 50 mL 锥形管中。称量并记录质量数后，将试管放入冰上。准备好后，取出一条鱼用于组织解剖，浸入 70% 乙醇中 30 秒，然后将其放在 erla 正后方的防水高压灭菌纸上，使用手术刀做一个浅浅的切口，抓住切口处的皮肤并向尾部拉动以去除鳞片和皮肤。

接下来，从两侧切除鱼的 axel fast 糖酵解白色肌肉。避免位于侧线附近的缓慢氧化红肌。将肌肉隔离、中放并丢弃剩余的鱼。

继续收集组织，直到在解剖过程中获得足够数量的肌肉，确保混合的肌肉组织留在冰上以维持细胞活力。首先，将一管肌肉组织倒入玻璃培养皿中。使用两把手术刀来回切碎组织，直到组织浆液可以轻松去除。

用 25 毫升移液器将组织浆液放回其原始试管中。重复这些步骤，直到所有组织都已机械解离。处理完所有组织后，离心 5 分钟，弃去上清液，用新鲜培养基洗涤组织，然后再进行另一轮离心。

彻底清洗后，悬浮组织并与胶原酶溶液在 18 摄氏度下孵育 60 分钟，轻轻摇晃。在孵育结束时，离心试管以沉淀细胞。洗涤两次后，复苏，将组织悬浮在洗涤介质中。

接下来，研磨组织匀浆，直到它相对容易地从 10 毫升移液器中进出。用 5 毫升移液器重复此过程，然后用连接到注射器的 16 号金属套管再次重复此过程。彻底匀浆后，沉淀组织并倒出上清液。

将组织在解离培养基中重新悬浮，并在 18 摄氏度下孵育 20 分钟。然后，将试管放入离心机中，离心后进行短暂离心。将上清液倒出 4 等体积的分离物中。

培养基应在 4 摄氏度下储存至剩余的颗粒。重复刚刚演示的 trips 和 dissociation 步骤并合并所得的上清液。与之前收集的。

将最终混合物分配到 50 毫升锥形管中并离心。离心后，去除上清液，注意不要干扰细胞。沉淀吸取 2 毫升完全培养基到每个试管中。

为了溶解，将重悬的细胞合并到一个 50 mL 锥形管中。用 1 毫升完全培养基冲洗每支试管。将冲洗液添加到重悬细胞池中。

用金属套管和注射器研磨组织 5 到 10 次。过滤细胞悬液后，加入足量的完全培养基至 50 mL，然后离心。取回细胞，去除上清液并加入 5 毫升完全培养基。

重悬后，取出少量样品以确定活细胞的数量。使用血细胞计数器。从聚 L 赖氨酸处理的板中取出层粘连蛋白溶液。

将细胞稀释至所需浓度后，将它们接种到准备好的板上并密封。将密封板放入设置在适当温度下的冷藏培养箱中。接种后 24 小时：产肌前体细胞或 MPC 应明显附着在层粘连蛋白基质上，同时最初看起来更紧凑。

斑马鱼的 MPC 采用与虹鳟鱼相似的形态。经过 4 天的培养，肌管应在培养后 6 至 9 天内形成。在培养中，MPC 和成肌细胞显示表达 myo D one。

当成肌细胞分化成肌管时，它们将开始表达 myo genin。这些数据显示了使用 BRDU 掺入培养过程中的细胞增殖。看完这个视频后，你应该对如何隔离和培养有一个很好的了解。

来自多种鱼类的生肌前体细胞 在细胞 Monets 中初步发育后。这项技术为研究人员和肌肉生物学探索肌肉生物学和其他生物体和其他末端（如 danios）以及其他两栖动物或两栖动物（如 Axel.Lots）的新途径铺平了道路。