JoVE Science Education
Neuroscience
A subscription to JoVE is required to view this content.  Sign in or start your free trial.
JoVE Science Education Neuroscience
Patch Clamp Electrophysiology
  • 00:00Overview
  • 01:04Principles Behind Patch Clamping
  • 03:20Patch Clamp Configurations
  • 04:43Preparing Micropipettes and Forming a Seal
  • 06:05Whole-cell Patch Clamp Procedure
  • 07:15Applications
  • 09:11Summary

אלקטרופיזיולוגיה של מהדק תיקון

English

Share

Overview

קרום תאי נוירון מאוכלסים ערוצי יונים השולטים בתנועת המטען לתוך ומחוץ לתא, ובכך מווסתים ירי נוירונים. טכניקה שימושית מאוד אחת לחקירת התכונות הביופיסיות של ערוצים אלה נקראת הקלטת מהדק תיקון. בשיטה זו, מדעני מוח מניחים מיקרופיפט זכוכית מלוטשת על תא ומחילים יניקה כדי ליצור חותם התנגדות גבוהה. תהליך זה מבודד “תיקון” קטן של ממברנה המכילה ערוץ יונים אחד או יותר. באמצעות אלקטרודה בתוך micropipette, החוקרים יכולים “להדק” או לשלוט על המאפיינים החשמליים של הממברנה, אשר חשוב לניתוח של פעילות הערוץ. האלקטרודה מאפשרת גם שינויים במתח על פני הממברנה, או זרימת היונים דרך הממברנה, להיות מתועד.

וידאו זה מתחיל בסקירה כללית של העקרונות שמאחורי אלקטרופיזיולוגיה של מהדק תיקון, מבוא לציוד הדרוש, ותיאורים של תצורות התיקון השונות, כולל תאים שלמים, מחוברים לתאים, מחוררים, מבפנים החוצה, ותיקונים חיצוניים. לאחר מכן, השלבים העיקריים של ניסוי מהדק תיקון תא שלם טיפוסי מפורטים, שבו נוצרת עקומת מתח זרם (IV). לבסוף, יישומים של הקלטת מהדק תיקון מסופקים כדי להדגים כיצד המאפיינים הביופיסיים של ערוצי יונים, עירור תאים, ותרכובות נוירואקטיביות מוערכים במעבדות נוירופיזיולוגיות היום.

Procedure

הקלטת מהדק תיקון היא טכניקה שימושית ביותר לחקירת התכונות הביופיסיות של ערוצי היון השולטים בהפעלה העצבית. ההליך כרוך בלחיצת מיקרופיפט זכוכית על תא על מנת לבודד “תיקון” קטן של ממברנה המכילה תעלות יונים אחת או יותר. ההתקנה הניסיונית מאפשרת עוד יותר למדענים “להדק” את הסביבה החשמלית…

Disclosures

No conflicts of interest declared.

Transcript

Tags

Cite This
JoVE Science Education Database. JoVE Science Education. Patch Clamp Electrophysiology. JoVE, Cambridge, MA, (2023).

Related Videos