Avançadas técnicas de microscopia Confocal para estudar interações da proteína-proteína e cinética de lesões do ADN
November 12th, 2017
Microirradiation do laser é uma ferramenta útil para estudos de reparo de ADN em células vivas. Uma abordagem metodológica para o uso de lasers UVA para induzir várias lesões do ADN é mostrada. Otimizamos a um método para microirradiation local que mantém o ciclo celular normal; assim, as células irradiadas prosseguir através de mitose.
O objetivo geral desses experimentos é induzir lesões de DNA usando microirradiação local de células e observar o recrutamento de proteínas envolvidas nos processos de reparo do DNA. Este método pode nos ajudar a entender uma questão muito complexa e profunda, como as células normais e cancerígenas respondem à lesão do DNA. A principal vantagem dessa técnica é que somos capazes de estudar a resposta a danos no DNA em células vivas individuais. A demonstração do procedimento será feita por Sona Legartova, pós-doutoranda e Jana Suchankova, estudante de doutorado do meu laboratório. Para começar, cultive células HeLa em DMAM suplementado com 10% de FBS e antibióticos apropriados. Incubar as células a 37
View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos
Visão Geral
A microirradiação a laser é uma técnica valiosa para investigar mecanismos de reparo de DNA em células vivas. Este estudo apresenta um método otimizado para usar lasers UVA para induzir lesões específicas de DNA, preservando a progressão normal do ciclo celular.
Componentes-Chave do Estudo
Área da Ciência
- Reparo de DNA
- Biologia celular
- Microirradiação a laser
Fundamentos
- Compreender o reparo de DNA é crucial para insights sobre as respostas celulares ao dano.
- A microirradiação a laser permite a indução precisa de lesões de DNA.
- Manter o ciclo celular normal é essencial para um estudo preciso dos mecanismos de reparo.
- Lasers UVA são eficazes na criação de danos localizados no DNA.
Propósito do Estudo
- Otimizar um método para microirradiação local usando lasers UVA.
- Investigar os efeitos das lesões de DNA induzidas na progressão do ciclo celular.
- Melhorar a compreensão dos processos de reparo de DNA em células vivas.
Métodos Utilizados
- Utilização de lasers UVA para microirradiação.
- Monitoramento da progressão do ciclo celular pós-irradiação.
- Avaliação dos mecanismos de reparo de DNA em células irradiadas.
- Comparação do comportamento de células normais e irradiadas.
Principais Resultados
- O método de microirradiação otimizado induziu com sucesso lesões de DNA.
- As células mantiveram a progressão normal do ciclo celular apesar da irradiação.
- Foi alcançada uma avaliação eficaz dos mecanismos de reparo de DNA.
- Os resultados contribuem para a compreensão das respostas celulares ao dano no DNA.
Conclusões
- O método otimizado de microirradiação com laser UVA é eficaz para estudar o reparo de DNA.
- Manter o ciclo celular normal é crucial para resultados experimentais precisos.
- Esta abordagem pode ser aplicada a pesquisas adicionais em danos e reparos do DNA.
Perguntas Frequentes
Chapters in this video
0:05
Title
0:44
Cultivation of HeLa-derived Cell Lines
1:48
Cell Transfection
3:21
Induction of Local DNA Lesions and Confocal Microscopy
4:47
Fluorescence Lifetime Image Microscopy
6:24
FRET Efficiency Using the FLIM-FRET Script
7:48
FRAP Analysis
8:50
Results: Analysis of Recruitment of mCherry-tagged PCNA and -53BP1 at DNA Lesions in HeLa Cells
11:00
Conclusion
