Neuroscience
A subscription to JoVE is required to view this content.
You will only be able to see the first 2 minutes.
The JoVE video player is compatible with HTML5 and Adobe Flash. Older browsers that do not support HTML5 and the H.264 video codec will still use a Flash-based video player. We recommend downloading the newest version of Flash here, but we support all versions 10 and above.
If that doesn't help, please let us know.
Implantation av laminektomi och Ryggmärgs fönster i musen
Chapters
Summary October 23rd, 2019
Please note that all translations are automatically generated.
Click here for the English version.
Detta protokoll beskriver implantation av ett glas fönster på ryggmärgen av en mus för att underlätta visualisering av intravital mikroskopi.
Transcript
Denna metod möjliggör undersökning av proteindynamik in vivo inom det intakta centrala nervsystemet för att ta itu med frågor inom neurovetenskap och immunologi. De främsta fördelarna med detta förfarande är en utmärkt rörelse stabilitet för bild förvärv, kort kirurgisk tid, minskad operatör exponering för gasformiga anestesi, och billiga anpassningsbara backplates. Visuell demonstration av denna metod är kritisk eftersom det är svårt att ta bort benet utan att skada den nära underliggande nervsystemet vävnad under laminectomy stegen i förfarandet.
Innan du börjar proceduren, använd 3D-datorstödd designprogramvara för att skapa en modell till de angivna dimensionerna. Så vi har ett föremål, som är det tredimensionella objektet, att det är vad vi kan börja med. Vad jag kan sedan göra är att vi kan sätta inställningar på det för utskriftsversionen.
Så om jag öppnar Redigera detta, gå in i Avancerat, öppna ett fönster som gör det möjligt för mig att titta på alla dessa inställningar. Ställ in munstyckestemperaturen till 205 grader Celsius, sängtemperaturen till 45 grader Celsius och utskriftshastigheten till 45 millimeter per sekund på en 3D-skrivare. Använd en 0,4 millimeter varmt ent munstycke och en 0,2 millimeter lager höjd för att skriva ut ryggplattorna.
Sedan bedöma de tryckta tillbaka plattorna visuellt för deras strukturella integritet. Strukturella bruttofel indikerar tryckfel. När ryggplattorna är klara, placera huvudet på en åtta till 12 veckor gammal sövd mus på en värmedyna mellan öronstängerna på en kirurgisk hindra och applicera salva på djurets ögon.
Efter att ha bekräftat en brist på svar på tå nypa, använd ett antal 11 blad för att göra en 1,5 centimeter rostral till caudal mittlinjen snitt över den nedre bröst övre ländryggen regionen och separera huden från bukhinnan. Använd forceps för att skala tillbaka eventuell kvarvarande transparent bindväv under huden för att exponera den ytliga muskulaturen. Förskjut musklerna med ett skum kirurgiskt spjut tillsammans med återstående djupare muskulös av målet kotan.
För att skapa en sits för ryggplattan, rensa muskeln från den bakre aspekten av bröst 11 och den främre aspekten av bröst 13. Använda forceps för att ta bort de återstående muskeln från senorna som behövs. När alla muskler har tagits bort, försiktigt skära senor med tärna tills tillräckligt utrymme för visualisering och manipulera ryggmärgen uppnås.
Bekräfta att dura mater av intervertebral utrymmet, den halvtransparenta laminärbenet, den centrala ytliga blodkärl under benet, och den främre utstrålande artären är tydligt synliga. Blöt regionen med varm konstgjord cerebral spinal vätska och använda en mikro-borr för att tunna laminärbenet med hjälp av raka slag parallellt med den långa axeln av ryggmärgen. Försiktigt gripa tag i ytliga spinous processen med täppor, lyft kotan.
Benet ska lyfta bort lätt. Använd nummer fyra tövingar för att rensa bort eventuella benskärvor, kontrollera eventuella blödningar med ett kirurgiskt spjut och försiktigt stadigt tryck vid behov. Skölj sedan vävnaden med varm artificiell cerebral spinalvätska.
För täckglas implantation, försiktigt tillämpa en tre millimeter borosilikat täckglas till den exponerade sladden. Använd en liten spatel för att applicera 39 grader Celsius värms 2%agaros till kanten av glaset och tillåta kapillär åtgärd för att dra agarose under täckglaset yta. Applicera vävnadslim på de exponerade beniga artikulära processerna av den intakta intilliggande ryggkotan vid bröstnivån 11 och 13 ryggradskotor.
Applicera ytterligare vävnadslim i en ring runt laminektomistället över den intilliggande senan och tvärgående processen. Därefter använder en ny spatel för att tillämpa tandcement blandat med accelerant på vävnaden självhäftande lagret och placera en ryggplatta på operationsfältet centrerad över locket glasfönstret. Tillämpa flera tunna lager av tandcement resulterar i en starkare ryggplatta vidhäftning, men se till att placera tillbaka plattan snabbt innan dentala cement börjar torka.
Efter att den tandcement att bota i 10 minuter, fyll i den inre basen och undersidan av ryggen plats med ytterligare lim. Att applicera dentalacementet i tunna lager kan bidra till att minska risken för cementspridning till täckglaset och agaros, vilket kan äventyra hela protokollet. När tandcement har torkat, applicera en kluven ryggplåtshållare till lämpligt läge över fönstret och skruva fast ryggplattan i ryggplåtshållaren.
Applicera sedan koksaltlösning på ryggplattan för att testa för läckage. Djuret och den kirurgiska plattformen kan sedan överföras till den optiska tabellen av en två fotonmikroskop för avbildning genom locket glasfönstret. I detta representativa experiment, var EGFP positiva claudin-5 visualiseras inom fluorescently märkt snäva knutpunkter i hela en Vaskulär plexus.
Den tydliga avstning av de snäva knutpunkter strukturerna i Z-projektionen anger att minimal XY bild förskjutning produceras efter en lyckad laminectomy, fönster placering och tillbaka plattan implantation. Medan du försöker detta förfarande är det viktigt att komma ihåg att denna mikrokirurgi är svårt och kan ta tid att bemästra. Men en gång behärskar, denna operation kan utföras i cirka 30 minuter.
Efter denna procedur kan andra metoder, som två fotonmikroskopi och in vivo bildframställning, utföras för att svara på ytterligare frågor om neurovaskulära remodeling och andra sjukdomsprocesser som involverar ryggmärgen.
Related Videos
You might already have access to this content!
Please enter your Institution or Company email below to check.
has access to
Please create a free JoVE account to get access
Login to access JoVE
Please login to your JoVE account to get access
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Please enter your email address so we may send you a link to reset your password.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Your JoVE Unlimited Free Trial
Fill the form to request your free trial.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Thank You!
A JoVE representative will be in touch with you shortly.
Thank You!
You have already requested a trial and a JoVE representative will be in touch with you shortly. If you need immediate assistance, please email us at subscriptions@jove.com.
Thank You!
Please enjoy a free 2-hour trial. In order to begin, please login.
Thank You!
You have unlocked a 2-hour free trial now. All JoVE videos and articles can be accessed for free.
To get started, a verification email has been sent to email@institution.com. Please follow the link in the email to activate your free trial account. If you do not see the message in your inbox, please check your "Spam" folder.
