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Reconocimiento de objetos nuevos y ubicación del objeto conductual en ratones en un presupuesto
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Summary November 20th, 2018
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Aquí proporcionamos un protocolo que incluye instrucciones completa para el establecimiento económico de murino objeto ubicación y objeto novedoso reconocimiento pruebas de comportamiento, incluyendo el diseño, costo y construcción de equipo necesario así como ejecución de pruebas de comportamiento, recolección de datos y análisis.
Transcript
Este método puede ayudar a responder preguntas clave sobre la regulación de la memoria. Por ejemplo, determinamos el papel de proteínas específicas en la memoria probando ratones noqueadores transgénicos en estas tareas. La principal ventaja de esta técnica es que es una forma rápida y rentable de realizar pruebas de memoria en cualquier laboratorio.
La demostración de la construcción de la arena es crítica, ya que la soldadura con disolvente sólo producirá resultados fuertes si se realiza con cuidado. Comience por adquirir cinco láminas de acrílico, cemento acrílico y un aplicador hipoativo calibre 16. Retire el recubrimiento protector del papel de las láminas de acrílico.
A continuación, se ajuste en seco a todos los materiales para confirmar que los tamaños son correctos. A continuación, ensamble y cargue la jeringa con cemento acrílico. Alinee el borde largo de un muro exterior con el borde superior de la base y asegúrese de que son perpendiculares entre sí utilizando una combinación o un cuadrado maquinista.
A continuación, utilice la jeringa para aplicar un cordón pequeño y constante de cemento directamente en la esquina de las dos piezas que se unen. Mantenga las dos piezas en su lugar durante cinco minutos hasta que se establezcan inicialmente. Repita los mismos pasos para fijar la otra pared exterior a la base.
A continuación, unir dos paredes interiores, una a la vez, la base con cemento acrílico. Por último, utilice la jeringa para aplicar un cordón pequeño y constante de cemento directamente a la esquina que ahora está formado por la pared exterior y la pared interior. Comience la sesión de habituación dividiendo los ratones en grupos de cuatro, y albergándolos en jaulas individuales de retención limpia.
A continuación, lleve un grupo de ratones a la sala de pruebas y déle que se aclimaten durante al menos 30 minutos. Después de la aclimatación, comience a grabar el video. Coloca cada ratón en la arena frente a las paredes de la esquina de liberación, y deja que los ratones exploren las arenas libremente durante seis minutos.
A continuación, deje de grabar el vídeo y devuelva los ratones a sus jaulas de sujeción limpias durante el intervalo entre pruebas. Limpie todas las arenas con métodos de limpieza recomendados por las instalaciones de animales, como limpiar con 70% de etanol para minimizar las señales olfativas. Finalmente, después de completar un total de tres sesiones de habituación, devolver todos los ratones a sus jaulas de origen.
Después de 24 horas, lleve el mismo grupo de ratones a la sala de pruebas y déles que se aclimaten a la sala de pruebas durante al menos 30 minutos, como se hizo antes de las sesiones de habituación del día anterior. Lleva a cabo la prueba de entrenamiento utilizando dos objetos colocados en la arena. Fije objetos con cinta adhesiva de doble cara de seis por seis centímetros de distancia de dos esquinas que no sean de liberación, de modo que se contrarresten en la arena.
Permita que los ratones investiguen la arena y los objetos libremente durante 10 minutos. A continuación, detenga la grabación de vídeo. Coloque los ratones de nuevo en sus jaulas limpias durante 20 minutos y limpie las áreas con etanol.
A continuación, para realizar la tarea de ubicación de objetos OLT, mueva uno de los objetos utilizados en la versión de prueba de entrenamiento a una nueva esquina sin liberación y coloque el objeto a seis centímetros de cada muro de esa esquina con cinta adhesiva de doble cara. Repita la misma grabación de vídeo de los ratones en el área durante 10 minutos, como se describió anteriormente. Por último, para realizar la novedosa tarea de reconocimiento de objetos NORT, reemplace el objeto que no se movió durante el OLT por un objeto novedoso y coloque el objeto novedoso a seis centímetros de las dos paredes de la esquina con cinta adhesiva de doble cara.
Repita la misma grabación de vídeo de los ratones en el área durante 10 minutos, como se describió anteriormente. Durante el OLT, la memoria para la ubicación del objeto se refleja en un grupo de ratones que pasan, en promedio, significativamente más tiempo con un objeto después de que se ha movido. Esto también se puede representar como un aumento en el índice de discriminación.
En el NORT, la memoria para la ubicación del objeto se refleja en un grupo de ratones que pasan, en promedio, significativamente más del 50% del tiempo de investigación con el objeto novedoso o muestran un índice de discriminación significativamente mayor que cero. La selección de objetos para los que los ratones no tienen preferencia inherente es clave. Por ejemplo, en una prueba piloto con un tamaño de muestra de cuatro, los ratones mostraron una tendencia hacia el gasto de menos del 50% del tiempo de investigación con el objeto A cuando se emparenó con el objeto B.Cuando el objeto A se utilizó entonces como el objeto novedoso en un NORT, con un tamaño de muestra mayor de 16, los ratones pasaron significativamente menos del 50% del tiempo de investigación con el objeto A.Estos datos sugieren aversión inherente al objeto A.Durante este procedimiento, Durante este procedimiento, , es importante recordar limpiar a fondo todos los objetos y arenas entre el uso.
En este método, la investigación de objetos puede ser puntuada manualmente por los investigadores o utilizando software comercial. El software tiene costos iniciales más altos, pero, una vez calibrado, puede ahorrar tiempo y recursos financieros a largo plazo.
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