Neuroscience
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Établissement de l’infarctus aigu des pontines chez les rats par stimulation électrique
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Présenté ici est un protocole pour établir l’infarctus aigu de pontine dans un modèle de rat par stimulation électrique avec une seule impulsion.
Transcript
Nous fournissons un protocole pour établir l’infarctus dans un pons de rat. Ce modèle pontin de rat d’infarctus a été facilement exécuté, facilement reproduit, et modèle fortement réussi. La stimulation électrique pourrait être utilisée pour fabriquer de l’infarctus dans n’importe quelle autre région du cerveau comme le thalamus.
Les personnes qui veulent exécuter ce modèle devraient apprendre l’autonomie pontine avant l’expérience. Avant la chirurgie, peser les rats et évaluer leurs performances neurologiques en fonction des tests comportementaux tels que décrits dans le texte d’accompagnement. Préchauffer le coussin chauffant à 37 degrés Celsius immédiatement avant l’anesthésie et attacher la perceuse crânienne au support sur le cadre stéréotaxique.
Confirmez un manque de réponse au réflexe de pédale dans le premier rat anesthésié et montez le rat sur le cadre stéréotaxique en position couchée sur le coussin chauffant. Placez les barres d’oreille au-dessus du conduit auditif pour fixer la tête, en prenant soin que le crâne est maintenu à l’horizontale pour éviter tout faussation de l’injection. Appliquer de l’onguent sur les yeux de l’animal et utiliser un micro rasoir pour enlever les cheveux du crâne.
Utilisez un marqueur pour tracer une ligne de trois centimètres le long de la ligne médiane du crâne de la ligne du canthus latéral bilatéral à 0,5 centimètre derrière la fontanelle postérieure et utiliser un scalpel pour faire une incision de ligne médiane le long de la ligne marquée. Utilisez un coton-tige pour enlever tout sang et placer un morceau de ruban chirurgical de chaque côté du rabat de la peau pour exposer le crâne. Utilisez un nouvel écouvillon imbibé de chlorure de sodium à 0,9 % pour enlever délicatement tout tissu conjonctif du crâne et localiser le bregma.
Utilisez un stylo marqueur à pointe fine pour indiquer le point central du bregma comme point d’origine, placez la perceuse à six millimètres antérieur postérieur, deux millimètres latéraux médiaux. Utilisez la perceuse pour effectuer soigneusement une craniotomie d’un millimètre de diamètre. Ensuite, remplacé la perceuse par une sonde de calibre 22 par une gaine isolée avec la pointe placée deux millimètres au-dessus de l’extrémité proximale de la gaine.
Insérez les feuilles sept millimètres dans le cerveau et avancez la sonde le long de la gaine jusqu’à ce que le sommet de la sonde soit de neuf millimètres sous la surface du cerveau. Connectez les électrodes à un stimulateur électrique et connectez l’anode à la sonde. Ensuite, connectez-vous à la cathode à l’oreille du rat.
Ensuite, allumez le stimulateur électrique et réglez la largeur de l’impulsion unique à 4 050 millisecondes, la tension à 50 volts et le courant à quatre milliampes. Laissez la sonde en position pendant cinq minutes après la stimulation avant d’enlever l’appareil du cerveau. Couvrir la craniotomie de ciment osseux et laisser sécher le ciment avant d’utiliser des filaments de suture en polyamide de 4,0 pour fermer la plaie.
Après trois ou quatre points de suture, attachez 2-1-1 noeuds chirurgicaux standard. Puis injecter intraperitoneally le rat avec 250 microlitres de pénicilline et surveiller le rat toutes les 15 minutes jusqu’à ce qu’il soit complètement éveillé avant de retourner l’animal dans sa cage. Dans cette analyse, six animaux ont été soumis à la chirurgie comme démontré et six animaux ont été traités comme témoins.
Les tranches de cerveau dans ces images ont été dérivées d’un rat par groupe. Le balayage de MRI a indiqué que l’infarctus était situé dans la base des pons imitant des infarctus antélatéraux dans les patients humains. Parce qu’une gaine isolée a été employée, l’infarctus n’a pas été observé dans le cortex, le cervelet, ou le midbrain.
Les images pondérées de diffusion ont également indiqué l’infarctus aigu de pontine. La coloration de TTC a été employée pour confirmer l’infarctus 24 heures après chirurgie. Comme prévu, le volume d’infarctus était significativement plus élevé dans le groupe de chirurgie comparé au groupe témoin.
Des scores comportementaux ont été mesurés avant et après chirurgie. Par rapport au groupe témoin, les rats avec un infarctus pontin ont fait le tour vers la gauche. Des différences significatives ont été observées dans le Longa, berderson, placement de membre, équilibre de faisceau, et scores d’essai somatosensory d’enlèvement adhésif entre les diatribes avec l’infarctus pontine et les rats témoins de groupe.
N’importe quelle zone spécifique du cerveau va être détruite par la stimulation électrique.
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