Biology
A subscription to JoVE is required to view this content.
You will only be able to see the first 2 minutes.
The JoVE video player is compatible with HTML5 and Adobe Flash. Older browsers that do not support HTML5 and the H.264 video codec will still use a Flash-based video player. We recommend downloading the newest version of Flash here, but we support all versions 10 and above.
If that doesn't help, please let us know.
Isolering av epitelceller från mänsklig tandsäck
Chapters
Summary November 5th, 2021
Please note that all translations are automatically generated.
Click here for the English version.
Tandfollikeln innehåller en epitelpopulation och mesenkymala celler. Epitelpopulationen valdes från den heterogena tandsäckscellpopulationen genom att tillhandahålla ett distinkt odlingsmedium. Epitelial celler överlevde och bildade kolonier i ett serumfritt medium.
Transcript
Detta protokoll visar en förbättrad metod för att upphandla mänskliga tandläkare epitelial celler. Det är svårt att identifiera den aggregerade cellpelleten under procedurerna. Var försiktig när du hanterar supernatant för att förhindra förlustcellpopulationerna.
Till att börja med skörda tandsäckar under kirurgisk extraktion av påverkade tredje molarer. Starta cellisoleringsprocedurer eller lagra tandsäckarna vid fyra grader Celsius i DPBS med 3% penicillin-streptomycin. För att tvätta tandsäckarna, håll tandsäcken med pincett och placera den i tvättrör 1.
Skaka den försiktigt 10 till 15 gånger. Ta ut den och placera den i rör 2. Återigen skaka den 10 till 15 gånger.
Slutligen, ta ut den och placera den i rör 3 och skaka den sedan. Efter tvätt tre gånger, placera tandfollikeln i en 60 millimeters odlingsfat. Hacka vävnaden med vävnadssax tills tandsäcken har ett pulpy eller squishy utseende.
Använd en liten sidodel av odlingsskålen för att minimera vävnadsförlusten. Blanda en milliliter vardera av kollagenas typ 1 och proteaslösning i ett koniskt rör på 15 milliliter. Överför den malda vävnaden till det koniska röret på 15 milliliter, skaka det försiktigt och inkubera det i en timme vid 37 grader Celsius.
Tillsätt fem milliliter trypsin-EDTA till röret. Skaka den och inkubera i 15 minuter vid 37 grader Celsius. Förbered keratinocytmedium som innehåller keratinocyt serumfritt medium och 10% fetalt bovinserum.
Tillsätt tre milliliter keratinocytmedium i ett nytt koniskt rör på 50 milliliter. Placera en 40 mikrometer sil ovanpå detta rör. Aspirera sedan supernatanten från röret som innehåller vävnaden med en 10 milliliter serologisk pipetter och passera den genom silen.
Överför den insamlade suspensionen till ett koniskt rör på 15 milliliter. Centrifugera röret och ta bort supernatanten. Tillsätt sedan tre milliliter keratinocyt serumfritt medium.
Centrifugera i ytterligare tre minuter och ta bort supernatanten. Plätera encellspopulationen till en 60 millimeters odlingsskål med det keratinocytserumfria mediet. Behåll odlingsrätten med en slutlig volym på fem milliliter i en fuktad atmosfär på 5% koldioxid vid 37 grader Celsius.
Celler med epitelial morfologi uppträdde inom sju till 10 dagar efter plätering enstaka cell populationer. Antalet kullerstensformade epitelceller varierade från ett till tio vid tidpunkten för uppkomsten och cellerna expanderade till kolonier med tiden. Det viktigaste steget är att hacka tandsäcken till små partiklar.
Det förbättrar separationen av enstaka celler från follikelvävnad. Mesenkymala celler kan isoleras från mänsklig tandsäck. Serum som innehåller kulturmiljö väljer mesenkymala celler och hämmar epitelial tillväxt från encelliga populationer.
Detta protokoll ger metoden att upphandla de mänskliga tandepitetelcellerna. Dental follikel-härledda epitelial celler kan användas för studier av tandläkare epitelial-mesenchymal interaktioner.
Related Videos
You might already have access to this content!
Please enter your Institution or Company email below to check.
has access to
Please create a free JoVE account to get access
Login to access JoVE
Please login to your JoVE account to get access
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Please enter your email address so we may send you a link to reset your password.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Your JoVE Unlimited Free Trial
Fill the form to request your free trial.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Thank You!
A JoVE representative will be in touch with you shortly.
Thank You!
You have already requested a trial and a JoVE representative will be in touch with you shortly. If you need immediate assistance, please email us at subscriptions@jove.com.
Thank You!
Please enjoy a free 2-hour trial. In order to begin, please login.
Thank You!
You have unlocked a 2-hour free trial now. All JoVE videos and articles can be accessed for free.
To get started, a verification email has been sent to email@institution.com. Please follow the link in the email to activate your free trial account. If you do not see the message in your inbox, please check your "Spam" folder.
