Anvendelse af optisk kohærenstomografi på en musemodel af retinopati

Optisk kohærenstomografi anvendes i vid udstrækning i den kliniske diagnose af forskellige nethindesygdomme, men det er stadig udfordrende at anvende i musemodeller. Denne protokol beskriver, hvordan man styrer OLT-teknikken hos dyr. Denne teknologi kan anvendes på dyr med forskellige øjenkugler.

Det muliggør ikke-invasiv, høj opløsning og retinal tværsnitsbilleddannelse i realtid sammen med kvantitative målinger af retinal tykkelse. OCT hjælper med retinopati diagnose ved at identificere læsionsfunktionerne såsom placering, rækkevidde, form og størrelse af læsionerne samt alle mistænkte retinale abnormiteter såsom retinal neovaskularisering. Denne protokol gælder for dyreforsøg eller fundussygdomme, herunder og nethindesygdomme.

Før du starter proceduren, skal du være forberedt og følge protokollen trin for trin. Udfør eksperimentet, når dyret er bedøvet. Man skal være i stand til at få OCT-billeder af god kvalitet efter lidt øvelse.

For at begynde skal du tænde computeren og starte softwaren. Klik på testprogramknappen for at fuldføre testprogrammet. Tænd derefter termostaten og forvarm den til 37 grader Celsius.

Efter programtesten skal du starte OCT-modulproceduren. Opret et nyt emne, og udfyld museoplysningerne. Forvarm derefter det elektriske tæppe og dæk det med kirurgiske håndklæder.

Placer den bedøvede mus på den elektriske tæppeplatform og overtræk straks begge øjne med medicinsk natriumhyaluronatgel. Placer derefter en 100D kontaktlinse på musens hornhinde med den konkave side, der berører natriumhyaluronatgelen på hornhindeoverfladen. Placer derefter musen på cSLO-enhedens lille dyreplatform med konstant temperatur.

Juster kontaktlinsens vinkel med tang for at holde pupillen i midten af linsen. Finjuster justeringerne af hovedet for at få øjet til at vende lige frem. Klik på OCT-knappen, vælg musemodulet, og start cSLO-programmet.

Brug derefter betjeningshåndtaget til langsomt at flytte den forudindstillede linse mod kontaktlinsen. Foretag yderligere justeringer for at justere billedet af den forreste bageste pol og centrere den ved synsnervehovedet. Start derefter OCT-programmet, og klik på statuslinjen op og ned, indtil OCT-billedet vises.

Juster minimumsområdet mellem 0 og 20 og det maksimale interval mellem 40 og 60. Juster derefter den forudindstillede linseafstand og positionsretning, indtil der opnås et ideelt OCT-billede. Vælg scanningspositionen ved at flytte standardlinjen i cSLO’en.

Klik derefter på gennemsnit for at overlejre cSLO- og OCT-billedsignalet, og klik på optageknappen for at erhverve SLO OCT-billedet. Efter eksperimentet skal du fjerne 100D-kontaktlinsen og anvende levofloxacin øjengelen for at beskytte hornhinden. For retinal stratificeringskorrektion skal du klikke på indlæsningsundersøgelse på OCT-grænsefladen og kalde OCT-billederne ud af et pop op-vindue.

Dobbeltklik derefter på billedet i mediebeholderen for at få det vist på skærmen. Klik derefter på lagdetektion for at fuldføre automatisk lagdeling på nethinden. Når du har valgt skillelinjen på begge sider af det lag, der er forberedt til analyse, skal du klikke på rediger lag for at justere afstanden og begrænse området.

Rediger derefter linjen ved at flytte den røde cirkel. For at måle nethindelamineringstykkelsen skal du klikke på knappen Målemarkør og vælge skillelinjen for det lag, der skal analyseres, for at få vist grænsen for laget på OCT-billedet. Vælg derefter Opret forbindelse med lag og hold forbindelsen på farten.

Vælg derefter det område, der skal vises resultaterne, og klik på den position, der skal analyseres på OCT-billedet for at få målelinjen til at vises. Klik på den næste kolonne for efterfølgende målinger og for at afsløre de tidligere data. Hvis du vil måle fuld retinal tykkelse, skal du vælge linje et og linje syv på listen i øverste højre hjørne.

Derefter måles fire værdier ved 200 mikrometerafstandsintervaller på den vandrette lineal fra udseendet af retinal struktur ved kanten af den optiske papilla. OCT-billeder af C57BL/6-mus viste forskellige nethindelager med klar afgrænsning. I modsætning hertil viste Vldlr knockout-mus unormale hyperreflekterende læsioner.

OCT-billederne viste nogle midterste reflekterende bånd på nethindefladerne på Vldlr-knockoutmusene. Disse bånd klæbede til retinalfartøjet og var i overensstemmelse med OLT-egenskaberne ved ufuldstændig glasagtig løsrivelse. En hyperreflekterende læsion optrådte på det subretinale rum og spredte sig til det ydre nukleare lag, men brød ikke gennem det ydre plexiformlag.

OCT-udseendet af denne læsion var i overensstemmelse med patologiske fund. Det patologiske afsnit viste, at neovaskularisering brød gennem retinalt pigmentepitellaget, fotoreceptorens indre-ydre segmenter og den eksterne begrænsende membran, der invaderede det ydre nukleare lag, men ikke det ydre plexiformlag. Et andet bånd af hyperreflekterende læsion, der er placeret i det subretinale rum, involverede ikke det ydre nukleare lag.

I overensstemmelse med patologiske fund brød denne subretinale neovaskularisering ikke gennem den ydre begrænsende membran. Sammenligning af retinaltykkelsen af højre øje i de tidsmæssige, nasale, overlegne og ringere retninger af den bageste polare mellem de to grupper afslørede, at retinal tykkelsen af Vldlr knockout mus var signifikant lavere end for C57BL / 6J musene. Når du udfører protokollen, skal du placere en 100D-kontaktlinse korrekt på hornhinden og derefter justere billedpositionen.

Vælg scanningsplaceringen, og overlejr billedet, før du optager. Efter denne procedure er forreste segment OCT mulig, hvilket kræver ændring af afstanden mellem den forudindstillede linse og hornhinden. Det kan vise hornhinden, det forreste kammer, iris, ciliary krop og linse.

Denne teknik giver et vigtigt redskab til retinopatiforskning i smådyrsmodeller, der fremmer ikke-invasiv påvisning og måling af retinopati i grundforskning.