Developmental Biology
A subscription to JoVE is required to view this content.
You will only be able to see the first 2 minutes.
The JoVE video player is compatible with HTML5 and Adobe Flash. Older browsers that do not support HTML5 and the H.264 video codec will still use a Flash-based video player. We recommend downloading the newest version of Flash here, but we support all versions 10 and above.
If that doesn't help, please let us know.
Generatie van een muis kunstmatig decidualisatiemodel met ovariëctomie voor endometriumdecidualisatieonderzoek
Chapters
Summary July 27th, 2022
Please note that all translations are automatically generated.
Click here for the English version.
Hier beschrijven we de methode voor het genereren van een kunstmatig decidualisatiemodel met behulp van de ovariëctomische muis, een klassiek endometriumdecidualisatie-experiment op het onderzoeksgebied van endometriumdecidualisatie.
Transcript
Aantasting van de decentralisatie leidt tot virus van endometriumstoornissen zoals bij sterfte, een terugkerende miskraam. Deze methode biedt een goed en betrouwbaar diermodel voor de studie van endometriumdecentralisatie. Dit kunstmatige decentralisatiemodel met ovariëctomie kan de invloed van angelina op hormonen vermijden, wat vaak zeer reproduceerbare resultaten kan opleveren met kleine verschillen binnen de groep.
Om te beginnen met het steriliseren van de chirurgische instrumenten met een hoge temperatuur en hoge druk sterilisator een dag voor de operatie. Breng de beschermende oogzalf aan op de oogbollen om uitdroging tijdens de anesthesie te voorkomen. Start de operatie wanneer muizen volledig verdoofd zijn.
Plaats de muizen in buikligging op het operatieoppervlak en scheer het haar op de rug nadat je ze hebt bevochtigd met een sopje. Desinfecteer de huid met 70% ethanol. Zoek de operatie-incisieplaats op 0,5 centimeter aan de bovenrand van de dijwortel van beide achterpoten evenwijdig aan de wervelkolom.
Neem de incisieplaats als het midden en desinfecteer het incisiegebied drie keer met jodophor. Maak een longitudinale incisie van ongeveer 0,5 tot één centimeter met een schaar. Snijd de fascia en scheid passief de spieren met een pincet.
Zoek een stuk van het witte vetkussen in het incisieveld dicht bij de onderpool van de nier door de dunne spierlaag. Klem de vetmassa vast met hemostatische clips en trek de eierstok omwikkeld door het vetkussen uit de incisie. Klem de overgang van de eierstok en eileiders vast met een gebogen pincet en verwijder de eierstok langs de ovariële pedikel met een schaar.
Stop het bloeden met behulp van een elektrocoagulatiepen of een naald van een spuit van één milliliter die op de alcohollamp wordt verwarmd. Spoel de chirurgische incisie met een normale zoutoplossing om weefselhechting te voorkomen. Gebruik een hechting van 4-0 om respectievelijk de spier en de huid te zaaien en desinfecteer de chirurgische incisie opnieuw met jodofor.
Plaats de muizen in buikligging in de kooi en reanier ze in een couveuse van 25 graden Celsius. Voorzien van een lichtbron en ventilatiesysteem voor ongeveer twee uur. Let na de operatie op de muizen.
Zet ze alleen terug op de oorspronkelijke voederplaats totdat ze volledig herstellen en geef ze voldoende water en voedsel. Injecteer subcutaan 100 nanogram oestrogeen in 50 microliter sesamolie in elke muis gedurende drie dagen gevolgd door twee dagen rust. Injecteer een milligram progesteron en 10 nanogram oestrogeen in 50 microliter sesamolie in elke muis gedurende nog eens drie dagen.
Bedien de muizen om het kunstmatige residualisatiemodel zes uur na de derde gecombineerde injectie met oestrogeen progesteron te induceren. Zoek de baarmoederhoorn aan de onderkant van de eileiders en injecteer 20 microliter sesamolie langzaam langs de baarmoederhoorn. Duw het weefsel terug, hecht de incisie en laat de muis herstellen.
Fixeer drie tot vijf milliliter van het baarmoederweefsel met 10% formaline ingebed in paraffine en snijd ze. Bevlek de secties met hematoxyline en eosine om de morfologische veranderingen waar te nemen. Sluit nog eens drie tot vijf millimeter van het baarmoederweefsel in optimale snijtemperatuur in, bevries in vloeibare stikstof en bewaar in een vriezer van min 80 graden Celsius.
Bevroren sectie het weefsel in 10 micrometer en detecteer alkalische fosfatase-activiteit in het baarmoederweefsel door de Azo-koppelingsmethode. De algemene morfologie van de kunstmatige gedecentraliseerde baarmoeder van muizen geïnduceerd door olie ligt dichter bij die van de baarmoeder tijdens de zwangerschap. Het baarmoederlichaam wordt dik en de baarmoederholte wordt kleiner dan de niet-geïnduceerde kant.
Het volume en gewicht van de geïnduceerde baarmoederhoorn zijn aanzienlijk hoger dan die van de niet-geïnduceerde kant. Hematoxyline en eosine kleuring van het baarmoederweefsel toonde aan dat de klieren verdwijnen en de eindendometriumstromale cellen op de geïnduceerde gescheurde gedifferentieerd in grote ronde cytoplasmatische en meerkernige decidual cellen met onduidelijke celgrenzen. De niet-geïnduceerde zijsecties tonen de morfologie van het endometriumweefsel onder een normale fysiologische toestand.
Het resultaat van de Azo-koppelingsmethode toonde aan dat het alkalische fosfatasegehalte van de olie-geïnduceerde zijde significant hoger was dan dat van de niet-geïnduceerde zijde. De QPCR-resultaten toonden aan dat de mRNA-expressie van PRL-8-A-2, ALPL en IGFBP-1 in de geïnduceerde hoorn significant hoger was dan die in de niet-geïnduceerde, wat suggereert dat olie kunstmatige decentralisatie bij muizen kan induceren. Homo-suppletie is een langdurig proces dat speciale aandacht vereist, besmetting tussen homo's, wat de sleutel tot succes is.
Op basis van dit model kan baarmoederhoorninjectie van Adenovirus worden uitgevoerd die het relevante mechanisme van specifieke moleculen die de residualisatie reguleren, kan bestuderen.
Related Videos
You might already have access to this content!
Please enter your Institution or Company email below to check.
has access to
Please create a free JoVE account to get access
Login to access JoVE
Please login to your JoVE account to get access
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Please enter your email address so we may send you a link to reset your password.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Your JoVE Unlimited Free Trial
Fill the form to request your free trial.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Thank You!
A JoVE representative will be in touch with you shortly.
Thank You!
You have already requested a trial and a JoVE representative will be in touch with you shortly. If you need immediate assistance, please email us at subscriptions@jove.com.
Thank You!
Please enjoy a free 2-hour trial. In order to begin, please login.
Thank You!
You have unlocked a 2-hour free trial now. All JoVE videos and articles can be accessed for free.
To get started, a verification email has been sent to email@institution.com. Please follow the link in the email to activate your free trial account. If you do not see the message in your inbox, please check your "Spam" folder.
