Biology
A subscription to JoVE is required to view this content.
The JoVE video player is compatible with HTML5 and Adobe Flash. Older browsers that do not support HTML5 and the H.264 video codec will still use a Flash-based video player. We recommend downloading the newest version of Flash here, but we support all versions 10 and above.
If that doesn't help, please let us know.
Functional Site-Directed Fluorometry in Native Cells to Study Skeletal Muscle Excitability
Functional Site-Directed Fluorometry in Native Skeletal Muscle Cells
CaV1.1, חבר בתעלות היונים מגודרות המתח, כולל ארבעה חיישני מתח נפרדים. ראיות מצביעות על כך שחיישני מתח מסוימים תורמים יותר להפעלת קולטן ריאנודין או לזרם סידן. אנו שואפים להיות מסוגלים לזהות את התפקיד המדויק של כל חיישן מתח בצימוד עירור-התכווצות והפעלת תעלת סידן.
צימוד עירור-התכווצות נחקר מאז תחילת שנות ה-50, אך הפרטים המולקולריים של האופן שבו תהליך זה מתרחש עדיין אינם ידועים. ההתקדמות האחרונה במבנה המיקרוסקופי של הצירו-אלקטרונים של התעלה, אפיון חלבון העזר CaV1.1 החדש, גילוי גרסת השחבור החלופית של התעלה וזיהוי מוטציות גורמות למחלות הציתו מחדש את העניין בתחום זה. טכניקות רבות משמשות בתחום שלנו, החל מאלקטרופיזיולוגיה קלאסית וביולוגיה מולקולרית ועד טכניקות חדשניות יותר כגון מיקרוסקופיית אלקטרונים קריו-אלקטרונים, סימולציה דינמית מולקולרית, פירוק חלבונים ממוקד ופלואורומטריה פונקציונלית מכוונת אתר, כמו גם תאים מהונדסים או מודלים של בעלי חיים.
נכון לעכשיו, הדלק עומד בפני מספר אתגרים ניסיוניים. בשרירי שלד, תנועה נכונה ותקשורת בין CaV1.1 ו-RyR1, יחד עם חלבונים רגולטוריים רבים, חיוניים לתמיכה בצימוד עירור-כיווץ. השיטות לחקור ישירות אינטראקציות חלבון-חלבון אלה בין CaV1.1 ו- RyR1 חסרות או חלקיות.
מעבדתו של ד"ר מרטין שניידר עובדת על צימוד עירור-התכווצות מזה עשרות שנים, ומאפיינת מנגנוני חישת מתח ב- CaV1.1, שחרור סידן ואירועי שחרור סידן מקומיים, המכונים ניצוצות סידן. לאחרונה, המעבדה שלנו מיישמת טכניקות אופטיות חדשות כדי לחקור שלבים שונים של צימוד עירור-כיווץ ותנועת חיישן מתח בתאי שריר בוגרים מתפקדים. בעוד שזה נעשה בעבר במערכת ביטוי הטרולוגית, הפרוטוקול שלנו מאפשר כעת לעקוב אחר שינויים קונפורמטיביים בחיישני מתח CaV1.1 במהלך פוטנציאל פעולה מופץ בסביבה הטבעית שלו.
הטכניקה החדשה שלנו תאפשר לנו לחקור את התנועה המדויקת של חיישן המתח הדרוש לצימוד עירור-כיווץ. אנו רוצים לדעת אילו שאריות מטען בכל S4 הן קריטיות לתפקודו, או בדיוק כל טרנסלוקציה של S4, וכל הטרנסלוקציה קשורה לפתיחת CaV1.1 או להפעלת קולטן ריאנודין.
Tags
ביולוגיה גיליון 196Related Videos
You might already have access to this content!
Please enter your Institution or Company email below to check.
has access to
Please create a free JoVE account to get access
Login to access JoVE
Please login to your JoVE account to get access
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Please enter your email address so we may send you a link to reset your password.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Your JoVE Unlimited Free Trial
Fill the form to request your free trial.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Thank You!
A JoVE representative will be in touch with you shortly.
Thank You!
You have already requested a trial and a JoVE representative will be in touch with you shortly. If you need immediate assistance, please email us at subscriptions@jove.com.
Thank You!
Please enjoy a free 2-hour trial. In order to begin, please login.
Thank You!
You have unlocked a 2-hour free trial now. All JoVE videos and articles can be accessed for free.
To get started, a verification email has been sent to email@institution.com. Please follow the link in the email to activate your free trial account. If you do not see the message in your inbox, please check your "Spam" folder.
