Extension Proboscis Réponse (PER) Dosage de la drosophile

Biology

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Summary

La réponse d'extension proboscis ou PER est un test de comportement goût qui a été utilisé dans mouches ainsi que chez les abeilles. Lorsque la trompe est en contact avec une substance attractive, la mouche étend sa trompe de consommer la substance. Solutions de différents sucres sont très attrayants pour la volée.

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Shiraiwa, T., Carlson, J. R. Proboscis Extension Response (PER) Assay in Drosophila. J. Vis. Exp. (3), e193, doi:10.3791/193 (2007).

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Abstract

La réponse d'extension proboscis (PER) est un test de comportement goût qui a été utilisé dans mouches ainsi que chez les abeilles.

Sur la surface de la bouche de la mouche (labelle), il ya des poils ressemblant à des structures appelées sensilles qui abrite les neurones goût. Quand une substance attractive en contact à l'labelle, la mouche étend sa trompe pour consommer la matière. Extension Proboscis Réponse (PER) de dosage des mesures de cette réponse comportements goût, et c'est une méthode utile pour se renseigner sur les préférences alimentaires dans une seule mouche. Solutions de sucres divers, tels que le saccharose, le glucose et le fructose, sont très attractifs à la mouche. L'effet des substances aversives peuvent également être testés comme la réduction de la PAR, lorsqu'ils sont mélangés dans une solution sucrée.

Malgré la simplicité de la procédure de base, il ya beaucoup de choses qui peuvent l'empêcher de travailler. Un des facteurs qui nécessite l'attention est l'état réceptif de la mouche. Le temps de la famine nécessaire d'apporter à la volée pour le bon état réceptif varient considérablement d'36 à 72 heures. Nous avons établi une série de contrôles pour évaluer l'état de la mouche et qui permet le dépistage de non recevable ou hyper-réactive animaux individuels. Un autre facteur important est le niveau de l'impact et la position de la contacter pour le labelle, ce qui serait difficile à décrire par des mots. Cette présentation vidéo démontre toutes ces choses ensemble avec plusieurs autres améliorations qui pourraient augmenter la reproductibilité de cette méthode.

Protocol

Famine

  1. Premièrement, affamer la volée.
  2. Mettez un petit morceau de Kim-Wipe imbibé d'eau dans un flacon vide.
  3. Transfert 20-30 bien nourris vole vers le flacon vide.
  4. Vérifiez tous les 12 -24 heures pour s'assurer que le papier est humide.
  5. Affamer les voler pour 36 à 72 heures.

Fixer la volée

  1. Prendre une mouche dans un aspirateur.
  2. Placer une pointe de 200 ul jaune sur l'ouverture. Simultanément renversant et en soufflant dessus, vous pouvez presser le voler dans l'extrémité jaune.
  3. Appliquez doucement un peu d'air pour pousser à la volée jusqu'à un point où il ne peut pas bouger.
  4. En utilisant une lame de rasoir, mettre une marque à peu près à l'œil de la mouche, puis aspirer le vol de retour et de couper la pointe.
  5. Soufflez doucement à la volée en position, mais juste avant d'atteindre la fin, faire une inclinaison coupé à l'endroit où la trompe va être situé. Vous pouvez le faire sans cette coupe oblique, mais il serait certainement rendre le processus plus facile après.

Préparez des mèches de saccharose

  1. Twist une bande de 6 mm de large Kimwipes ® papier dans un fil, et séparer en petits morceaux de cône, comme la mèche en forme (<1 cm).
  2. Ces mèches ont été plongés dans de petites solutions de saccharose ou de l'eau et présenté à la trompe en faisant le contact.

Préparer des témoins et des animaux de laboratoire

  1. Avant de tester toute sapides, donne une solution de saccharose 4% à la volée. Cela agit comme un contrôle positif. Jeter toute volée qui n'ont pas répondu.
  2. Ensuite, testez dH 2 0 à la volée. Cet acte comme un contrôle négatif. Jetez à la volée si elle ne répond.
  3. Testez ces commandes après avoir testé votre sapides.

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Discussion

Dans cette présentation, nous avons franchi toutes les étapes de test de réponse Proboscis extension. La méthode semble assez simple, mais comme dans de nombreux dosages d'autres comportements, beaucoup de petites choses peuvent empêcher le dosage de travailler. Nous avons traversé de nombreuses étapes telles que le besoin d'une attention particulière. Ici, je souligner à nouveau quelques-uns des facteurs les plus importants.

Un tel facteur est la forme de la mèche. J'ai montré quelques-unes des très bons exemples, mais bien sûr, en réalité, tout serait un spectre continu entre très bon et très mauvais. Au début, vous utilisez peut-être les choses près de la très bonne équipe, mais jour après jour votre niveau pourrait commencer à changer peu à peu à la gamme de pas-si-bon. La perception humaine de soi-disant «bon» peut très facilement passer inconsciemment. Une façon d'éviter cela est de prendre une photo de la mèche que vous avez utilisé dans vos expériences, et de comparer toutes les photos le côté à côte. Ou, tout au moins prendre une photo des mèches qui fonctionnait très bien, et regarder pendant un moment avant de tester PER.

Une autre chose importante est le niveau d'impact du contact. C'est plus facile à traiter parce que l'objectif est de rendre le contact aussi douce que possible. Si vous ne voyez pas bouger la tête de la mouche à tous, qui est le meilleur.

L'état de famine est le plus difficile des facteurs à contrôler. Dans de nombreuses dégustations ou olfactives tests comportementaux, un temps de famine de 24 heures est très souvent utilisé. 24 heures pourrait être très pratique pour les gens à faire l'expérience, mais si vous l'arrière de votre mouches dans un très bon état, c'est une période plutôt courte. Mais même si vous avez utilisé une nourriture volée riche, et le contrôle de la densité précisément, la fenêtre pour tester PER peut varier de 36 heures à 72 heures. Donc, comme une expérience, je dois dire qu'il est très gênant pour les gens. Il ya un autre facteur qui rend plus difficile pour les expérimentateurs. En fait, il y aurait de nombreux lots, où la fenêtre de l'expérience pourrait être très court, ou même ne pas exister du tout.

Il ya donc des obstacles majeurs que vous avez à passer, mais la chose la plus importante est le contrôle positif et négatif que j'ai mentionnés. En gardant à ceux norme très stricte, vous serez en mesure de recueillir des ensembles de données fiables.

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Acknowledgments

Nous remercions Paul Graham pour servir comme un homme caméra dans la vidéo de présentation.

Materials

Name Type Company Catalog Number Comments
HDR-HC1 Camera Sony Corporation
SMZ800 Microscope Nikon Instruments
P-IBSS Camera Adapter Nikon Instruments
1x DC10LN Camera Adapter Optem, Qioptiq Inc.
257010 Camera Adapter Optem, Qioptiq Inc.
TREKKER Mk2 Tripod BENBO
Gorillapod SLR Tripod Joby
iMac G5 Computer Apple
Power Mac G5 Computer Apple
iMovie Software Apple
MPEG Streamclip Software SQUARED 5

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Dethier, V. G. The Hungry Fly. Harvard University Press. Cambridge. (1976).

Comments

2 Comments

  1.  Comments about the starvation protocol. I am currently performing research on fly appetitive learning and test fly sugar response as a control with an assay similar to the one described in Kim et al. (J Neurosci. ²007 Jul 18;²7(²9):7640-7.) In my experiments flies are starved for ²1h before conditioning at ²5°C. In my experience, the temperature during starvation is of huge importance: In preliminary experiments, I got similar sugar responses for flies starved for 7h at ²5° and ²4h at 18°. So information about the temperature during starvation is highly welcomed. The density of flies during starvation also appeared critical. Using bigger tubes, I did another quick experiment transferring 40 or 80 flies in my tubes for starvation. One day after, the majority of the flies were dead while kept in groups of 80, while no death was seen in the tubes of 40 flies. So maybe a difference from ²0 to 30 flies in the vials might have big influence.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    November 10, 2008 - 8:05 AM
  2. I am very interested in the drosophila probosics extension response assay, and want to know more about this assay methods. Thank you.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    November 20, 2011 - 12:46 PM

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