Author Produced

Sıçanlarda Ortotopik Hind-Ekstremite Nakli

* These authors contributed equally
Immunology and Infection

Your institution must subscribe to JoVE's Immunology and Infection section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

 

Summary

Burada altın standart olarak görünüyor ortotopik sıçan arka ekstremite nakli prosedürü tarif

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Sucher, R., Oberhuber, R., Margreiter, C., Rumberg, G., Jindal, R., Lee, W. A., Margreiter, R., Pratschke, J., Schneeberger, S., Brandacher, G. Orthotopic Hind-Limb Transplantation in Rats. J. Vis. Exp. (41), e2022, doi:10.3791/2022 (2010).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Kompozit doku allotransplantation (CTA) bir el, kol veya rakamlardan kaybından sonra artık geçerli bir tedavi seçeneği temsil eder ve rekonstrüktif cerrahide yeni terapötik bir varlık haline gelmiştir. Ancak, uzun vadeli, yüksek doz çoklu ilaç immünsupresif tedavi, geniş bir uygulama halters ciddi yan etkileri açısından risk taşıyan, greft hayatta kalmasını sağlamak için gereklidir. Bu alanda daha fazla ilerleme temel immünoloji ve kompozit doku greft iskemi reperfüzyon hasarı daha iyi anlaşılmasını bağlıdır.

Bugüne kadar, sıçanlarda ortotopik arka uzuv nakli rekonstrüktif transplantasyon (RT) için tercih edilen bir kemirgen modeli olmuştur, ancak, vaskülatürü yatıştırıldı, kemikler, kaslar ve sinirler için olağanüstü mikrocerrahi becerileri gerektiren bir çok zorlu bir işlemdir.

Biz arka uzuv nakli rat için hızlı ve güvenilir bir yaklaşım sağlayarak, bu model, vasküler manşet anastomoz tekniği tanıttı. Bu teknik, cerrahi prosedürü kolaylaştırır ve kısaltır ve yüksek hayatta kalma ve düşük komplikasyon oranları ile başarılı bir operasyonu gerçekleştirmek için temel mikrocerrahi deneyimi ile cerrahlar sağlar. Teknik immünolojik yanı sıra iskemi reperfüzyon hasarı (IRI) çalışmaları için de uygun görünüyor.

Protocol

Donör Operasyon ve Hind-Ekstremite Hasat

  1. Operatif prosedür için mikrocerrahi aletlerin steril bir set kullanılmaktadır. Cerrah, steril eldiven, cerrahi işlem başlamadan önce değiştirilmesi de dahil olmak üzere uygun kıyafetleri giymeli.
  2. Sıçan pentobarbital bir intraperitoneal enjeksiyon (50mg/kg 'dan IP) ile anestezi ve ısıtılmış bir çalışma alanı, tüm cerrahi prosedür boyunca istikrarlı bir hayvan vücut sıcaklığı kolaylaştırır sırtüstü yerleştirilir.
  3. Operasyon açtı cilt insizyonu öncesinde her iki üç kez sterilize, dezenfektan ve alkol. Hayvanlarda kornealar kurumasını önlemek için, göz ameliyat öncesinde bir oftalmik merhem (Vidisic) ile yağlanır.
  4. Sağ kasık boyunca yaklaşık inguinal ligament seviyesinde bir cilt insizyonu yapılır. Femoral damarlar bipolar koter ve künt diseksiyon ile ücretsiz disseke derin dalları 8-0 ipek ile bağlandı.
  5. Heparin 300μl (50 IU) anti-pıhtılaşma için penil damar yoluyla enjekte edilir.
  6. Inguinal ligament seviyesinde femoral damarların bağlandı ve ligatür distalinde kesilir.
  7. Arka ekstremite ile temizlendi buz gibi soğuk (4 ° C) 5 dakika içinde femoral arter yoluyla HTK solüsyonu (5ml).
  8. Tüm kas gruplarını keskin bir makas ile ayrılır ve osteotomi femur distal üçüncü düzeyinde gören bir döner elektrik ile yapılır.
  9. Hasat uzuv nakli kadar korunması ve soğuk hava deposu için buz HTK çözüm 20ml batmış.

Alıcı Operasyonu ve Transplantasyon

  1. Sıçan çalışma alanında pentobarbital ve yerleştirilen yatar intraperitoneal enjeksiyonu ile anestezi.
  2. Sağ kasık boyunca yaklaşık inguinal ligament seviyesinde bir cilt insizyonu yapılır. Femoral damarlar bipolar koter ve künt diseksiyon ile disseke edilir.
  3. Mümkün olduğunca distal femoral damarların bağlandı, ancak epigastrik damar kalkış proksimal. Damar kelepçeler arter ve ven inguinal ligament seviyesinde yerleştirilir.
  4. : 0.010 mm, kol uzunluğu; ve ven (manşet iç çapı manşet duvar kalınlığı 1,151 mm polietilen manşet arter (kaf çapı: 0,912 mm, kol-duvar kalınlığı: 0.010 mm, kol uzunluğu 2,0 mm içinde) üzerinden çekilir : 2.0 mm). Damar lümeni kenarına sonra bir gemi dilatör ile çekilir ve femoral arter ve ven manşet (yaklaşık 2mm) tüm vücut üzerinde dışa dönük ve çevresel 8-0 ipek ligatür ile sabit.
  5. Donör uzuv için bir oda yapmak için alıcı ekstremite kas gruplarının keskin diseksiyon ile kaldırılır ve orta femur osteotomi yapılır.
  6. Donör uzuv HTK çözüm kaldırılır ve transplantasyon femur (uzunluk: 1.5-2.0 cm) 18-gauge iğne kullanılarak osteosentez ile başlar intramedüller rod olarak.
  7. Ventral kas gruplarını yakından 4-0 vicryl veya Prolen kişlerin yaklaştırılır.
  8. Vasküler anastomozlar alıcıların ven ve manşet kompleksi üzerinde donör ven ve arter çekerek yapılır. Çevresel 8-0 ipek ligatür anastomoz tekrar güvence altına yerleştirilir.
  9. Venöz kelepçe, ardından arteryel kelepçe tarafından yayımlanan ve reperfüzyon distal bacak ve ayak renk dönüş yanı sıra arter yoluyla pulsatil akım tarafından görüntülenmiştir.
  10. Kalan sırt kas grupları 4-0 vicryl veya Prolen kişlerin yeniden yaklaştırılır.
  11. Cilt 4-0 Vicryl veya prolen kişlerin kapalıdır.
  12. Alıcı sıçan bir ısıtma yastığı yerleştirilir ve kurtarma kadar yakından izlenmelidir.
  13. Alıcı hayvanlar, üç posttransplant gün süreyle profilaktik antibiyotik (Sefazolin, 20 mg / gün, IM) ve Buprenex (0.1 mg / kg, SC) alırsınız.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Onlarca yıl süren deneysel araştırma öncesinde ve yakın geçmişte başarılı bir insan eli transplantasyonu etkin. 1978 yılında, Shapiro ve ark. çeşitli patolojik, fizyolojik ve immünolojik yönleri yanı sıra kompozit doku greft fonksiyonel sonuç iyi çalışması için uygun ortotopik sıçanlarda arka bacak nakli modeli geliştirdi. Biz olmayan bir sütür manşet tekniği getirerek, prosedürün, yani en zorlu kısmı, vasküler anastomoz değiştirdiniz. , Yüksek hayatta kalma oranı (% 80-90) ile prosedürünü yürütmek için temel mikrocerrahi deneyimi ile cerrahlar kolaylaştırır ve kısaltır ve cerrahi işlem sağlar geleneksel bir dikiş tekniği ile kıyaslandığında.

Sütüre anastomozlar, kanama riski, tromboz ve pedikül bükülme değişkenliği olmadan azaldı. Bu uygun manşon boyutu seçimi ile minimize edilebilir rağmen kan başlangıçta kaf geçen lümen ile çarpıştığında yerinde daraltma ya da türbülans, manşet tekniğinin yeni bir potansiyel risk. Ayrıca, küçük boyutu uyumsuzlukları kolayca yine farklı çaplarda damarların sütür doğasında riskini azaltır, bir manşet anastomoz ile ele olabilir. Bazı başarılı bir manşet anastomoz için en önemli hususlar aşağıda verilmiştir:

  1. Tek bir enjeksiyon pentobarbital (50 mg / kg IP) 90 dakika süreyle hayvan uyutmak için yeterli olmalıdır. Operasyonun daha fazla 70-80 dakika sürer durumda, ek bir doz 15mg/kg IP uygulanmalıdır. Intraoperatif anestezi derinliği ayak tutam refleks testi tekrar test edilebilir.
  2. Nakli sırasında osteosentez hafifletmek için orta femur donör arka bacak / alıcı arka bacak osteotomi yapılmalıdır.
  3. Manşet boyutları dikkatli bir seçim başarılı revaskülarizasyon için büyük önem taşımaktadır.
  4. Tromboz önlemek için, heparin (50IU) donör greft perfüzyon önce 1 dakika verilmelidir.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Çıkar çatışması ilan etti.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Nembutal® OVATION Pharmaceuticals
Heparin Immuno Ebewe Pharma
Custodiol HTK Solution Essential Pharmaceuticals
Adventitia Scissors ASSI ASSI®SAS-21 R-8T
Forceps ASSI ASSI®JFC-7
Dilator Forceps ASSI ASSI®D-5AZ
Polymide Tubes River Tech Medical #17; #19

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Shapiro, R. I., Cerra, F. B. A model for reimplantation and transplantation of a complex organ: the rat hind limb. J Surg Res. 24, (6), 501-506 (1978).
  2. Petruzzo, P. The international registry on hand and composite tissue transplantation. Transplantation. 86, (4), 487-492 (2008).
  3. Schneeberger, S. First forearm transplantation: outcome at 3 years. Am J Transplant. 7, (7), 1753-1762 (2007).

Comments

1 Comment

  1. I'm a medical Laboratory Scientist, a young graduate of Virology working in Microbiology, National Hospital, Abuja, Nigeria, Africa. My interest is on tissue culture technology, please, how i get your assistance? Please contact me as follows: +²34-8064²²9²75

    Reply
    Posted by: Anonymous
    July 14, 2010 - 3:24 AM

Post a Question / Comment / Request

You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

Usage Statistics