La extracción de sangre de las ratas a través de la vena safena y por punción cardiaca

Biology

Your institution must subscribe to JoVE's Biology section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

 

Summary

La extracción de sangre son necesarias en un gran número de estudios, por ejemplo para estudiar el perfil farmacocinética de un compuesto. En este sentido, se muestra cómo extraer la sangre de las ratas mediante dos técnicas: extracción de sangre de la vena safena o por punción cardiaca.

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Beeton, C., Garcia, A., Chandy, K. G. Drawing Blood from Rats through the Saphenous Vein and by Cardiac Puncture. J. Vis. Exp. (7), e266, doi:10.3791/266 (2007).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

La extracción de sangre de los roedores es necesario para un gran número de los estudios in vitro e in vivo. Los sitios de extracción de sangre son numerosas en los roedores: retro-orbital sinusal, la vena yugular, vena maxilar, la vena safena, el corazón. Cada técnica tiene sus ventajas y desventajas, y algunos no han sido aprobados más en algunos países (por ejemplo, retro-orbital se basa en Holanda). Una discusión de las diferentes técnicas para la extracción de sangre están disponibles 3.1. Aquí se presentan dos técnicas para la extracción de sangre de las ratas, cada uno con sus aplicaciones específicas.

Extraer la sangre de la vena safena, siempre y cuando se hace correctamente, provoca angustia mínima en los animales y no requiere anestesia. Esta técnica permite repetir sorteos de pequeñas cantidades de sangre, como necesarios para los estudios farmacocinéticos 4,5, la determinación de la química del plasma, o recuento sanguíneo 6.

La perforación cardíaca permite la obtención de grandes cantidades de sangre de un solo animal (hasta 10 ml de sangre puede ser extraída de una rata de 150 g). Esta técnica es muy útil por lo tanto, como un procedimiento terminal cuando la extracción de sangre de la safena interna no sería una muestra suficientemente grande. Usamos punción cardiaca cuando necesitamos una cantidad suficiente de suero de una cepa específica de las ratas a crecer T líneas de linfocitos in vitro 4-9.

Protocol

La extracción de sangre de las ratas a través de la vena safena y por punción cardiaca

Nota: Todos los procedimientos deben ser aprobados por el cuidado de los animales de su institución y el empleo.

1. Extracción de sangre de la vena safena

  1. Este procedimiento se realiza sin anestesia y se necesitan dos personas, una que se encarga de la rata, y el que lleva a cabo el sorteo.
  2. Hacer un cono de una toalla o mantener la rata con guantes de manipulación de roedores, dejando una pata trasera al descubierto.
  3. Afeitarse la parte posterior de la pierna con una cortadora eléctrica hasta que la vena safena es visible. Afeitarse un área lo suficientemente grande, por lo que no tiene pelo entre en contacto con el sitio de punción. Use una pequeña cantidad de crema para las manos no aromático para mantener el pelo afeitado no lejos del sitio de la punción.
  4. Hacer un punto de compresión en la base de la pierna para hacer el bulto de la vena safena (similar al uso de un torniquete para extraer sangre de un humano o un animal de gran tamaño). Punción de la vena con una aguja 20G y saca la sangre a medida que sale con un microvette. De bombeo con la pierna le ayudará a sacar más sangre. Cuando haya recogido suficiente cantidad de sangre, coloque compresas limpias en el sitio de punción para detener el sangrado.

2. Extracción de sangre por punción cardiaca

  1. Este procedimiento requiere anestesia y es terminal. Los animales deben ser sacrificados inmediatamente al final de una punción cardíaca.
  2. Prepare una jeringa de 5 ml con una aguja 23G1.
  3. Profundamente anesthesize la rata y el cheque para la anestesia por la falta de movimiento espontáneo, la tasa de respiración lenta, y la falta de respuesta a los estímulos (como presionar un dedo del pie). Para garantizar la anestesia prolongada, coloque una jeringa que contiene una toalla de papel empapado en anestésico volátil en la nariz de las ratas durante el procedimiento.
  4. Coloque el ratón sobre la espalda, de espaldas a usted.
  5. Si usted es diestro, coloque el dedo índice izquierdo a nivel de las costillas inferiores, sin aplicar ninguna presión. El corazón se encuentra aproximadamente 1 cm por encima de este punto, ligeramente hacia la derecha.
  6. La celebración de la jeringa en un ángulo de 45 grados, inserte la aguja entre dos costillas y ver una gota de sangre para entrar en la aguja. Esto es una indicación de que está en el corazón. Sin mover la jeringa, tire del émbolo para llenar la jeringa. Una vez que la jeringa se llena, con cuidado de desconexión de la aguja y se vacía en un tubo. La jeringa puede ser re-unido a la aguja para la elaboración de más sangre. Debe ser posible llegar a 5-10 ml de sangre de una rata 120-180 g.
  7. Inmediatamente la eutanasia a la rata.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

La extracción de sangre de la vena safena es una manera conveniente de obtener pequeñas cantidades de sangre sin necesidad de anestesia. Si el muestreo repetido es necesario, consulte las normas para asegurarse de que no sacan mucha sangre de una rata.

La extracción de sangre por punción cardiaca es una manera conveniente de obtener grandes cantidades de sangre, pero esto es un procedimiento terminal. El animal debe ser sacrificado al final de la extracción de sangre.

Estas técnicas (como todas las técnicas de los animales vivos) debe ser realizada por primera vez en la presencia de un veterinario o un técnico veterinario que será capaz de evaluar que los animales son manejados adecuadamente y no están sometidos a un dolor innecesario y / o angustia.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Materials

Name Type Company Catalog Number Comments
Needle 20G 1/2 Tool BD Biosciences 305176 For puncturing the saphenous vein
Microvette 300 Tool Sarstedt Ltd 20.1308.100 To collect blood from the saphenous vein
Electric trimmer Tool Braintree Scientific, Inc. CLP-32130
Needle 23 G 1 Tool BD Biosciences 305145 For cardiac puncture
5 ml plastic syringe, slip tip Tool Fisher Scientific 14-826-12 For cardiac puncture

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Van Herck, H., Baumans, V., Brandt, C. J. W. M., Boere, H. A. G., Hesp, A. P. M., Van Lith, H. A., Schurink, M., Beynen, A. C. Blood sampling from the retro-orbital plexus, the saphenous vein and the tail vein in rats: comparative effects on selected behavioural and blood variables. Laboratory Animals. 35, 131-139 (2001).
  2. Luzzi, M., Skoumbourdis, E., Baumans, V., Conte, A., Sherwin, C., Kerwin, A., Lang, T., Morton, D., Barley, J., Moreau, E., Weilenmann, R. F., Reinhardt, V. Collecting blood from rodents: a discussion by the laboratory animal refinement and enrichment forum. Animal Technology and Welfare. 4, 99-102 (2005).
  3. Angelow, O., Schroer, R. A., Heft, S., James, V. C., Noble, J. A comparison of two methods of bleeding rats: the venous plexus of the eye versus the vena sublingualis. Jounal of Applied Toxicology. 4, 258-260 (2006).
  4. Beeton, C., Wulff, H., Barbaria, J., Clot-Faybesse, O., Pennington, M., Bernard, D., Cahalan, M. D., Chandy, K. G., Beraud, E. Selective blockade of T lymphocyte K+ channels ameliorates experimental autoimmune encephalomyelitis, a model for multiple sclerosis. Proc. Natl. Acad. 13942-13947 (2001).
  5. Beeton, C., Pennington, M. W., Wulff, H., Singh, S., Nugent, D., Crossley, G., Khaytin, I., Chen, C. Y., Calabresi, P. A., Chandy, K. G. Targeting effector memory T cells with a selective peptide inhibitor of Kv1.3 channels for therapy of autoimmune diseases. Mol. Pharmacol. 1369-1381 (2005).
  6. Beeton, C., Wulff, H., Standifer, N. E., Azam, P., Mullen, K. M., Pennington, M. W., Kolski-Andreaco, A., Wei, E., Grino, A., Counts, D. R., Wang, P. H., LeeHealey, C. J., Andrews, B. S., Sankaranarayanan, A., Homerick, D., Roeck, W. W., Tehranzadeh, J., Stanhope, K. L., Zimin, P., Havel, P. J., Griffey, S., Knaus, H. G., Nepom, G. T., Gutman, G. A., Calabresi, P. A., Chandy, K. G. Kv1.3 channels are a therapeutic target for T cell mediated autoimmune diseases. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 17414-17419 (2006).
  7. Beeton, C., Barbaria, J., Devaux, J., Benoliel, A. -M., Gola, M., Sabatier, J. -M., Bernard, D., Crest, M., Beraud, E. Selective blocking of voltage-gated K+ channels treats experimental autoimmune encephalomyelitis and inhibits T-cell activation. J. Immunol. 936-944 (2001).
  8. Devaux, J., Forni, C., Beeton, C., Barbaria, J., Beraud, E., Gola, M., Crest, M. Myelin basic protein-reactive T cells induce conduction failure in vivo but not in vitro. Neuroreport. 317-320 (2003).
  9. Beeton, C., Chandy, K. G. Induction and monitoring of adoptive delayed type hypersensitivity in rats. Journal of Visualized Experiments. 8, (2007).

Comments

13 Comments

  1. DŒs the cardiac puncture procedure also work with mice? If not, how can I do a cardiac puncture with mice?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    October 1, 2008 - 6:35 PM
  2. Yes, this cardiac puncture also works with mice. It is just a little more difficult as a ²0g mouse is about 10 times smaller than the rat shown on this video but, with a little practice, the mouse cardiac puncture can be done with consistent results.

    Reply
    Posted by: Christine B.
    October 1, 2008 - 6:42 PM
  3. Is it possible to draw 1 mL of whole blood from the Saphenous vein of a 150 g rat?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    October 26, 2008 - 10:00 PM
  4. 1 ml is a lot of blood and I doubt you can get that much reliably from the saphenous vein. I usually draw 50-100 ul, sometimes up to 300 ml.

    Reply
    Posted by: Christine B.
    October 27, 2008 - 11:13 AM
  5. is there is any need to change the needle size for doing experiments in mice

    Reply
    Posted by: Anonymous
    November 10, 2008 - 11:08 PM
  6. I would try with a ²3G, like for rats. You can use ²5G but then you will start seeing more hemolysis.

    Reply
    Posted by: Christine B.
    November 11, 2008 - 4:47 PM
  7. Why isn't hemolysis acceptable?

    Reply
    Posted by: sumali k.
    January 4, 2010 - 2:24 PM
  8. Why isn't hemolysis acceptable?

    Reply
    Posted by: sumali k.
    January 4, 2010 - 2:25 PM
  9. Whether of not hemolysis during blood draw is acceptable depends on the use you will have for the blood.
    We often use blood drawn through terminal cardiac puncture for the preparation of serum for tissue culture. In this case we try to avoid hemolysis as this affects cell survival in culture. For other applications, hemolysis may not represent a problem.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    January 4, 2010 - 2:34 PM
  10. How much heparin to you add to your tubes before collecting the blood?

    Reply
    Posted by: Alexis L.
    February 3, 2010 - 1:09 PM
  11. If you want to collect plasma, prepare a solution of 5% heparin in PBS and add 0.1 ml of it to each 3-5 ml syringe.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    February 3, 2010 - 1:12 PM
  12. For vena saphena: If you puncture the vein lower (next to the ankle), it's easier, because the vein in this area is more on the surface.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    August 17, 2011 - 3:45 AM
  13. I'm a graduate student from P.R.China.In our lab, we draw blood from mice from the retro-orbital sinus, which technique I find really disconcerting. I'm fascinated by your technique demonstrated here, and I would be grateful if Ms Beeton can send me the written protocol via e-mail.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    January 31, 2012 - 7:32 PM

Post a Question / Comment / Request

You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

Usage Statistics