İnsan Kanı StemCell Teknolojileri RosetteSep Kit ile gelen NK Hücreleri zenginleştirilmesi

Biology

Your institution must subscribe to JoVE's Biology section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

Welcome!

Enter your email below to get your free 10 minute trial to JoVE!





We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.

If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.

 

Summary

Doğal katil hücreler, lenfosit küçük bir nüfus. Burada StemCell Teknolojileri kit kullanarak, bu hücrelerin insan kanı negatif seleksiyon tarafından nasıl izole etmek göstermektedir. Elde edilen hücreler, bu nedenle bir takım prosedürler için kullanılacak hazır antikorlar tarafından uygulanabilir ve bakir, ve.

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Beeton, C., Chandy, K. G. Enrichment of NK Cells from Human Blood with the RosetteSep Kit from StemCell Technologies. J. Vis. Exp. (8), e326, doi:10.3791/326 (2007).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Doğal öldürücü (NK) hücreleri doğuştan gelen bağışıklık sistemine ait olup, kanser ve enfeksiyonlara karşı mücadelede önemli bir rol oynamak, büyük granüllü sitotoksik lenfositler, ancak, gebelik ve transplant reddini erken aşamalarında da sorumlu tutulmaktadır. Bu hücreler izole edilebilir olan periferik kan, mevcut. Hücreler, pozitif veya negatif seçim kullanılarak izole edilebilir. Olumlu seçimi için biz sadece tüm hücreleri ama ilgi hücreler mevcut yüzey belirteçleri hedefleyen antikor kokteylleri kullanan negatif seçimi için ise ilgi hücreleri mevcut bir yüzey işaretleyici yönelik antikorlar kullanır. Bu son teknik, böylece istenmeyen hücre aktivasyonu ya da farklılaşma riskini azaltarak, hücrelerin antikor serbest ilgi bırakarak avantajı sunuyor. Bu video protokol StemCell teknolojileri RosetteSep kiti kullanılarak, negatif seleksiyon tarafından nasıl insan kanı NK hücreleri ayrı göstermektedir. Bu prosedür, insan periferik kan (insan denekler korumak için bir kurumsal inceleme kurulu tarafından onaylanmış protokol altında) elde ve NK hücreleri yok belirteçlerinin bağlamak antikorların bir kokteyl ile karıştırma, ancak, periferik diğer tüm mononükleer hücreler içerir kan (örneğin, T lenfositleri, monositler ...). Kokteyl bulunan antikorlar, A üzerinde eritrosit glycophorin yönelik antikorlar konjuge. Bu nedenle, tüm istenmeyen hücre ve kırmızı kan hücrelerinin kompleksleri kalmış olacak. Kan ve antikor kokteyli karışımı, daha sonra seyreltilmiş Histopaque degrade üzerine yerleştirilmiştir ve santrifüj edilir. NK hücreleri (>% 80 saf) Histopaque ve seyreltilmiş plazma arasındaki arayüz toplanabilir. Benzer kokteyller, insan T lenfositleri gibi diğer hücre popülasyonlarının, zenginleştirilmesi için kullanılabilir.

Protocol

Her Rozet Eylül izolasyon kokteyl ile birlikte ayrıntılı bir protokol ve StemCell teknolojileri 1 online olarak mevcuttur.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Bu tekniği kullanarak izole hücreler diğer hücre ayırma kitleri kullanılarak farklı popülasyonlar daha ayrılabilir.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Materials

Name Type Company Catalog Number Comments
Rosette Sep cocktail for human NK cells Reagent Stem Cell Technologies 15065
PBS, steile, 1x Reagent GIBCO, by Life Technologies 14040-058
Fetal calf serum (FCS, FBS) Reagent GIBCO, by Life Technologies 16140-071
Histopaque-1077 Reagent Sigma-Aldrich 10771
PBS supplemented with 2% FCS and Histopaque solutions must be brought to room temperature before the begining of the procedure.

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Procedures and instruction manuals. http://www.stemcell.com/technical/technicalrsproc.aspx Forthcoming.

Comments

0 Comments


    Post a Question / Comment / Request

    You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

    Usage Statistics