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Cuidado y mantenimiento regulares de un pez cebra ( * These authors contributed equally

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Summary

Este protocolo describe un mantenimiento regular y el cuidado para mantener las condiciones óptimas para la cría de peces cebra. El vídeo muestra el protocolo para el mantenimiento del sistema, la vivienda, la alimentación, la reproducción, y la crianza de larvas de pez cebra.

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Avdesh, A., Chen, M., Martin-Iverson, M. T., Mondal, A., Ong, D., Rainey-Smith, S., Taddei, K., Lardelli, M., Groth, D. M., Verdile, G., Martins, R. N. Regular Care and Maintenance of a Zebrafish (Danio rerio) Laboratory: An Introduction. J. Vis. Exp. (69), e4196, doi:10.3791/4196 (2012).

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Abstract

Este protocolo describe el cuidado regular y el mantenimiento de un laboratorio de pez cebra. Pez cebra están ganando popularidad en la genética, la investigación farmacológica y conductual. Como un vertebrado, la cuota de pez cebra considerable similitud de secuencia genética con los humanos y están siendo utilizados como un modelo animal para diversos estados de enfermedad humanos. Las ventajas de pez cebra en comparación con otros modelos de vertebrados comunes incluyen alta fecundidad, bajo costo de mantenimiento, los embriones transparentes, y un rápido desarrollo. Debido al calor del interés por la investigación pez cebra, la necesidad de establecer y mantener un centro de pez cebra vivienda productiva también está aumentando. Aunque la literatura está disponible para el mantenimiento de un laboratorio de pez cebra, un protocolo de vídeo concisa que falta. Este video ilustra el protocolo para la vivienda, la alimentación, la reproducción y la crianza de larvas de pez cebra. Este proceso ayudará a los investigadores a entender el comportamiento natural y las condiciones óptimas de zebrafish cría y por lo tanto solucionar problemas experimentales que se originan en las condiciones de cría de peces. Este protocolo será de gran ayuda para los investigadores planean establecer un laboratorio de pez cebra, y también a los estudiantes graduados que tengan intención de utilizar el pez cebra como modelo animal.

Protocol

1. Sistema de Mantenimiento

  1. El pez cebra se mantienen en un sistema de circulación que continuamente filtros y airea el sistema de agua para mantener la calidad del agua requerida para un medio acuático sano. El sistema de circulación también ayuda a filtrar el exceso de comida y excrementos de peces. Diferentes empresas ofrecen sistemas de pez cebra, pero nosotros usamos sistemas de hábitats acuáticos, Estados Unidos en nuestro laboratorio. La temperatura ambiente o la temperatura del tanque se mantiene generalmente entre 26 a 28.5 ° C y las condiciones de iluminación son 14:10 h (luz: oscuridad). Un sistema de pez cebra de hábitats acuáticos (por ejemplo, sistema de sobremesa) Costos ~ 9.000 USD. Este sistema de mesa con dos estantes puede contener seis 10-litros, doce 3-litros, o veinte tanques 1,5-litros en cada estante. Múltiples líneas de los peces (por ejemplo, transgénico, de tipo mutante y salvaje) también pueden ser alojados en el mismo sistema.
  2. Un conjunto de diferentes tipos de filtros se utilizan en el sistema. En nuestro sistema, el agua de todos los tanques de paEPE a través de un 120-micras de bloque de filtro, 50-micras cartucho del filtro filtro, biológica, la absorción de filtro de carbón activo y filtro de desinfección UV antes de ser distribuido de nuevo en el tanque. De-chlorinated/aged agua se utiliza en el sistema de pez cebra. El agua puede ser de-clorado por el envejecimiento durante al menos 48 h. En condiciones ideales, el agua debe mantenerse en un depósito con una bomba de circulación del agua para mantener el calor, y acelerar el de-cloración.
  3. El pH del agua del sistema deberá ser comprobado diariamente y se mantiene entre 6,8 y 7,5. Cuando sea necesario, bicarbonato de sodio debe utilizarse para aumentar el pH.
  4. Los tanques de peces se debe limpiar con regularidad. Para limpiar un tanque de peces, cerrar el flujo de agua de este tanque, drenar el exceso de agua por la inclinación del tanque hacia atrás y extraer el depósito cuidadosamente del sistema. La suciedad y el crecimiento de algas será evidente en la parte inferior y los lados del tanque.
  5. Coloque el deflector en el tanque limpio, y llénelo con agua de cloro (también conocido como Sistema water). Transfiera cuidadosamente los peces en este acuario con una red de pesca. Cerrar la tapa y transferir la etiqueta de nombre del tanque. Coloque con cuidado el tanque limpio en el sistema y conectar el suministro de agua.
  6. Para descontaminar la red de pesca, rociar con un 70% de etanol, enjuague con agua y deje que se seque antes de volver a usarlo. Retire el deflector del tanque sucio y pulverizar las dos partes con 70% de etanol. Enjuague bien con agua corriente y deje que el depósito y el deflector se seque completamente antes de volver a usarlo.
  7. Los filtros del sistema de circulación tienen que ser revisados ​​y cambiados regularmente para asegurar su correcto funcionamiento. Estos filtros deben ser cambiados regularmente para asegurar un suministro de agua adecuado y limpio para todos los tanques de peces.
  8. La almohadilla 120 micras de filtro normalmente se vuelve a colocar o reemplazar diariamente; reposicionar hacia el flujo de agua para utilizar completamente antes de sustituir por uno nuevo.
  9. El filtro de cartucho se debe cambiar semanalmente. Para cambiar el filtro de cartucho, retire la unidad del filtro girando hormigaiclockwise con una llave o manos. Coloque una lámina de plástico o una toalla debajo para prevenir o absorber los derrames de agua. Reemplace el filtro de cartucho por uno nuevo y colocar la unidad de filtro de nuevo en el sistema, apriete con cuidado con las manos y una llave si es necesario.
  10. El filtro de carbón debe ser cambiado cada dos semanas (cada dos semanas). Para cambiar el filtro de carbón, retire la unidad del filtro de carbono cuidadosamente con una llave. Desechar el carbono activado usado y sustituirlo por nuevo carbono activado. Vuelva a colocar el soporte de carbono y colocarlo de nuevo en la unidad de filtro. Montar la unidad de filtro de nuevo en el sistema. Encender el sistema y comprobar que el agua fluye hacia el filtro. Si es necesario, lavar un poco de agua a través de las tuberías de limpiar la suciedad en las tuberías antes de colocar el filtro en el sistema.
  11. El filtro biológico debe limpiarse cada seis meses. Un filtro biológico se encuentra generalmente entre el bote y el filtro de carbono en el sistema de circulación. Para cambiar el filtro biológico, remove la unidad de filtro del sistema. Libere la presión del filtro presionando el botón de liberación de presión. Desenroscar el filtro con una llave. Generalmente se necesitan dos personas para este paso. Retirar la tapa de la unidad de filtro. Vaciar el contenido del filtro en un recipiente tamizaron para separar el siporax del agua. Nota: siporax es una multa de poro bio-filtro medio que tiene la capacidad de realizar tanto la nitrificación y de desnitrificación.
  12. Si el siporax es muy sucio reemplazarlo con uno nuevo. Llene el filtro con agua del sistema (de-agua clorada), cierre la tapa, devuelva la unidad al sistema de filtro y conecte el suministro de agua. Nota: En un acuario aclimatado, el siporax será el hogar de varias bacterias nitrificantes. Estos microorganismos son críticos para mantener el ciclo del nitrógeno en el acuario, y la eliminación de la carcasa primaria para el filtro biológico (el siporax sucio) podría dar lugar a un pico de amoniaco grave, seguido de un pico, mientras que el nitrito de new filtro biológico (con siporax nuevo) es el restablecimiento. Ambos de estos estados intermedios del ciclo del nitrógeno puede ser tóxico para los organismos acuáticos y puede matar el pez cebra si no respondieron de forma apropiada. Por lo tanto, es importante disponer de un filtro biológico secundario en otro lugar en el sistema de alojamiento pez cebra (por ejemplo, en el depósito de recogida en el sistema de hábitats acuáticos) para permitir la repoblación rápida de estos microorganismos importantes en la siporax nuevo.
  13. Filtros UV se usan para el control de contaminantes biológicos del sistema (como las bacterias) y debe ser reemplazado cada mes nueve-diez. Debe tenerse en cuenta que tipo de filtro UV dosis desinfección es de ~ 110 mJ / cm 2 en el comienzo de la vida de la lámpara y la tasa de dosis disminuye con el transcurso del tiempo, por lo que es necesario sustituir el globo incluso cuando parece ser aún funcional.

2. Alimentación

  1. El pez cebra puede ser alimentado con comida seca (tamaño de la comida de 100 micras para t larvaso 300/400 micras para peces adultos) o alimento vivo (artemias). Artemia (Artemia sp.) Huevos están disponibles en tiendas de animales locales y se puede rayar en el laboratorio, siguiendo los sencillos pasos que se describen a continuación.
    1. Disolver la sal del mar rojo en agua envejecido mediante la colocación de un vaso de precipitados con sal en un agitador magnético para una mejor solubilidad. Alternativamente, la sal se puede disolver en agua por aireación con el tubo de aireación. Sal Instant Ocean también se puede utilizar como una solución de eclosión si rojo sal marina no está disponible. Camarones de salmuera puede tolerar un amplio rango de salinidad, sin embargo, que eclosionan nuestro artemia (10-15 g) en 30-35 g / L de agua salada del mar rojo. Nota: En el caso de los huevos de artemia no están fácilmente disponibles en las tiendas locales de mascotas luego encapsulados camarones de salmuera también se puede utilizar después de "destapado" en lotes antes de su inclusión en el criadero de camarones. Esto también podría evitar viajes frecuentes a la tienda de mascotas.
    2. Llene la nacedora artemia con salt de agua y añadir los huevos de camarones en una concentración de 1,2 cucharadas / litro. Airear la nacedora vigorosamente con una bomba de aire y dejar los huevos de camarones en salmuera para salir del cascarón durante ~ 48 h.
      Nota: Cabe señalar que un-enriquecido camarón de salmuera perder valor nutricional cada hora después de la eclosión. Por lo tanto, puede ser apropiado para cualquiera de escotilla durante 24 hr o enriquecer más de 48 horas con el fin de obtener el máximo valor nutricional de la gamba de salmuera.
    3. Agua residual del sistema de eclosión se añade a los residuos de cuarentena a desinfectar con lejía y dispuesta más adelante.
  2. Para recoger los camarones de salmuera, retire el tubo de aire y permitir que la cultura que conformarse con 4-5 minutos pero no más de 10 min. Los camarones de salmuera eclosionados se reúnen en la parte inferior de la Hatcher.
    1. Recoger salmuera camarones utilizando el grifo en la parte inferior de la incubadora. Deseche el flujo inicial, que consiste en un-eclosionados los huevos de artemia.
    2. Separe los camarones de salmuera del agua salada, utilizando una red de recolección de artemia (~ 350 micras de malla de nylon). Lavar los camarones de salmuera de la red en un recipiente con agua del sistema.
  3. Las artemias recogidos están generalmente presentes en concentración alta en la parte inferior del recipiente dándole un color más naranja.
  4. Pase los camarones de salmuera para el pez cebra con una pipeta o un gotero / squeezy. La cantidad de alimento dispensado depende del tamaño de la población de los tanques individuales. La relación comúnmente aceptado para el pez cebra es recibir 4% del peso corporal en los alimentos por día. Pez cebra nunca deben ser sobrealimentadas ya que esto puede aumentar el nivel de nitrato en el agua, posiblemente afectando su reproducción, o la viabilidad, ya que algunos peces pueden morir debido a comer en exceso.
    1. Al inyectar los alimentos en laagua, los peces hambrientos nadar para atrapar a los camarones de salmuera.
  5. Alimentación seca se puede realizar usando un ecosistema acuático del / hábitats acuáticos sencillo resorte basada dispensador de alimento para peces. Alternativamente, alimentación seca también se puede realizar utilizando una cuchara simple o cortando un cuentagotas de plástico diagonalmente con tijeras para dar una apariencia de una pequeña cuchara.

3. Cría

  1. Pez cebra iniciar la reproducción en el inicio de la luz. Los huevos fertilizados se puede obtener a través de la cría en el tanque de cría o por parejas. Mientras que en el tanque de cría es más mano de obra eficiente y se aplica para la recolección de embriones habitual en nuestro laboratorio, la cría de pares se prefiere cuando los genes o mutaciones deben ser examinados de cada pez.
  2. Para la cría en el tanque, instale el reproductor en el tanque y soltar lentamente en el tanque de peces después de la aparición de la luz. Por otra parte, en el tanque de cría de configuración se puede dejar toda la noche en la pecera.
  3. Lalero del obtentor en el tanque para alrededor de 15 min para permitir que el pescado para aparearse antes de retirar el criador de la cubeta y la recogida de los huevos.
  4. Cría por parejas normalmente se establece por la tarde después de comer.
  5. Montar el tanque de cría y llenarlo con agua del sistema envejecido.
  6. Transferir una hembra y un macho, a lados opuestos del tanque de cría. Las hembras se pueden distinguir de los hombres, debido a su bajo vientre más grande. Los hombres también se pueden distinguir de las hembras, ya que son más delgados y de color más oscuro que las hembras. Por otra parte, los machos tienen coloración más amarilla de la aleta anal en comparación con las mujeres (ver Figura 1). Cuando está en duda para el aspecto ovipositor en el pez cebra hembra (ver Figura 4).
  7. Eliminar el divisor de la mañana siguiente, poco después de la aparición de la luz. Permitir el acoplamiento a ocurrir en reposo durante 20 min o hasta que un número suficiente de embriones se colocan en la parte inferior del tanque.
  8. Después de la reproducción,volver a los peces a sus tanques. Recoge los huevos usando un colador.
  9. Lavar los embriones a fondo con agua del sistema.
  10. Transferir los embriones a una placa de Petri de un enjuague del filtro con medio de embrión; tcc EM3 (NaCl, 13,7 mM; KCl, 0,54 mM; MgSO 4, 1,0 mM; CaCl 2, 1,3 mM, Na 2 HPO 4, 0,025 mM; KH 2 PO 4, 0,044 mM; NaHCO 3, 4,2 mM).
  11. Los embriones pueden ser observados bajo el microscopio. Los huevos fertilizados se separan entonces de los huevos no fertilizados utilizando una aguja y una pipeta (véase la Figura 3).

4. Cría de larvas

  1. Los huevos fertilizados se mantuvieron en un incubador (~ 28,5 ° C) durante 72 horas hasta que las larvas se incuban.
  2. Ahora son las larvas del corion y nadar libremente están listos para transferirse a una pecera principal. Las larvas necesitan ser alimentados de 5 días después de la fertilización (dpf) y se mantienen en medio de embriones (composición descrita en elParte 3, 10) o sistema de agua. Las larvas pueden mantenerse en placas redondas con ~ 50% o más de agua en el mismo cambia sobre una base diaria. El cambio de agua debe incluir la eliminación de larvas muertas o enfermas y cualquier otros desechos.
  3. Transferir las larvas suavemente en un tanque que contiene un deflector de tamaño pequeño (de alrededor de 300-400 micras). Larvas muertas y enfermas deberán ser retirados y unos pocos mililitros de agua se debe agregar lentamente sobre una base diaria.
  4. Después de 14 días, los tanques de larvas puede ser archivado en el sistema, y ​​se suministra con una pequeña corriente de agua ciclismo (1-2 gotas por segundo). Como las larvas crecen, el flujo de agua puede ser aumentado. Diferentes tamaños de deflectores se pueden utilizar dependiendo del tamaño de las larvas (por ejemplo, tamaño deflector 300-400, 500, 700-750, y micras 1000) y un deflector de plástico normal se debe utilizar para los peces adultos.
  5. Por lo general, tarda de 3 meses para que los embriones se conviertan en adultos sexualmente maduros.

Representative Results

Vivienda pez cebra y el mantenimiento es más fácil y más barato que los modelos de roedores tradicionales. Varios miles de pez cebra puede ser alojado en un pequeño laboratorio. Como resultado de este protocolo, los investigadores serán capaces de manejar una instalación de pez cebra que proporcionará condiciones saludables para el pez cebra. Además, las ilustraciones siguientes ayudará a identificar los huevos fertilizados, el pez cebra adultos, y su comida. Una ilustración de un pez cebra macho (Figura 1A) y el pez cebra hembra (Figura 1B y 1C) se muestra para ayudar a los investigadores distinguir entre un macho y una hembra de pez cebra para la cría de propósito Figura 2 representa una vista microscópica de;. Artemias a 12X (figura 2A), un camarón de salmuera solo a 90X (Figura 2B), y un óvulo no fertilizado en salmuera camarón 90X (Figura 2 C). Esto le ayudará a entender la diferencia entre camarones de salmuera no fertilizados y fertilizados para proper fines de alimentación animal. Los huevos fertilizados y sin fertilizar se muestra en la Figura 3. Figura 3A ilustra una vista microscópica de embriones fertilizados y no fertilizados. Embriones fertilizados son generalmente opacos y / o con ruptura de célula (s) en el interior del corion (negro flecha) mientras que los embriones fertilizados aparece intacta y creciente al estado de división celular siguiente (para la lectura detallada de las diferentes etapas de embriones de pez cebra ver 1). Superior vista ampliación de una figura fecundado un óvulo no fertilizado y se muestra en la Figura 3B y 3C, respectivamente. 4 ilustra ovipositor un pez cebra hembra para ayudar a los investigadores distinguir entre un macho y una hembra de pez cebra.

Varios críticos problemas que se pueden producir en un laboratorio de pez cebra incluyen el bloqueo del suministro de agua a individuo / todos los tanques del sistema de vivienda, la calidad deficiente del agua y las fugas en las tuberías o reservorios del sistema de circulación. Además,problemas en la obtención de embriones de cría podría ser otro motivo de preocupación. Solución de problemas de estas cuestiones se discuten a continuación.

Figura 1
Figura 1. Una ilustración de un pez cebra macho (A) y hembra pez cebra (B, C).

Figura 2
Figura 2. Una vista microscópica de salmuera camarones a 12X (A), un camarón de salmuera sola en 90X (B), y un huevo no fertilizado en el camarón de salmuera 90X (C).

Figura 3
Figura 3. Vista microscópica (16X) de huevos fertilizados y sin fertilizar, donde sólo dos huevos no fertilizados, los huevos no fertilizados se indican con flechas negras (A). Mayor aumentoVer (90X) de un. fertilizado (B) y un óvulo no fertilizado (C)

Figura 4
Figura 4. Un pez cebra hembra ovipositor (indicado con la flecha negro) Ilustración.

Parámetro Rango óptimo
Alcalinidad 50-150 mg / L CaCO 3
pH 06.08 a 07.05 (6,0-8,5 tolerada)
Temperatura 26-28.5 ° C
Dureza 50-100 mg / L CaCO 3
El amoníaco no ionizado <0,02 mg / L
El nitrato (NO 3 -) <50 mg / L
Nitrito (NO 2 -) <0,1 mg / L
El oxígeno disuelto > 6,0 mg / L
Salinidad 0.5-1 g / L
Conductividad 300 -1 500 mS

Tabla 2. Parámetros de calidad del agua. Parámetros de calidad del agua. Rango óptimo de los parámetros ambientales en el acuario de pez cebra 11.

Discussion

El pez cebra se originan en el río Ganges en el norte de la India y se están volviendo populares en la investigación, tanto en su estado adulto como larvario 2, revisado por Spence et al. 3. Pez cebra tienen varias ventajas sobre otros modelos animales tales como alta fecundidad, la facilidad de mantenimiento, limpieza óptico de embriones, el desarrollo embrionario rápida y bajo costo de mantenimiento. Son susceptibles de manipulación genética 6 y adecuado para la detección de drogas de alto rendimiento de 4,5. Su fertilización es externa que es ventajoso para su uso por los biólogos del desarrollo. Debido a estas características favorables, el pez cebra están ganando popularidad en genética 7, 8 farmacológico, y la investigación del comportamiento 9,10. Hay una serie de retos para el mantenimiento de una instalación de pez cebra y la cría de pez cebra para obtener embriones. Aquí, describimos nuestras experiencias y recomendaciones para hacer frente a estos retos y oSQUEMA un protocolo para el mantenimiento del sistema, la alimentación y crianza de las larvas.

Mantenimiento del sistema

Para mantener el pez cebra en un estado saludable, es importante proporcionarles un entorno limpio en un sistema de acuario que funcione correctamente. Una parte importante de este sistema está cambiando filtros regularmente de modo que todos los tanques de recibir el flujo de agua adecuado y agua limpia. Es de vital importancia para evitar fallos en el suministro de agua para cada tanque de ciclismo debido a las tuberías del sistema bloqueado. Los tubos se pueden limpiar con un flujo mayor que la presión normal del agua y si el bloqueo se produce. Idealmente, alrededor de 10% de agua del sistema debe ser reemplazado a diario para mantener la buena calidad del agua. Alternativamente, el agua puede ser reemplazado mientras se cambia el cartucho o filtro de carbono. Esto asegura que la suciedad depositada en las tuberías que conectan estos filtros se retira. La calidad del agua debe ser confirmada en una base regular. Parámetros tales como la alcalinidad, pH, temperatUre, dureza, amoniaco, oxígeno disuelto, salinidad, conductividad y deben ser considerados como factores importantes en la representación de la calidad del agua del sistema (véase la Tabla 2 para más detalles). En el nitrato menos, pH, y temperatura deben ser monitorizados sobre una base regular para asegurar buena calidad de agua para el pez cebra vivienda. Ideal nitrato (NO 3 -) niveles son <50 mg / L 11, de ser alto de estos niveles puede ser reducido mediante la sustitución del agua en el sistema de circulación con el sistema de agua fresca. En ocasiones, los filtros no se ajustan bien y fuga por lo que se recomienda comprobar que no haya fugas después de un cambio de filtro. Si el flujo de agua desde el depósito principal está bloqueada o bien después de cambiar la bomba de agua o de cambiar un filtro, el flujo de agua puede ser restituido por aflojar o retirar el filtro durante unos segundos para liberar cualquier vacío que se genera en las tuberías. El tiempo requerido para cambiar los filtros puede variar dependiendo de varios factores tales como carga total o biológican el sistema, la limpieza de los filtros de otros, y la suciedad depositada en las tuberías. Por lo tanto, los filtros deben cambiarse inmediatamente si están sucias o si todos los tanques no están recibiendo el suministro de agua adecuado. También se recomienda que la red de pesca puede limpiar con 70% de etanol, y se enjuagaron en agua para descontaminar, y se deja secar antes de volver a utilizarlos. Secado asegura la evaporación de etanol que de otro modo es tóxico para los peces.

La mayoría de los sistemas de uso de pez cebra de-agua clorada del grifo, sin embargo, algunos sistemas utilizan agua desionizada. Es importante mantener la conductividad del agua del sistema de entre 300 y 1.500 mS ~ ya que esto reduce la energía que el pez necesita para mantener las sales del cuerpo. Por lo tanto, el pez cebra no se puede mantener en agua desionizada a menos sales se añaden a mantener los niveles de conductividad óptima. Existe el riesgo de posibles altas concentraciones de cobre en el agua del sistema si se utiliza agua corriente, porque el filtro de carbón no eliminar el cobre. Por lo tanto, uSERS debe comprobar si las concentraciones de cobre y tuberías de cobre evitar en lo posible.

Alimentación

Pez cebra nunca deben ser sobrealimentadas ya que esto puede aumentar el nivel de nitrato en el agua, afectando posiblemente su crianza 11 o viabilidad, ya que algunos peces pueden morir debido a comer en exceso. Se recomienda no proporcionar más alimentos durante cualquier alimentación de un que un tanque de peces puede terminar en 10 minutos. Es muy importante para eliminar la sal de la salmuera camarones antes de alimentar a los peces cebra como la concentración de exceso de sal causa la muerte. Si más huevos de pez cebra son necesarios, los peces pueden ser alimentados tres veces al día. Limpieza de los tanques de peces reproductores diario también mejora los niveles de producción de huevos.

Cuando se alimenta en los sistemas de hábitats acuáticos que solemos apagar la bomba de agua y bomba de aire para permitir a los peces a comer la comida durante 10 min. Esto disminuye la cantidad de comida que se lava en los filtros. Sin embargo, los usuarios deben tener cuidado de remascua para encender las bombas de nuevo más tarde.

Cría

El pez cebra son por lo general en condiciones de cría óptima entre ~ 3 y 18 meses de edad. Por parejas de cría no debe realizarse durante dos días consecutivos 11, sin embargo, en el tanque de cría se puede realizar a diario como un tanque puede contener muchos peces que reduce la posibilidad de que el mismo par de peces que se crían durante dos días en una fila. El servicio debe de llevarse a cabo a intervalos regulares, incluso si los huevos no son necesarios. Este proceso asegurará que el ciclo de reproducción de los peces se mantiene. Se recomienda que haya más mujeres que hombres en una cría de puesta a punto. Pez cebra macho cambiar sus parejas femeninas en un 12 a diario que apoya esta recomendación. Además, en nuestro laboratorio que inicialmente tuvieron problemas con la cría, sin embargo, con más mujeres que hombres en la crianza de configuración ayudado a resolver el problema. Por otra parte, la alimentación con una proteína de alto content dieta y artemia dos o tres veces al día, mezclar el pescado de los tanques de padres diferentes (distintos), manteniendo la temperatura de la cría de configuración entre 27 y 28 ° C, y apretando los vientres de las hembras con ovarios tubos bloqueados utilizando suave masaje mejora aún más la producción de huevos. Se recomienda llevar un registro de las líneas de peces / origen para evitar la endogamia entre hermanos. Esto mejora la producción de embriones. Llevar un registro del número de embriones fijados por los peces de cada tanque también es recomendable. Esto ayuda a mantener un registro de los mejores tanques de cría de peces y tomando medidas para mejorar la reproducción en los peces no poner huevos.

El aumento de las larvas

La alimentación de las larvas debe comenzar a partir del 5 dpf (fertilización días después). Las larvas jóvenes pueden ser alimentados con comida seca de ~ 100 micras de tamaño (por ejemplo, ZM100) o alimentos vivos tales como paramecio y rotíferos (que estimula el crecimiento). El tamaño de la comida lenta se puede aumentara 200 micras (por ejemplo ZM200) o 300/400 micras (por ejemplo ZM300). Una población de peces adultos debe estar alrededor de 7.6 peces por litro de agua. Esta práctica se recomienda para un mejor mantenimiento de DBO (demanda biológica de oxígeno) a los tanques.

Disclosures

No hay conflictos de interés declarado.

Acknowledgments

Los autores desean agradecer a Tammy Esmaili por su ayuda en la gestión de los consumibles de laboratorio. AA es el beneficiario de una beca de doctorado del Centro de Excelencia para la Investigación de la Enfermedad de Alzheimer y Atención de la Facultad de Ciencias Médicas de la Universidad Edith Cowan. MC Doctor recibe apoyo financiero del Rotary Club, de Perth. AM, GV, KT, y RNM son financiados por la Fundación de Investigación del Alzheimer del McCusker.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Zebrafish circulating system Aquatic Habitats, USA AHAB stand-alone, bench-top systems
Sodium Bicarbonate Sigma Aldrich S6297
Fish food dispenser/Dry food feeder Aquatic Habitats, USA AH19
Microscope Olympus SZX12
Dry Food ZM Fish food, UK ZM100, ZM200, ZM300
Brine shrimp eggs Salt Creek, Inc., USA Premium Grade
In-tank breeders Aquatic Habitats, USA ITSTS-A
Activated carbon Penn-Plax Pro-crab, USA PBC3MF
Breeding tanks Aquatic Habitats, USA SBTANK (1L)
Breeder Tank-2 (2L)
Red sea salt Red sea salt, USA Local pet store/
www.redseafish.com
Filters (Canister, filter pads, and UV) Aquatic Habitats, USA aquatichabitats.com
Siporax Media Aquatic Habitats, USA BF 820
Brine shrimp net Aquatic Habitats, USA BSN 1
Brine shrimp hatcher Aquatic Habitats, USA BS252
Baffles Aquatic Habitats, USA aquatichabitats.com
Table 1. Table of specific reagents and equipment used in this protocol.

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References

  1. Kimmel, C. B., Ballard, W. W., Kimmel, S. R., Ullmann, B., Schilling, T. F. Stages of embryonic development of the zebrafish. Dev. Dyn. 203, 253-310 (1995).
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Comments

7 Comments

  1. zebra fish laboratory play an important role in the world.Zebra fish laboratory help us from the various method like cleaning water etc.It is very nice and informative sharing.For more detail.visit water tank Sydney

    Reply
    Posted by: micheal c.
    March 14, 2013 - 1:55 AM
  2. I would like further information about your feeding protocols for larval rearing. I am currently using rotifers then brine shrimp but know there are lots of ways to do it. Thanks.

    Reply
    Posted by: Edward F.
    April 24, 2013 - 12:33 PM
  3. Dear Edward,
    Please accept my apologies for the late reply. Yes, you are right, there are several other ways to feed zebrafish larvae. You can feed them with dry food of

    Reply
    Posted by: Avdesh A.
    May 28, 2013 - 7:02 AM
  4. Aquatic Habitats seems to have discontinued production of the manual fish feeder, AH19. Has anyone found an alternative vendor for a product that is similar?

    Reply
    Posted by: Anne W.
    October 19, 2015 - 1:21 PM
  5. With normal tanks and aeration systems (without sophisticated filters, flow through water supply and so..), how to main maintain zebra fish. Any suggestions for a small scale set up? how to improve the egg quality? (some articles say that it is mandatory, to only breed fish once in a week. Even after following that, eggs tend to die after budding stage)

    Reply
    Posted by: Niranjana Kamala Priya S.
    February 12, 2016 - 6:13 AM
  6. Dear Niranjana, Please accept my apologies for the late reply. Are you still facing the same problem of eggs being dying after budding stage? If yes, can you please describe how they appears before they die? For example, is there any fungus growth in the petridish. How many eggs do you keep in a petridish?
    Thanks
    Kind Regards
    Avdesh

    Reply
    Posted by: Avdesh A.
    January 31, 2017 - 10:30 AM
  7. we regularly wash eggs, and maintain it in E3 medium (to prevent fungal contamination), though 80% of them die before hatching. Remaining 20 % survives for a month (till the yolk sac disappears).But, only 2 or 3 survives after that.

    Reply
    Posted by: Niranjana Kamala Priya S.
    February 2, 2017 - 12:49 AM

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