रिसर्च के लिए ब्रोन्कोएल्वियोलर Lavage (बाल), पर्याप्त नमूना यील्ड प्राप्त

Medicine
 

Summary

हम कम दबाव चूषण का उपयोग अक्षितंतुतंत्र संबंधी और ब्रोन्कोएल्वियोलर पानी से धोना के लिए एक अनुसंधान तकनीक का वर्णन. तकनीक फेफड़ों ब्रोन्कोएल्वियोलर सतहों से प्रतिरक्षा कोशिकाओं फसल के लिए प्रयोग किया जाता है. स्थानीय संवेदनाहारी और हल्के होश में बेहोश करने की क्रिया (midazolam) प्रयोग किया जाता है. विषयों प्रक्रिया अच्छी तरह से और अनुभव कम से कम दुष्प्रभावों को सहन.

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Collins, A. M., Rylance, J., Wootton, D. G., Wright, A. D., Wright, A. K., Fullerton, D. G., Gordon, S. B. Bronchoalveolar Lavage (BAL) for Research; Obtaining Adequate Sample Yield. J. Vis. Exp. (85), e4345, doi:10.3791/4345 (2014).

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Abstract

हम mucosal सतह से nonadherent कोशिकाओं और फेफड़ों के अस्तर तरल पदार्थ को निकालने के क्रम में मार्गदर्शन हाथ पकड़ा चूषण का उपयोग ब्रोन्कोएल्वियोलर पानी से धोना (बाल) के साथ अक्षितंतुतंत्र संबंधी के लिए एक अनुसंधान तकनीक का वर्णन. अनुसंधान वातावरण में, बाल फेफड़ों के भीतर जन्मजात (फेफड़ों बृहतभक्षककोशिका) के नमूने, सेलुलर (बी और टी कोशिकाओं), और humoral (immunoglobulin) प्रतिक्रियाओं की अनुमति देता है.

बाल अंतरराष्ट्रीय स्तर पर अनुसंधान प्रयोजनों के लिए स्वीकार कर लिया है और 1999 के बाद से तकनीक हमारे समूह द्वारा ब्रिटेन और मलावी में> 1,000 विषयों में प्रदर्शन किया गया है.

हमारी तकनीक डाले तरल पदार्थ के कोमल हाथ से आयोजित चूषण का उपयोग करता है, यह बाल मात्रा लौट अधिकतम और बाल तरल पदार्थ के भीतर कोशिकाओं की संरचना और समारोह को संरक्षित करने और विकास की सुविधा के लिए व्यवहार्यता की रक्षा करने के क्रम में रोमक epithelia पर न्यूनतम कतरनी बल लागू करने के लिए बनाया गया है पूर्व vivo संस्कृति में कोशिकाओं की. अनुसंधान तकनीक इसलिए एक बड़ी मात्रा में भारतीय नौसेना पोत का उपयोग करता हैtillate (आमतौर पर 200 मिलीलीटर के क्रम में) और कोशिका क्षति को कम करने के लिए मार्गदर्शन सक्शन कार्यरत हैं.

मरीजों को स्थानीय संवेदनाहारी दिया सचेत बेहोश करने की क्रिया (midazolam) की पेशकश की है, और कम से कम साइड इफेक्ट के साथ अच्छी तरह से प्रक्रिया को सहन कर रहे हैं. मौखिक और लिखित विषय में जानकारी सहिष्णुता में सुधार और लिखित सूचित सहमति अनिवार्य है. विषय की सुरक्षा सर्वोपरि है. विषय को ध्यान से स्पष्ट शामिल किए जाने और अपवर्जन मानदंड का उपयोग कर चयन कर रहे हैं.

इस प्रोटोकॉल संभावित जोखिम का एक विवरण, और उन्हें कम करने के लिए कदम उठाए गए हैं, मतभेद की एक सूची, पूर्व और बाद की प्रक्रिया की जाँच करता है, साथ ही सटीक ब्रोंकोस्कोपी और प्रयोगशाला तकनीक भी शामिल है.

Introduction

पृष्ठभूमि

अक्षितंतुतंत्र संबंधी नैदानिक ​​अभ्यास के लिए विकसित किया गया था, यह व्यापक रूप से दोनों लक्षणपूर्वक और therapeutically 1,2 प्रयोग किया जाता है. ब्रोन्कोएल्वियोलर पानी से धोना (बाल) nonadherent कोशिकाओं और mucosal सतह से फेफड़ों के अस्तर तरल पदार्थ निकालता है, बायोप्सी mucosal और submucosal ऊतकों नमूना करने के लिए प्रयोग किया जाता है. अनुसंधान वातावरण में, बाल फेफड़ों के भीतर, (फेफड़ों मैक्रोफेज 3-5) जन्मजात सेलुलर (बी और टी कोशिकाओं 6) के नमूने, और humoral (immunoglobulin 7) प्रतिक्रियाएं देता है.

बाल अंतरराष्ट्रीय स्तर पर अनुसंधान प्रयोजनों 8 स्वीकार कर लिया है और 1999 के बाद से तकनीक हमारे समूह द्वारा ब्रिटेन और मलावी में> 1,000 विषयों में प्रदर्शन किया गया है. हम प्रयोगात्मक मानव न्यूमोकोकल गाड़ी 9,17, बायोमास धुआं 5, एचआईवी और टीकाकरण, और सहायक उपचार छात्र सहित न्यूमोकोकल प्रतिजन के लिए, सहज सेलुलर, और प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया के अध्ययनों में इस तकनीक का उपयोगनिमोनिया से वसूली में मर जाता है. हमारी तकनीक डाले तरल पदार्थ के कोमल हाथ से आयोजित चूषण का उपयोग करता है, यह लौटा बाल मात्रा को अधिकतम और बाल तरल पदार्थ के भीतर कोशिकाओं की संरचना और समारोह को संरक्षित करने के क्रम में रोमक epithelia पर न्यूनतम कतरनी बल लागू करने के लिए बनाया गया है.

एक शोध के संदर्भ में बाल निदान या उपचार लाभ हासिल करने के लिए लक्ष्य कर रहे हैं जो श्वसन और गहन देखभाल चिकित्सकों (अक्सर कहा जाता ब्रोन्कियल धोने, धोने, पानी से धोना, या बाल) द्वारा अभ्यास है कि से एक अलग तकनीक का इस्तेमाल करता. अनुसंधान तकनीक कोशिकाओं फसल और पूर्व vivo संस्कृति में कोशिकाओं के विकास को सुविधाजनक बनाने के लिए व्यवहार्यता की रक्षा करने के लिए बनाया गया है. इन कारणों के लिए अनुसंधान तकनीक (आमतौर पर 200 मिलीलीटर के क्रम में) एक बड़ी मात्रा instillate का उपयोग करता है और कोशिका क्षति को कम करने के लिए मार्गदर्शन सक्शन कार्यरत हैं. मरीजों को स्थानीय संवेदनाहारी दिया सचेत बेहोश करने की क्रिया (midazolam) की पेशकश की है, और कम से कम साइड इफेक्ट के साथ अच्छी तरह से प्रक्रिया को सहन कर रहे हैं. मौखिक और लिखित subjecटी जानकारी सहिष्णुता में सुधार और लिखित सूचित सहमति 1 अनिवार्य है.

लक्ष्य

समग्र लक्ष्य प्रक्रिया सुरक्षित और प्रभावी होना चाहिए. विषय कोई भी शारीरिक अशांति का अनुभव नहीं करना चाहिए और ऑपरेटरों लगातार विषयों से बाल की 100 मिलीलीटर से अधिक एकत्र करना चाहिए. प्रक्रिया के बाद, विषयों न्यूनतम दुष्प्रभाव अनुभव करना चाहिए.

सुरक्षा

विषय की सुरक्षा सर्वोपरि है. विषय को ध्यान से स्पष्ट शामिल किए जाने और अपवर्जन मानदंड का उपयोग कर चयन कर रहे हैं. इस प्रोटोकॉल संभावित खतरों और उन्हें कम करने के लिए उठाए गए कदमों का विवरण शामिल.

अनुसंधान ब्रोंकोस्कोपी करने के लिए मतभेद निरपेक्ष या रिश्तेदार के रूप में व्यक्त किया जा सकता है, और बहिष्कार और शामिल किए जाने के मापदंड के रूप में हमारे अध्ययन प्रोटोकॉल में शामिल किए गए हैं. हमारे विषयों सभी पूर्ण स्वास्थ्य सुनिश्चित करने के लिए जांच कर रहे हैं.

निरपेक्ष मतभेदअस्थिर ग्रीवा रीढ़, अनुत्तरदायी हाइपोक्सिया, गलशोथ, खून बह रहा प्रवणता, और घातक हृदय अतालता शामिल हैं.

वृद्धि की जटिलता दर के साथ जुड़े उन शर्तों सहित सापेक्ष मतभेद, शामिल हैं:

सामान्य: खराब सहकारी विषय 1, किसी भी महत्वपूर्ण सामान्य चिकित्सा समस्या जैसे मिर्गी, lidocaine या midazolam, गर्भावस्था, गरीब पोषण करने के लिए प्रतिकूल प्रतिक्रिया में जाना पिछले खराब सहन ब्रोंकोस्कोपी,.

श्वसन:, hypercapnia, अस्थिर अस्थमा 1, काफी बिगड़ा श्वसन समारोह 1 (FEV 1 <1 एल), फेफड़े के उच्च रक्तचाप हाइपोक्सिया [हवा <94% पर संतृप्ति (SATs)].

कार्डियोवास्कुलर: यूरीमिया, रोधगलन 1, बेहतर रग Cava रुकावट के 6 हफ्तों के भीतर.

अन्य: प्रतिरक्षादमन (हमारे समूह नियमित रूप से इस प्रक्रिया निष्पादित करता हैएचआईवी पॉजिटिव विषयों में Dure).

अनुसंधान के लिए बाल के साथ जुड़े जोखिम - 1 टेबल देखें.

Protocol

1. विषय श्वसन अनुसंधान नर्स द्वारा आगमन पर मुलाकात कर रहे हैं

  1. विषय ठोस भोजन और साफ तरल पदार्थ 1 के लिए 2 घंटे के लिए> 4 घंटे के लिए उपवास किया गया है.
  2. प्रक्रिया (मानक अस्पताल नीति के अनुसार) उपयुक्त पूर्व और बाद की प्रक्रिया की जाँच के साथ एक दिन मामले के रूप में किया जाता है.
  3. इस विषय में एक अस्पताल का गाउन पहनता है.
  4. एक छोटे गेज प्रवेशनी (आदर्श बाएं हाथ में) डाला और बाद प्रक्रिया वसूली की अवधि 1 के अंत तक बगल में रहता है.
  5. Preprocedure टिप्पणियों लिया जाता है (रक्तचाप, हृदय गति, ऑक्सीजन संतृप्ति [SATs]).
  6. विषय ब्रोंकोस्कोपी सुइट को सौंप दिया है.

2. विषय ब्रोंकोस्कोपी में अनुभवी श्वसन अनुसंधान clinician द्वारा सुइट में प्रक्रिया के लिए तैयार किया जाता है

  1. 3 लीड ईसीजी, नाड़ी oximeter 1,10 और रक्तदाबमापी, निगरानी उपकरण सहित जुड़ा हुआ है. Anesthetआईसी समर्थन लिखित सूचित सहमति सहित जरूरत नहीं है.
  2. आक्सीजन> 90% 1 SATs प्राप्त करने के लिए, के लिए 4 एल / मिनट पर नाक प्रवेशनी के माध्यम से दिया जा सकता है.
  3. ऑपरेटर इस बाँझ सामान्य नमक aspirating द्वारा प्रभावी चूषण सुनिश्चित करना शामिल है, श्वसनीदर्शी की जाँच करता है.
  4. Lidocaine के साथ सामयिक संज्ञाहरण (xylocaine का प्रयोग करके) (Instillagel 1 का उपयोग) नासिका मार्ग और मौखिक mucosa में हासिल की है
  5. बेहोश करने की उपयुक्त और विषय से अनुरोध किया है, नसों में midazolam 1 दिलाई है. एक उपयुक्त उलटा एजेंट (flumazenil) तुरंत उपलब्ध है.
  6. पुनर्जीवन उपकरण 1,10 आसानी से उपलब्ध होना चाहिए.

3. Bronchoscope डाला और तैनात है

  1. इंटुबैषेण नाक के माध्यम से आम तौर पर है. इस कारण नाक जंतु, सूजन turbinates, या किसी भी असुविधा तो विषय मुंह के माध्यम से intubated है करने के लिए संभव नहीं है (एक मुँह गार्ड को रोकने के लिए प्रयोग किया जाता है) क्षेत्र या विषय के दांतों को नुकसान पहुंचा.
  2. गला में सामयिक संज्ञाहरण आमतौर पर 4-6 मिलीलीटर की कुल प्रयोग किया जाता है, 4% lidocaine का उपयोग कर पूरा हो गया है. आमतौर पर इस टपकाना पर खाँसी का कारण बनता है.
  3. मुखर तार पारित कर रहे हैं, और सही कम पालि (RLL) और सही मध्यम पालि (आरएमएल) की श्रेणी में और आरएमएल द्वार पर, Carina में 2% lidocaine के 2 मिलीलीटर aliquots का उपयोग आगे mucosal संज्ञाहरण.
  4. श्वसनीदर्शी सक्शन ('पलक परीक्षण' सक्शन बटन का उपयोग कर लागू किया जाता है जब airway गिर इतना है कि यह एक सुरक्षित स्थिति में होने के लिए पर्याप्त बाहर का लेकिन भी बाहर नहीं है, जहां एक की स्थिति में, आदर्श औसत दर्जे खंड में, आरएमएल के भीतर तैनात है ).
  5. अच्छी स्थिति पूरी तरह bronchoscopist और तुरंत कोमल चूषण पर पूरी तरह से बंद नहीं करता है कि एक airway द्वारा स्थिति में बनाए रखा जा सकता है कि एक श्वसनीदर्शी द्वारा पलक परीक्षण के दौरान संकेत दिया है.

4. बाल किया जाता है

  1. चार 60 मिलीलीटर सीरिंज पूर्व कर रहे हैं60 मिलीग्राम, 50 मिलीग्राम, 50 मिलीग्राम, और लगातार सीरिंज में 40 मिलीलीटर - गरम सामान्य नमक से भरा. विषय और bronchoscopist तैयार हैं, bronchoscopist आरएमएल में स्थिति का कहना है whilst खारा के पहले सिरिंज ब्रोंकोस्कोपी सहायक द्वारा डाले है.
  2. कोमल हाथ चूषण तो एक ही बंदरगाह और 50 मिलीलीटर सिरिंज का उपयोग कर सहायक द्वारा किया जाता है.
  3. यह प्रक्रिया तब हमारे विशिष्ट तकनीक में इस्तेमाल 200 मिलीलीटर की एक अधिक से अधिक मात्रा के साथ, एक आगे 3x दोहराया है.
  4. पुनः प्राप्त बाल तरल पदार्थ पहले से ही बर्फ पिघलने पर आयोजित लेबल कंटेनर में धीरे निष्कासित कर दिया है. ग्लास कंटेनर सेल लगाव को बाधित और सेल वापसी को अधिकतम करने के क्रम में presiliconized किया जा सकता है.
  5. बाल तरल पदार्थ surfactants द्वारा गठित सतह साबुन के बुलबुले के साथ प्रकाश के खिलाफ धुंधला दिखाई देता है.
  6. श्वसनीदर्शी धीरे - धीरे पूरी तरह से वापस ले लिया है.
  7. बाल तरल पदार्थ तत्काल प्रसंस्करण के लिए बर्फ पर देरी के बिना ले जाया जाता है.

5. विषय रिकवरी

  • विषय एक वार्ड पर श्वसन अनुसंधान नर्स से 2-4 घंटे के लिए बरामद किया है.
  • इस समय के दौरान वे (उनके निगल सुरक्षित रूप में मूल्यांकन किया जाता है) की प्रक्रिया के बाद, क्रम में आकांक्षा के जोखिम को कम आराम और तब केवल खाने और> 60 मिनट 1 पीने की अनुमति दी जाती है.
  • पोस्ट प्रक्रियात्मक टिप्पणियों पर नजर रखी और दर्ज की गई हैं. एक नैदानिक ​​परीक्षा का निर्वहन करने से पहले होता है.
  • विषय आम दुष्प्रभाव (बुखार, हल्के सही थन के नीचे का सीने में तकलीफ, गले में खराश) के बारे में predischarge बारे में जानकारी दी और महत्वपूर्ण दुष्प्रभाव 1 घटित मामले में एक संपर्क नंबर दिया जाता है.
  • विषय का पालन हुआ है 1-5 दिनों एक नैदानिक ​​संपर्क के साथ के बाद प्रक्रिया में. यह टेलीफोन पर या व्यक्ति में या तो हो सकता है.
  • 6. कोशिकाओं को प्रयोगशाला में अलग कर रहे हैं - बर्फ पिघलने पर प्रदर्शन जहां संभव

    1. बाल तरल पदार्थ की मात्रा बाँझ धुंध झाड़ू के एक डबल परत के माध्यम से दर्ज की गई और फिल्टर हो चुकी हैprechilled, बाँझ 50 मिलीलीटर अपकेंद्रित्र ट्यूबों में बलगम प्लग हटा दें.
    2. प्रकोष्ठों 5-10 मिनट के लिए 4 डिग्री सेल्सियस पर 500 XG पर centrifugation द्वारा pelleted और 50 मिलीलीटर ठंड सामान्य नमक में vortexing द्वारा धो रहे हैं. केन्द्रापसारण एक बार दोहराया है.
    3. कोशिकाओं (RPMI-1640 + 10% भ्रूण गोजातीय सीरम + 2 मिमी एल glutamine + पेनिसिलिन [40 आइयू / एमएल], स्ट्रेप्टोमाइसिन [75 आइयू / एमएल], और Amphotericin बी [0.5 आइयू / एमएल]) और संस्कृति के माध्यम में resuspended अंतर गिनती trypan नीले रंग के एक बराबर मात्रा और एक hemocytometer का उपयोग प्रदर्शन किया.
    4. सेल निलंबन उचित टिशू कल्चर प्लेट में pipetting द्वारा शुरू की, (हम 1 x 10 6 कोशिकाओं / एमएल) का उपयोग करें, और बृहतभक्षककोशिका पालन अनुमति देने के लिए 3 घंटे के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर incubated आवश्यक घनत्व सामान्यीकृत है. अच्छी तरह से प्रति इस सेल निलंबन के 1 मिलीलीटर 24 अच्छी तरह से संस्कृति प्लेटों के लिए उपयुक्त है.
    5. लिम्फोसाइट काम के लिए, ऊष्मायन के 3 घंटे के बाद, संस्कृति के माध्यम से धीरे से ऊपर और नीचे 3x pipetted, और एकत्र किया जाता है. यह मध्यम लिम्फोसाइटों शामिलऔर nonadherent मैक्रोफेज और लिम्फोसाइट समारोह का आकलन करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है, यह भी शुद्धि चरणों में इस्तेमाल किया जा सकता है मैक्रोफेज दूर करने के लिए CD14 चुंबकीय मोतियों के साथ उदा.
    6. बृहतभक्षककोशिका काम के लिए, ऊष्मायन के 3 घंटे के बाद, मध्यम ध्यान से न्यूनतम pipetting के साथ हटा दिया जाता है और एंटीबायोटिक दवाओं के बिना ताजा, गर्म मध्यम (1640 RPMI + 10% भ्रूण गोजातीय सीरम + 2 मिमी एल glutamine) के साथ बदल दिया. मैक्रोफेज (चित्रा 1 देखें) टिशू कल्चर प्लेट के अनुयायी हैं.

    Representative Results

    अच्छा नैदानिक ​​परिणाम 100 से अधिक मिलीग्राम की एक बाल मात्रा और अधिक से अधिक का अनुभव है, जो एक विषय, मामूली असुविधा (1 टेबल देखें) कर रहे हैं. यह एक सुकून और सहकारी विषय की आवश्यकता है. चिकित्सक, (माल) पूरी तरह से तैयार विश्वास हो, और समझ स्वयंसेवक की ओर होना चाहिए.

    (अंतर मायने रखता सहित) सेलुलर उपज में अंतर और इंट्रा विषय परिवर्तनशीलता वर्णित किया गया है. स्वस्थ विषयों से अंतर कोशिकाओं की गिनती आम तौर पर> 90% neutrophils की कम संख्या के साथ मैक्रोफेज (<2%) और लिम्फोसाइटों (5-10%) हैं. खुर्दबीन स्लाइड पर centrifuged बाल कोशिकाओं में इस जानकारी चित्रा (1) प्राप्त करने के लिए एक अंतर परमाणु दाग के साथ दाग जा सकता है. चित्रा 1 में, बाल कोशिकाओं तय की और निर्माता के निर्देशों के अनुसार Hemacolor धुंधला का उपयोग दाग दिया गया है. कम से कम 300 कोशिकाओं मैक्रोफेज के लिए विश्वसनीय परिणाम प्राप्त करने के लिए गिना जाना चाहिए,neutrophils और लिम्फोसाइटों, दुर्लभ प्रकार की कोशिकाओं के लिए 500 कोशिकाओं.

    खतरा जोखिम : द्वारा इस प्रोटोकॉल में कम
    ब्रोंकोस्कोपी और बाल 1, 14 का प्रभाव
    हल्के असुविधा <25% 14, # उचित analgesia और बेहोश करने की क्रिया.
    इस विषय के लिए आत्मविश्वास से लबरेज और देखभाल दृष्टिकोण.
    नाक से खून आना <1% # केवल नाक इंटुबैषेण के लिए हल्के दबाव.
    यदि विषय असुविधा या संकुचित एपर्चर - मौखिक इंटुबैषेण बजाय.
    Endobronchial नकसीर (बलगम में खून आना) <0.1% * 15 कोई बायोप्सी लिया.
    ब्रोंकोस्कोपी के दौरान सावधान नियंत्रण - सांस की म्यूकोसा से परहेज.
    Nausईए, उल्टी और आकांक्षा निमोनिया <0.02% 14, # ठोस भोजन> 4 घंटा preprocedure 1 के लिए उपवास.
    पर्याप्त सामयिक संज्ञाहरण.
    प्रक्रिया के दौरान Semirecumbent स्थिति.
    संभल के बाद प्रक्रिया अवलोकन.
    बुखार 0.01 14-1% # 16 सूजन से संबंधित है, और बाल की अधिक से अधिक संग्रह द्वारा कम से कम हो सकता है.
    एकल पालि बाल ही. #
    गले में नाक / गले और स्वर बैठना <25% 14, # नाक, गले और गला (खाँसी को न्यूनतम) की पर्याप्त सामयिक संज्ञाहरण.
    संक्रमण <नकारात्मक एचआईवी में 0.1%,
    एचआईवी पॉजिटिव 14, # में 1%
    स्टैंडर्ड श्वसनीदर्शी धोने प्रक्रिया 1.
    एकल पालि बाल ही. #
    संक्रमण के प्रारंभिक मान्यता: 1 घंटा एक के भीतर नैदानिक ​​परीक्षा1-5 दिनों ब्रोंकोस्कोपी के बाद डी नैदानिक ​​संपर्क.
    सीने में दर्द / खांसी <0.2% 14, # एकल पालि बाल ही. अधिक से अधिक बाल संग्रह. #
    दवाओं के प्रभाव: lidocaine, midazolam
    अतालता * बहुत दुर्लभ 5 मिलीग्राम की अधिकतम / इस्तेमाल 14 lidocaine किलो.
    डाले गरम सामान्य नमक. #
    पल्स oximetry (ऑक्सीजन पूरकता के साथ SATs> 90%), प्रक्रिया के दौरान हृदय की निगरानी.
    बेंजोडाइजेपाइन प्रतिपक्षी (flumazenil) तुरंत उपलब्ध.
    भटकाव / आंदोलन <0.1% † #
    कार्डियो श्वसन अवसाद * बहुत दुर्लभ

    * 1500 से अधिक अनुसंधान की प्रक्रिया में हमारे समूह में अनुभव नहीं.

    † Idiosबल्कि खुराक पर निर्भर प्रतिक्रिया से yncratic.

    # 1500 अनुसंधान प्रक्रियाओं में हमारे समूह के अनुभव.

    तालिका 1. अनुसंधान के लिए बाल के साथ जुड़े जोखिम. यह खतरा या जोखिम शामिल है और यह वर्णित तकनीक का उपयोग करके कम हो जाता है कैसे. ब्रोंकोस्कोपी / बल और भी इस्तेमाल किसी भी औषधीय दवाओं के प्रभाव के प्रभाव शामिल हैं.

    चित्रा 1
    चित्रा 1. बाल मैक्रोफेज और समसामयिक न्यूट्रोफिल दिखा रहा है एक खुर्दबीन स्लाइड. बाल कोशिकाओं मेथनॉल में तय की और Hemacolor लाल (eosin वाई) और ब्लू (नीला बी) के साथ दाग दिया गया है.

    Discussion

    अच्छे परिणाम प्राप्त करने के लिए निम्नलिखित सहायक होते हैं:

    1. जीभ और पीछे oropharynx के आधार पर अच्छा anesthetisation. यह विषय के प्रक्रियात्मक सहिष्णुता और समग्र आराम में सुधार, क्योंकि यह महत्वपूर्ण है.
    2. एक बाल चिकित्सा (बाहरी व्यास 3.4-3.6 मिमी) या वयस्क श्वसनीदर्शी (बाहरी व्यास 4.8-5.9 मिमी) भी इस्तेमाल किया जा सकता है.
    3. नाक इंटुबैषेण के दौरान किसी भी असुविधा है, तो मौखिक इंटुबैषेण पसंद किया जाता है. सामान्य तौर पर नाक इंटुबैषेण एक सरल तकनीक या तो या छोड़ दिया जाना चाहिए.
    4. Oropharynx को lidocaine के प्रारंभिक टपकाना के बाद, विषय श्वसनीदर्शी मौखिक रूप से सम्मिलित किया जाता है, खासकर अगर संज्ञाहरण की शुरुआत लंबित वापस लिया जाना श्वसनीदर्शी पसंद कर सकते हैं.
    5. कम से कम 10 एक्स 10 मिलीलीटर सीरिंज lidocaine के केवल 2-4 मिलीलीटर के साथ प्रीफिल्ड सुनिश्चित कर रहे हैं. एयर सीधे तार और endobronchial muco पर संज्ञाहरण के बेहतर वितरण की अनुमति सीरिंज में छोड़ दिया जाना चाहिएसा.
    6. प्रक्रिया के दौरान खांसने के बाद से काफी बाल उपज कम कर देता है, गरम खारा का उपयोग और अच्छा mucosal संज्ञाहरण यह कम करने के लिए महत्वपूर्ण हैं कर रही है.
    7. 50 मिलीलीटर सीरिंज गरम नमक के साथ प्रीफिल्ड किया जाना चाहिए. यह मृत अंतरिक्ष नुकसान और टर्मिनल एयरवेज में चल शेष की वजह से 10-20 के बीच मिलीलीटर उपज के लिए डाले सामान्य नमक के पहले 50 मिलीलीटर के लिए सामान्य है. इसके अलावा aliquots तरल पदार्थ का एक बड़ा अनुपात वापसी.
    8. ऑपरेटर हमेशा बाँझ सामान्य नमक aspirating द्वारा प्रभावी चूषण सुनिश्चित करने सहित, पूर्व इंटुबैषेण को श्वसनीदर्शी जांच होनी चाहिए. चूषण की हानि सामान्यतः कारण श्वसनीदर्शी या चूषण डिवाइस के साथ कनेक्शन के आसपास ट्यूब या लीक की kinking के लिए हो सकता है.
    9. मैनुअल चूषण के दौरान आदर्श airway पतन नहीं होना चाहिए. सक्शन खरीदे airway गिर अगर, बाल रिटर्न एक वाल्व तंत्र को कम कर दिया, और स्थानीय सूजन और खून बह रहा है और अधिक होने की संभावना है रहे हैं: यह बदले में वायुमार्ग एम बनाता हैअयस्क चिड़चिड़ा और खांसी की संभावना है. सबसे उपयुक्त आरएमएल subsegmental शाखा का चयन और कम सक्शन दबावों का उपयोग इसलिए महत्वपूर्ण दोनों हैं.
    10. हवा लगातार aspirated है जब श्वसनीदर्शी के लिए सिरिंज के संबंध और भी बाहर का airway में श्वसनीदर्शी की स्थिति पुनः जाँच. यह एक आवर्ती समस्या है, के बाद प्रक्रिया श्वसनीदर्शी अपने आप में कोई छेद कर रहे हैं कि सुनिश्चित करते हैं.
    11. धूम्रपान करने वालों से बाल अक्सर intracellular particulates की उपस्थिति के लिए गहरा है. धूम्रपान करने वालों को कम अच्छी तरह से ब्रोंकोस्कोपी बर्दाश्त है, और वृद्धि खांसी हो सकता है.
    12. बेहतर बाल मात्रा उपज> 100 मिलीलीटर है. > 150 मिलीलीटर की एक उपज उत्कृष्ट है. हम> 170 मिलीलीटर किसी भी पैदावार का अनुभव नहीं है. सेल उपज और बाल मात्रा उपज के बीच कोई रेखीय रिश्ता है.
    13. <100 मिलीलीटर की पैदावार, हमारे अनुभव में, इस तरह के खांसी, सीने में दर्द और बुखार के रूप में साइड इफेक्ट के लिए नेतृत्व की संभावना है. हम <100 की पैदावार के साथ विषयों सिफारिश हो मिलीलीटर की सलाह है किबाएं पार्श्व स्थिति में वेरेद, यह किसी भी शेष फेफड़ों में तरल पदार्थ की जल निकासी सहायता कर सकते हैं.
    14. क्लीनिकल संपर्क कोई दुष्प्रभाव सुनिश्चित करने के लिए 1-5 दिनों के भीतर इस विषय के साथ किया जाना चाहिए.
    15. Midazolam बेहोश करने की क्रिया ब्रिटेन में विषयों के 50% और मलावी में <5% <के लिए प्रयोग किया जाता है. Midazolam सीधे सहनशीलता में सुधार करने के लिए प्रकट नहीं होता है, कुछ ऑपरेटरों बेहोश करने की क्रिया कभी कभी विषय के साथ एक सुसंगत (और आश्वस्त) संवाद बनाए रखने में उल्टा हो सकता है कि लग रहा है.
    16. हमारे अनुभव में, इस तकनीक के साथ एक महत्वपूर्ण सीखने की अवस्था है. उदाहरण के लिए डॉक्टर और नर्स के बीच समन्वय में समय लगता है और पैदावार सीखने की प्रक्रिया की शुरुआत में अक्सर कम कर रहे हैं.
    17. एचआईवी पॉजिटिव विषयों में, हम prophylactically prebronchoscopy एंटीबायोटिक दवाओं का उपयोग करें.

    Disclosures

    एंड्रिया एम. कोलिन्स बिल और मेलिंडा गेट्स फाउंडेशन, और कोई संभावित परस्पर विरोधी हितों के द्वारा वित्त पोषित है. वह सम्मेलनों और व्याख्यान फीस में भाग लेने के लिए मर्क (एमएसडी) और जीएसके से धन प्राप्त हुआ है. 50 अनुसंधान Bals स्वतंत्र रूप से प्रदर्शन किया.

    जेमी Rylance वेलकम ट्रस्ट द्वारा वित्त पोषित है, और ब्याज की कोई विवाद नहीं है. वह कोई अन्य धन प्राप्त हुआ है. 70 अनुसंधान Bals स्वतंत्र रूप से प्रदर्शन किया.

    डैनियल जी Wootton एक NIHR पीएचडी फैलोशिप द्वारा वित्त पोषित है, और ब्याज की कोई संघर्ष है. 40 अनुसंधान Bals स्वतंत्र रूप से प्रदर्शन किया.

    एंजेला डी. राइट कोई संभावित परस्पर विरोधी हितों की है. 100 से अधिक अनुसंधान Bals साथ सहायता प्रदान की.

    एडम के.ए. राइट कोई संभावित परस्पर विरोधी हितों की है. उन्होंने कहा कि 50 बाल के नमूने पर कार्रवाई की है.

    डंकन जी Fullerton

    स्टीफन बी गॉर्डन कोई संभावित परस्पर विरोधी हितों की है. उन्होंने कहा कि सम्मेलन में भाग लेने के लिए मर्क (एमएसडी) और नोवार्टिस से धन प्राप्त हुआ है. 400 अनुसंधान Bals स्वतंत्र रूप प्रदर्शन किया.

    Acknowledgments

    हमारे अनुसंधान bronchoscopies साथ अपने समर्थन के लिए ऐलेना Mitsi (अनुसंधान सहायक) और सीनियर कैरोल Hancock (रिसर्च नर्स) और फिल्मांकन के लिए अपने योगदान के लिए थिएटर कर्मचारियों को और डेविड शॉ (अनुसंधान नर्स) को धन्यवाद. इस प्रक्रिया फिल्माया जा करने की अनुमति के लिए भी हमारे स्वयंसेवक रेबेका Dunphy करने के लिए धन्यवाद.

    Materials

    Name Company Catalog Number Comments

    Fiberoptic bronchoscope, light, and suction source

    unspecified

    Surgical gown, sterile gloves

    unspecified

    Sphygnomanometer

    unspecified

    For continuous patient monitoring

    Pulse oximeter

    unspecified

    For continuous patient monitoring

    3-lead ECG monitor

    unspecified

    For continuous patient monitoring

    Nasal oxygen delivery 2-4 L/min

    unspecified

    Lidocaine 10% spray (Xylocaine)

    AstraZeneca

    For topical anesthesia

    Lidocaine hydrochloride 2%

    unspecified

    For topical anesthesia

    Lidocaine gel (Instillagel)

    Farco-Pharma, Germany

    Alternative products available from other suppliers

    Normal saline, sterile, 200 ml

    unspecified

    Warm to 30 °C

    10 ml taper-end syringe (x10)

    unspecified

    For administration of lidocaine

    Intravenous cannula 18 G

    unspecified

    For administration of midazolam

    Midazolam

    unspecified

    For sedation

    Flumazenil

    unspecified

    Reversal of benzodiazepine sedation (emergency use only)

    60 ml taper-end syringes (x4)

    unspecified

    For normal saline injection and BAL fluid withdrawal.

    May require connector to attach to the injection port of the bronchoscope.

    Sterile gauze swab

    Vernaid, UK

    Alternative products available from other suppliers

    Sterile container for BAL fluid

    See text and comments

    Siliconized glass bottles reduce macrophage adherence. Alternatively, 50 ml centrifuge tubes may be used (total capacity 200 ml)

    Sigmacote

    Sigma, UK

    SL2

    Only if siliconised glass bottles used. NB: Harmful and flammable. If used, follow precautions detailed in manufacturer’s MSDS

    Centrifuge

    unspecified

    At least 4 x 50 ml tube capacity. Refrigeration to 4 °C preferred.

    Shandon Cytospin centrifuge

    Thermo Scientific, UK

    For differential count only

    RPMI 1640 medium with L-glutamine

    Sigma, UK

    R8758

    Alternative products available from other suppliers

    Fetal bovine serum

    Sigma, UK

    F6178

    Alternative products available from other suppliers

    Penicillin-Streptomycin

    Sigma, UK

    P4333

    Alternative products available from other suppliers

    Amphotericin B

    Sigma, UK

    A2942

    Alternative products available from other suppliers

    Tissue culture plates

    Greiner Bio-One, UK

    662160

    Alternative products available from other suppliers

    Glass microscope slides

    unspecified

    For differential count only

    Shandon cytofunnel

    Thermo Scientific, UK

    A78710003

    For differential count only

    Shandon cytoclip

    Thermo Scientific, UK

    59910052

    For differential count only

    Hemacolor staining set (fixative, red and blue reagents)

    Merck, Germany

    111661

    Use according to manufacturer’s instructions

    DOWNLOAD MATERIALS LIST

    References

    1. BTS, The British Thoracic Society Bronchoscopy Guideline Committee - A sub-Committee of the Standards of Care Committee of the British Thoracic Society. Thorax. 56, (Suppl I), 1-21 (2001).
    2. Technical recommendations and guidelines for bronchoalveolar lavage (BAL) report of the European Society for Pneumology Task Group. Eur. Respir. 561-585 (1989).
    3. Gordon, S. B., Irving, G. R., Lawson, R. A., Lee, M. E., Read, R. C. Intracellular trafficking and killing of Streptococcus pneumoniae by human alveolar macrophages are influenced by opsonins. Infect. Immun. 68, 2286-2293 (2000).
    4. Gordon, S. B., et al. Pulmonary immunoglobulin responses to Streptococcus pneumoniae are altered but not reduced in human immunodeficiency virus-infected Malawian adults. J. Infect. Dis. 188, 666-670 (2003).
    5. Fullerton, D. G., et al. Domestic smoke exposure is associated with alveolar macrophage particulate load. Trop. Med. Int. Health. 14, 349-354 (2009).
    6. Jambo, K. C., et al. Bronchoalveolar CD4+ T cell responses to respiratory antigens are impaired in HIV-infected adults. Thorax. 66, 375-382 (2011).
    7. Eagan, R., et al. Lung fluid immunoglobulin from HIV-infected subjects has impaired opsonic function against pneumococci. Clin. Infect. Dis. 44, 1632-1638 (2007).
    8. Rose, A. S., Knox, K. S. Bronchoalveolar lavage as a research tool. Sem. Respir. Crit. Care Med. 28, 561-573 (2007).
    9. Wright, A. K. A., et al. Human Nasal Challenge with Streptococcus pneumoniae is Immunising in the Absence of Carriage. PLoS Pathog. (2012).
    10. Bolliger, C. T., et al. ERS/ATS statement on interventional pulmonology European Respiratory Society/American Thoracic Society. Eur. Respir. J. 19, 356-373 (2002).
    11. Ettensohn, D. B., Jankowski, M. J., Duncan, P. G., Lalor, P. A. Bronchoalveolar lavage in the normal volunteer subject. I. Technical aspects and intersubject variability. Chest. 94, 275-280 (1988).
    12. Ettensohn, D. B., Jankowski, M. J., Redondo, A. A., Duncan, P. G. Bronchoalveolar lavage in the normal volunteer subject. 2. Safety and results of repeated BAL, and use in the assessment of intrasubject variability. Chest. 94, 281-285 (1988).
    13. De Brauwer, E. I., Jacobs, J. A., Nieman, F., Bruggeman, C. A., Drent, M. Bronchoalveolar lavage fluid differential cell count. How many cells should be counted. Anal. Quant. Cytol. Histol. 24, 337-341 (2002).
    14. Mtunthama, N., et al. Malawians permit research bronchoscopy due to perceived need for healthcare. J. Med. Ethics. 34, 303-307 (2008).
    15. Pereira, W., Kovnat, D. M., Snider, G. L. A prospective cooperative study of complications following flexible fiberoptic bronchoscopy. Chest. 73, 813-816 (1978).
    16. Huang, Y. C., Bassett, M. A., Levin, D., Montilla, T., Ghio, A. J. Acute phase reaction in healthy volunteers after bronchoscopy with lavage. Chest. 129, 1565-1569 (2006).
    17. Gritzfeld, J. F., et al. Experimental Human Pneumococcal Carriage. J. Vis. Exp. (72), (2013).

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    2 Comments

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      Reply
      Posted by: Clark D.
      June 5, 2014 - 7:03 AM
    2. This article piqued my interest in the latest products available on the market, and I found a great resource here: http://www.medicalexpo.com/medical-manufacturer/cold-light-10514.html
      Hope this is a useful resource for you other readers.

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      Posted by: Clark D.
      June 5, 2014 - 7:03 AM

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