Met behulp van Single sensillum Opnemen op Olfactorische Neuron Reacties van bedwantsen te semiochemicaliën Detect

Neuroscience

Your institution must subscribe to JoVE's Neuroscience section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

 

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Liu, F., Liu, N. Using Single Sensillum Recording to Detect Olfactory Neuron Responses of Bed Bugs to Semiochemicals. J. Vis. Exp. (107), e53337, doi:10.3791/53337 (2016).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Het insect olfactorische systeem speelt een belangrijke rol bij het opsporen van feromonen in het milieu. Met name de antennaal sensilla die een of meerdere neuronen in het huis, worden beschouwd als de belangrijkste bijdrage in te spelen op de chemische stimuli te maken. Door direct opnemen actiepotentiaal in de olfactorische sensillum na blootstelling aan stimuli, enkele sensillum opname (SSR) techniek biedt een krachtige aanpak voor het onderzoeken van de neurale reacties van insecten chemische stimuli. Voor het bed bug, een notoire menselijke parasiet zijn meerdere soorten olfactorische sensillum gekarakteriseerd. In deze studie hebben we aangetoond neurale respons van bedinsect olfactorische sensilla twee chemische stimuli en de dosis-afhankelijke respons een van hen met de SSR methode. Deze aanpak maakt het mogelijk onderzoekers vroegtijdige screening uit te voeren voor afzonderlijke chemische stimuli op het bed bug olfactorische sensilla, die waardevolle informatie zou verschaffen voor de ontkeling van nieuwe bed bug lokstoffen of insectenwerende middelen en de voordelen van de bed bug controle-inspanningen.

Introduction

De gemeenschappelijke bed bug Cimex lectularius L (Hemiptera: Cimicidae), als tijdelijke ectoparasiet, is een verplicht bloedzuigende insecten, wat betekent dat hun overleving, ontwikkeling en voortplanting vereisen bloed bronnen van gastheren, met inbegrip van zowel mensen als dieren 1,2. Hoewel virusoverdracht is zelden gemeld als gevolg van C. lectularius, de bijtende overlast gegenereerd door een besmetting ernstig beïnvloedt gastheren zowel fysiek als psychisch 3. De invoering en wijdverbreide gebruik van chemische insecticiden, met name DDT, verminderde het risico van aantasting en tegen het einde van de jaren 1950 besmettingen waren zo laag dat ze niet langer een ernstige bezorgdheid. Echter, een aantal mogelijke factoren hebben tot opleving in bed bug populaties wereld, zoals het verminderde gebruik van insecticiden, een afname van het publiek, verhoogde reizen activiteit en de ontwikkeling van resistentie tegen insecticiden 4-9. </ p>

Chemische signalen in het milieu worden gedetecteerd en door insecten opgenomen via olfactorische organen zoals antennes en maxillaire palpen. De olfactorische sensilla op het insect antennes spelen een cruciale rol bij het opsporen van deze chemische signalen. De chemische moleculen voer de antennaal cuticula door de poriën aan de cuticula oppervlak. Geurstof bindende eiwitten in het antennaal lymfe binden aan deze chemische moleculen en transporteren naar de geurstof receptoren 10. De geurstof receptoren en hun co-receptor van de niet-selectieve kation ionkanaal de neurale membraan dat zodra deze chemische moleculen worden gedepolariseerd worden herkend door de geurstof receptoren 11.

Single sensillum opname (SSR) ontwikkeld om de extracellulaire verandering in de actiepotentiaal die uit de toepassing van hetzij chemische of niet-chemische stimuli detecteren. Door het inbrengen van een registratie-elektrode in de sensillum lymfe en een referentie-elektrodein een ander deel van het insect lichaam (gewoonlijk of de verbinding ogen of de buik), kan het vuren van de neuronen in reactie op stimuli worden geregistreerd 12. Veranderingen in het aantal pieken vertegenwoordigen de gevoeligheid van het insect op specifieke stimuli. Chemische stimuli van verschillende identiteiten en concentraties zullen uitlokken verschillende neurale respons, met verschillende bakken prijzen en temporale structuren, en kan dus worden gebruikt om het coderingsproces van het insect specifieke chemische onderzoeken.

Voor de gemeenschappelijke bed bug, zowel seksuele vormen delen hetzelfde patroon van olfactorische sensilla op de antennes: negen gegroefde peg C sensilla, 29 haar-achtige E (E1 en E2) sensilla, en één paar van elk van Dα, Dβ, Dγ vlotte pen sensilla 13,14. Zoals meerdere neuronen geïdentificeerd in elk type sensillen, is het niet eenvoudig om de actiepotentialen van verschillende neuronen zich in hetzelfde sensillen onderscheiden, zodat voor dit experiment de total aantallen actiepotentialen werden geteld off-line voor een msec periode voor en na stimulatie 500. Het aantal actiepotentialen na stimulatie werd vervolgens afgetrokken van het aantal actiepotentialen voor stimulatie en vermenigvuldigd met twee om de veranderingen in de vuursnelheid in elk afzonderlijk sensillum kwantificeren pieken per seconde 15.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

1. Voorbereiding van de instrumenten, Prikkels Solutions, en Bed Bugs

  1. Bereid een 50% KNO 2-oplossing (w / v) in een 20 ml flesje.
  2. Scherpen twee wolfraam micro-elektroden in KNO 2 oplossing bij 5 V door herhaaldelijk dompelen de wolfraamelektroden in en uit van de oplossing.
    1. Ruwweg verscherpen de wolfraamdraad door dompelen ongeveer 10 mm van de wolfraamdraad in en uit de KNO 2-oplossing met de snelheid van 2 dips / sec gedurende ongeveer 5 minuten, die sterk kunnen consumeren het vooreinde van de wolfraamdraad.
    2. Fijn verscherpen de elektrode door dompelen ongeveer 1 mm van de draadpunt in en uit de oplossing met de snelheid van 2 dips / sec gedurende ten minste 1 min teneinde een fijne en scherpe punt van de elektrode te maken. Controleer de elektrode tip diameter onder de microscoop vaak tot het 0,2-0,5 urn, die fijn genoeg om de cuticula van bed bug olfactorische sensillum doorboren moeten zijn bereikt.
      Opmerking: Tijdens handmatig scherpening de elektrode, het onderdompelen snelheid van de wolfraam draad in de 2 KNO oplossing niet constant hele tijd. Met meer praktijk is het veel gemakkelijker om een ​​relatief constante snelheid slijpen de elektrode houden. De verscherping tijd is ook onzeker, afhankelijk van hoe goed de elektrode moet worden. Hier, een elektrode met een diameter van ~ 0,2 micrometer voldoende is om te prikken door het olfactorische sensillum.
  3. Verdun elk van de chemische stimuli in dimethylsulfoxide (DMSO) van de nette verbinding een beginconcentratie van 01:10 v / v als een voorraadoplossing. Een reeks verdunningen decadic afhankelijk van het aantal vereiste doses in het experiment, opnieuw met DMSO, van elk van de voorraadoplossingen van elke chemische stof. Hier, Gebruik 10% (+) - β-pineen en eucalyptol.
  4. Plaats de unfed of zeven dagen na het voeden volwassen bedwantsen (mannelijk of vrouwelijk) van de Ft. Dix kolonie (een gift van Dr. Haynes in University of Kentucky) voor gebruik in thij experimenteren in een petrischaal.
    Let op: Er is geen exacte aantal voor bedwantsen geplaatst in de petrischaal. Het kan enkele of veel zijn.

2. Bed Bug Antennes Voorbereiding

  1. Verdoven het bed bugs op ijs (2-3 min).
  2. Fix zowel de antennes en insecten lichaam op een microscoop dekglaasje met dubbelzijdige tape en verwijder de benen met fijne schaar.
  3. Gebruik een kleine pin om zachtjes aanraken van de antennes zodat ze plakken op de band gestaag.
  4. Laat de dekglaasje tegen een kleine bal (~ 1 cm diameter) van tandheelkundige wax manipulatie vergemakkelijken en aanpassen aan een geschikte hoek (~ 90 °) van de registratie-elektrode (figuur 1).
  5. Eenmaal bevestigd, plaatst het bed bug onder een stereo-microscoop, zet de koude lichtbron en de intensiteit van de verlichting tot de antenne duidelijk wordt gepresenteerd, en de focus van de microscoop op de tweede flagellum van de bed bug antenne bij een hoge vergrotingsfactor (720x) .
    AantekeningDe intensiteit van de verlichting in het experiment gebruikte niet gekwantificeerd, wat eigenlijk afhankelijk van de ogen van de experimentator voelt de intensiteit van de verlichting.

3. Single sensillum Recording

  1. Sluit de voorversterker (10X) met de signaalregistratie controller, die is verbonden met de computer voor signaalopname en visualisatie. Zet de computer en start de software, bijvoorbeeld AutoSpike32 en klik op de "Record" mode in de menubalk. Kies dan de "wave" om zo te beginnen met het opnemen van de wave signalen.
    Opmerking: een vlakke lijn loopt van links naar rechts van de monitor herhaaldelijk moet nu zichtbaar zijn. Hier, het opnamevenster duurt 40 sec. Max wave opname is 10 sec. Geselecteerde sampling rate is 96000 en de digitale sampling rate is 240. Er is 0% te compenseren en er geen filtering, geen correctie voor het opnemen van signalen. Al deze parameterinstellingen in de software kan worden aangepast indien nodig.
  2. <li> Schakel de luidspreker en voorversterker, die wordt gebruikt om de toning stand presenteren de neuronale reacties van antennal sensillum.
  3. Plaats de referentie-elektrode in het abdomen van de gestabiliseerde bed bug.
    Opmerking: De referentie-elektrode werd gehouden door een metalen staan ​​magnetisch bevestigd aan de lucht-tafel.
  4. Nadat de referentie-elektrode is verbonden met het bed bug buik Verplaats de registratie-elektrode, die is verbonden met de voorversterker en gemanipuleerd door een micromanipulator, naar het achterste uiteinde van het bed bug antenne.
  5. Wanneer de registratie-elektrode in contact is met het juiste uiteinde van de antenne schakelen van de microscoop en lokaliseren van de elektrode bij een lage vergroting.
  6. Stel de registratie-elektrode en stijgt de vergroting tot zowel de elektrode en het antennaal sensillum in hetzelfde vlak en duidelijk zichtbaar onder de microscoop.
    Opmerking: deze keer, de microscoop gebruikelijkly op het hoogste vergroting.
  7. Plaats de registratie-elektrode in de schacht van de sensillum met de micromanipulator en gaat iets dieper wanneer de achtergrondruis is hoog vergeleken met de actiepotentiaal.
  8. Zodra duidelijk actiepotentialen worden waargenomen uit de opgenomen sensillum, vul een micropipet met 10% (+) - β-pineen. Gebruik de micropipet om 10 pi hoeveelheid van 10% (+) te storten - β-pineen op een filter papierstrook (~ 3 x 15 mm) geplaatst in een glas Pasteur pipet.
    1. Sluit het geladen pipet naar de uitlaat van de puls stromingsbuis van de stimulus controller en plaats de punt van de pipet in het gaatje in de buis gericht naar de antenne.
  9. Wanneer al deze verbindingen zijn gestabiliseerd, drukt u de voetschakelaar van de stimulus-controller om een ​​0,5 sec trekje van de stimulus (0,5 l / min) geven in de continue bevochtigde luchtstroom. Het opnemen van actiepotentialen zal gelijktijdig worden gestart wanneer de footswitch is depressief. De opname proces zal de laatste zijn voor 10 sec met ingang van 1 sec voor de stimulatie.
  10. Tel de actiepotentialen off-line voor twee 500 msec periodes, één voor en één na de stimulatie. Aftrekken elke verandering in de piek tarief tijdens de 500 msec na de stimulatie van de spontane activiteit opgenomen in de voorafgaande 500 msec en zetten de graven in de gebruikelijke omvang van spikes / s door ze te vermenigvuldigen met 2.

4. Stimulus Vervanging in de SSR

  1. Zodra de voetschakelaar is geactiveerd, levert de 10% (+) - β-pineen in de pipet op het bed bug antennes en registreer het antwoord op deze specifieke geurstof gedurende 10 seconden, waarna de pipet verwijderd.
  2. Label een nieuwe pipet met de 0,001% eucalyptol worden getest. Leg een klein stukje filtreerpapier waarop 10 ul van de stimulus is toegepast, in de nieuwe pipet.
  3. Wacht 2-5 min totdat de stimulus geheel Vaporized in de glazen pipet. Bevestig de pipet op de uitlaat van de puls stromingsbuis.
  4. Plaats de pipet in de kleine opening van de buis gericht op de antenne. Druk de voetschakelaar in en start de 10 sec opname.
  5. Koppel de pipet en bereiden een pipet met 0,01% eucalyptol.
  6. Test alle overige doses eucalyptol (0,001% tot 10%) van de antennaal sensilla de dosis-afhankelijke respons te observeren. Test van de meest verdunnen tot de minst verdunnen doses.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

Single sensillum opname is een krachtige onderzoekstechniek gebruikt in studies van insecten chemische ecologie en neurale fysiologie. Onderzoek naar de neurale reacties van insecten op verschillende vluchtige verbindingen, vooral die dacht te ecologisch gerelateerd aan de overleving en ontwikkeling van de insecten, geeft ons niet alleen waardevolle inzichten in het insect reukzin proces, maar opent ook veelbelovende nieuwe wegen die kan leiden de ontwikkeling van bruikbare nieuwe reagentia voor ongediertebestrijding.

De gemeenschappelijke bed bug, als een beruchte stedelijke ongediertebestrijding, heeft zeker trok de aandacht van veel onderzoekers. Onder de verschillende studiegebieden met betrekking tot bedwantsen, hun reukzin mechanisme is van het grootste belang voor de chemische ecologie van bedwantsen. Eerdere studies hebben expliciet beschreven de hoeveelheid en de verdeling van verschillende soorten olfactorische sensillum op bedbug antennes. Zoals getoond in figuur 2A, bedinsect antennes bezitten vier segmenten (SC, PE, F1 en F2). Het merendeel van de olfactorische sensilla worden op het achterste uiteinde van de 2 flagellum (F2), maar de verdeling is duidelijk verschillend voor elk: D sensilla, namelijk Dα, Dβ en Dγ worden alleen langs de binnenzijde van het antennes (figuur 2C), terwijl de C en E (E1 en E2) sensilla bevinden zich aan beide zijden van de antennes (Figuur 2B). Daarom, zodat we de neurale respons van de D sensilla opnemen zorgvuldige positionering van de antenne noodzakelijk.

Aangezien beide seksuele vormen van bed bug delen dezelfde patroon typen sensilla en de binnenzijde van de antennes zijn alle mogelijke sensilla, gericht op dit gebied maakt het gemakkelijker om de chemische reacties van de verschillende soorten sensilla afzonderlijk op de antenne opnemene (Figuur 3A). In single sensillum opname, sensilla verschillende olfactorische vertonen neurale signalen apart verschillende actiepotentiaal soorten en amplitudes (Figuur 3B). Zo zijn E sensilla bekend één of twee neuronen binnen, terwijl type D sensilla huis meer neuronen dan ofwel E- of C sensilla produceren ingewikkelder actiepotentialen dan de andere tot gevolg. De amplitudes van de neurale antwoorden van C sensilla zijn veel kleiner dan die van de andere sensillum types.

Nadat de elektrodeaansluitingen zijn ingesteld, kan het neurale antwoorden van elk type sensillum elke stimulus geregistreerd op basis van hun identiteit en intensiteit. Voor sommige stimuli om welk bed bugs zijn uiterst gevoelig, kan de neurale reactie zijn erg sterk en de laatste paar seconden na de beëindiging van de stimulatie. Bijvoorbeeld, als reactie op 10% (+) - β-pineen, bedinsecten toondeeen sterke reactie met een grote afvuursnelheid (≥200 spikes / sec) en super-aanhoudende temporele dynamiek vergeleken met de controle met oplosmiddel alleen als stimulus (figuur 4A en B). Verschillende stimuli totaal verschillend neurale respons van dezelfde sensillum en verschillende concentraties van dezelfde stimulus wekken waarschijnlijk heel anders vuurfrequenties genereren. Zoals getoond in figuur 5, waardoor de concentratie van eucalyptol verhoogde de vuurfrequenties van 30 aren / sec bij 0,001% tot 240 spikes / s bij 10% op een dosis-afhankelijke wijze.

Figuur 1
Figuur 1. Een schematische weergave van de procedure voor fixatie bed bugs. Het bed is gestabiliseerd bug op het dekglaasje met de op de band vaste antennes. De samengestelde monster wordt vervolgens op een magnetische fase. De oriëntatie en de hoogte van het monster ceen aangepast worden aan een geschikte hoek tussen het bed bug antennes en de registratie-elektrode. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.

Figuur 2
Figuur 2. Verdeling van olfactorische sensilla op het bed bug antennes. (A) Een elektrode Scanning Microscope (SEM) afbeelding van een bed bug antenne. De antenne heeft vier segmenten, de Sculpus (SC), Pedecel (PE), de eerste flagellum (F1) en het tweede flagellum (F2). De meeste olfactorische sensilla zich op F2, hoewel enkele olfactorische sensilla zijn ook gevonden op F1, die wordt gedacht gerelateerd te zijn aan de functie van aggregatieferomoon detectie voor het bed bug 16. (B) een SEM beeld van de buitenzijde van F2, waarvan de C en E olfac huizentory sensilla. Een SEM-beeld van de binnenkant van F2, die werd gevonden om alle verschillende soorten olfactorische sensilla huisvesten (C): D (Dα, Dβ, Dγ), C en E. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken .

Figuur 3
Figuur 3. Typische neurale signalen van verschillende soorten olfactorische sensilla op bed bug antennes. (A) Hoge resolutie SEM foto's van elk type olfactorische sensillum op het bed bug antennes. (B) Typisch neurale signalen van de verschillende olfactorische sensilla voor de blootstelling aan een stimulus. Dα, Dβ, Dγ en C sensilla, die meerdere olfactorische sensorische neuronen huisvesten (OSNs), een tentoonstellingsruimte ingewikkelder actiepotentialen dan E1 en E2 sensilla, die contain slechts één of twee OSNs. De amplitudes van de actiepotentialen van C sensilla zijn veel kleiner dan die in andere sensillum types. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.

Figuur 4
Figuur 4. Representatieve neurale respons op stimuli die bed bugs gevoelig zijn. (A) signaal traceren met de typische neurale respons van een olfactorische sensillum (Dγ) aan het oplosmiddel dat wordt gebruikt als de controle in de interne sensillum opname. Het signaal sporen zijn ingesteld op 1 sec beginnen voordat de 0.5 sec bladerdeeg van de stimulus. Het signaal sporen blijven opnemen gedurende 10 seconden na het begin van de stimulus bladerdeeg. (B) Signal sporen met de extreem sterke neurale respons van een olfactorischesensillum (Dγ) een botanische stimulus, 10% (+) - β-pineen. Na het bladerdeeg van (+) - β-pineen wordt geleverd aan de Dγ sensillen worden OSNs gehuisvest in dit sensillum gestookt met een hoge frequentie en een langdurige temporele dynamiek. De witte balk boven het signaal trace geeft de 1 sec interval vóór de blootstelling stimulus, de rode balk boven het spoor komt overeen met de levering van de stimulus bladerdeeg op de olfactorische sensillum, en de zwarte balk boven het spoor geeft het signaal opgenomen na de beëindiging van stimulus bladerdeeg. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.

Figuur 5
Figuur 5. Representatieve dosis-afhankelijke respons van OSNs de stimuli. Met andere botanische stimulus, eucalyptol als EXAmple de Dγ sensilla vertoonde een dosisafhankelijke respons op verschillende concentraties eucalyptol. Aangezien de concentraties steeg van 0,001% tot 10%, het afvuren frequenties gestegen van 30 spikes / sec tot 240 spikes / sec. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

De interne sensillum opnametechniek is uitgebreid gebruikt bij het testen van de neurale respons van insecten zoals fruitvliegen, muggen en bed bugs verschillende chemische stimuli in de omgeving. Deze chemische stimuli worden vaak opgelost en verdund in een gewoon oplosmiddel om verschillende doseringen van de behandelingen te bereiden. Echter, verschillende oplosmiddelen heel verschillende afgiftesnelheden van de stimuli produceren. Eerdere studies op sommige uitgebreid bestudeerd insecten zoals Drosophila melanogaster, Anopheles gambiae, Culex quinquefasciatus en Aedes aegypti hebben meestal gebruikt paraffineolie als oplosmiddel om de stimuli te lossen, aangezien deze insecten zijn relatief ongevoelig voor olie 17-20 paraffine. Paraffineolie is ook gebruikt in eerdere studies enkele sensillum opnemen van huismijten, om dezelfde reden 14. Echter de meest gebruikte oplosmiddel niet het beste voor elke insectensoorten. In de case bedwantsen zowel paraffineolie en DMSO, waaraan bed bugs vertonen ook ongevoeligheid, zijn gebruikt om de stimuli in verschillende studies 14,15 lossen, maar dezelfde doses van stimuli verdund in DMSO lijken sterker neurale respons op te wekken de sensilla van bedwantsen. Bijvoorbeeld, DMSO opgeloste R - (+) - limoneen en S - (-) - limoneen gegenereerde neurale respons van ≥70 spikes / sec vanaf Dγ sensilla op bed bug antennes, terwijl de paraffine-olie opgelost limoneen opgewekt neurale respons van slechts ≤25 spikes / sec uit Dγ sensilla. Deze daling van de neurale respons is heel gebruikelijk in stimuli die zijn verdund met paraffineolie, waarschijnlijk door de tragere afgiftesnelheid paraffineolie vergeleken met DMSO. Deze langzamere vrijgavesnelheid reduceert de hoeveelheid stimulus afgegeven op het oppervlak van de sensillum en kunnen resulteren in een misleidende conclusie met betrekking tot de gevoeligheid van bepaalde insecten feromonen.

Twee kritische steps voor het uitvoeren van de enkelvoudige sensillum opname zijn: 1) monstervoorbereiding en 2) het signaal opnemen. Voor de monstervoorbereiding, aangezien huismijten zeer sterke benen en actief verplaatsen antennes, is het zeer belangrijk om alle benen en plakken de antennes stevig op de dubbelzijdige tape. In het signaalopname proces, soms is positioneel onmogelijk de elektrode punt in de sensillum as. Als dit het geval is, kan de elektrode het achterste uiteinde van de sensillen, die altijd geeft een zeer schoon en helder signaal met zeer weinig ruis doorboren.

Omdat er meerdere neuronen gehuisvest in de D en C sensilla soort, is het vaak moeilijk om onderscheid te maken tussen individuele neuronen basis van de amplitudes en vormen van de actiepotentialen geproduceerd tijdens SSR. Het is echter nog steeds mogelijk om verschillen in responsen bed bug bij verschillende stimuli op basis van de gecombineerde spuitfrequentie alle neuronen in dezelfde s bekijkenensillum. Theoretisch bed bugs gevoelig voor bepaalde stimuli sterke stimulatie terwijl ongevoelig voor andere stimuli met zwakke stimulatie in dezelfde dosis. Verdere studies integreren gedrag tests en informatie over hun neurale reactie op deze prikkels zou dus zinvolle informatie over ecologisch verwante semiochemicaliën voor bedwantsen.

In deze studie hebben we ook de SSR techniek om de neurale respons van olfactorische sensilla testen om verschillende doses van stimuli. We zagen een dosis-afhankelijke patroon in neurale reacties van de bed bug om verschillende chemische stoffen. Echter, gezien de complexe omgeving bed bugs leven, zal de feitelijke dosis vluchtige stoffen aangetroffen door bed bugs in hun normale omgeving erg laag. Dientengevolge, de semiochemicaliën die sterke neurale respons bij lage doses tot aan 01:10 5 v / v en 4 01:10 v / v vaker biologisch betekenis bedwantsen dan andere chemicaliën t te wekkenhat functioneert alleen bij hoge doses. Daarom, die semiochemicaliën die werken bij lage doses waarschijnlijk een belangrijke rol spelen in de chemoreceptie van bedwantsen, die hen helpt om een ​​gastheer te vinden of te vermijden ongunstige factoren, en zal dus een nuttige leidraad bij het screenen op veelbelovende bed bug lokstoffen of insectenwerende middelen voor gebruik in zowel het laboratorium en in het veld testen.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Tungsten wire A-M SYSTEMS #716500 Used for preparing the electrode
KNO2 Sigma #310484 Used for sharpening the tungsten wire
AC Power Supply BK Precision 1653A Providing the voltage in sharpening the tungsten wire
Leica Z6 APO Microscope Leica 10447424 Used for observing the sensilla on antennae
Simulus controller Syntech CS-55 Used for controlling the stimulus application
4-Channel USB Acquisition Controller Syntech IDAC-4 Real-time on screen display of all signals before and during recording
Light Source SCHOTT A20500 Providing light sources for observation
Micromanupulator Leica 115378 Used for minor movement of electrode
Speaker Juster 95a Connected with Acquisition Controller IDAC-4 and providing sound for the signal
Magnetic stand Narishige GJ-1 Used to hold the reference electrode, stablized bed bug and stimulus delivery tube
TMC Vibration Isolation Table TMC 63-500 Used for isolating the vibration from the equipments
Coverslip Tedpella 2225-1 Used for holding the bed bug
Double-sided Tape 3M XT6110 Used for stablizing the bed bug on the coverclip
Dental Wax Dentakit DK-R012 Used for supporting the coverclip where bed bug is stablized 

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Bartonicka, T., Gaisler, J. Seasonal dynamics in the numbers of parasitic bugs (Heteroptera, Cimicidae): a possible cause of roost switching in bats (Chiroptera, Vespertilionidae). Parasitol Res. 100, (6), 1323-1330 (2007).
  2. Thomas, I., Kihiczak, G. G., Schwartz, R. A. Bed bug bites: a review. Int J Dermatol. 43, (6), 430-433 (2004).
  3. Anderson, A. L., Leffler, K. Bed bug infestations in the news: a picture of an emerging public health problem in the United States. J Environ Health. 70, (9), 24-27 (2008).
  4. Boase, C. Bed bugs (Hemiptera: Cimicidae): an evidence-based analysis of the current situation. Sixth international conference on urban pests. OOK-Press Kft. Robinnson, W., Bajomi, D. Budapest, Hungary, (2008).
  5. Doggett, S. L., Geary, M. J., Russell, R. C. The Resurgence of bed bugs in Australia: with notes on their ecology and control. Environ Health. 4, (2), 30-38 (2004).
  6. Ter Poorten, M. C., Prose, N. S. The return of the common bedbug. Pediatr Dermatol. 22, (3), 183-187 (2005).
  7. Yoon, K. S., Kwon, D. H., Strycharz, J. P., Craig, S., Lee, S. H., Clark, J. M. Biochemical and molecular analysis of deltamethrin resistance in the common bed bug (Hemiptera: Cimicidae). J Med Entomol. 45, (6), 1092-1101 (2008).
  8. Wang, L., Xu, Y., Zeng, L. Resurgence of bed bugs (Hemiptera: Cimicidae) in mainland China. Fla Entomol. 96, (1), 131-136 (2013).
  9. Haynes, K. F., Potter, M. F. Recent progress in bed bug management. Advanced technologies for managing insect pests. Ishaaya, I., Palli, S. R., Horowitz, A. R. Springer. New York. 269-278 (2013).
  10. Carey, A. F., Carlson, J. R. Insect olfaction from model systems to disease control. Proc Natl Acad Sci. 108, (32), 12987-12995 (2011).
  11. Leal, W. S. Odorant reception in insects: roles of receptors, binding proteins, and degrading enzymes. Annu Rev Entomol. 58, 373-391 (2013).
  12. Den Otter, C. J., Behan, M., Maes, F. W. Single cell response in female Pieris brassicae. (Lepidoptera: Pieridae) to plant volatiles and conspecific egg odours. J Insect Physiol. 26, (7), 465-472 (1980).
  13. Levinson, H. Z., Levinson, A. R., Muller, B., Steinbrecht, R. A. Structural of sensilla, olfactory perception, and behavior of the bed bug, Cimex lectularius., in response to its alarm pheromone. J Insect Physiol. 20, (7), 1231-1248 (1974).
  14. Harraca, V., Ignell, R., Löfstedt, C., Ryne, C. Characterization of the antennal olfactory system of the bed bug (Cimex lectularius). Chem Senses. 35, (3), 195-204 (2010).
  15. Liu, F., Haynes, K. F., Appel, A. G., Liu, N. Antennal olfactory sensilla responses to insect chemical repellents in the common bed bug, Cimex lectularius. J Chem Ecol. 40, (6), 522-533 (2014).
  16. Olson, J. F., Moon, R. D., Kells, S. A., Mesce, K. A. Morphology, ultrastructure and functional role of antennal sensilla in off-host aggregation by the bed bug, Cimex lectularius. Arthropod Struct Dev. 43, (2), 117-122 (2014).
  17. Bruyne, M., Foster, K., Carlson, J. R. Odor coding in the Drosophila antenna. Neuron. 30, (2), 537-552 (2001).
  18. Qiu, Y. T., Loon, J. J. A., Takken, W., Meijerink, J., Smid, H. M. Olfactory coding in antennal neurons of the malaria mosquito, Anopheles gambiae. Chem Senses. 31, (9), 845-863 (2006).
  19. Ghaninia, M., Ignell, R., Hansson, B. S. Functional classification and central nervous projections of olfactory receptor neurons housed in antennal trichoid sensilla of female yellow fever mosquito, Aedes aegypti. Eur J Neurosci. 26, (6), 1611-1623 (2007).
  20. Hill, S. R., Hanson, B. S., Ignell, R. Characterization of antennal trichoid sensilla from female southern house mosquito, Culex quinquefasciatus Say. Chem Senses. 34, (3), 231-252 (2009).

Comments

0 Comments


    Post a Question / Comment / Request

    You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

    Usage Statistics