연속 IV 주입은 뇌졸중 유발 뇌 부종을 연구하는 마우스에 아르기닌 - 바소프레신​​ 수용체 차단 코니 밥탄의 선택 처리 경로입니다

Medicine

Your institution must subscribe to JoVE's Medicine section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

Welcome!

Enter your email below to get your free 10 minute trial to JoVE!





We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.

If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.

 

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Zeynalov, E., Jones, S. M., Elliott, J. P. Continuous IV Infusion is the Choice Treatment Route for Arginine-vasopressin Receptor Blocker Conivaptan in Mice to Study Stroke-evoked Brain Edema. J. Vis. Exp. (115), e54170, doi:10.3791/54170 (2016).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

스트로크는 세계에서 이환율과 사망률의 주요 원인 중 하나입니다. 뇌졸중은 뇌의 부종 및 기타 병태 생리 학적 사건에 의해 복잡하다. 스트로크 유발 뇌부종의 개발 및 전개에있어 가장 중요한 선수 중 호르몬 아르기닌 - 바소프레신​​과 수용체 졸론 및 V2이다. 최근 졸론 및 V2 수용체 차단제 코니 밥탄 뇌졸중 후 뇌 부종을 감소시키는 잠재적 인 약물로서 주목 받고있다. 그러나 행정 연구 코니 밥탄 응용 프로그램을 포함하는 동물 모델은 관리 가능한 노선에 따라 수정 될 필요가있다. 여기에 48 시간 연속 정맥 주사 (IV)의 결과는 쥐 실험 뇌졸중 후 복강 내 (IP) 코니 밥탄 치료와 비교된다. 우리는 중간 대뇌 동맥 폐색이 코니 밥탄 (0.2 mg)의 IV 또는 비히클의 치료 경정맥에 카테터를 설치하여 결합시킨 프로토콜을 개발했다. 동물의 다른 동료는 0.2로 처리 하였다매일 코니 밥탄 또는 차량 IP mg의 덩어리. 실험 스트로크 유발 뇌부종 연속 IV 및 IP 치료 후 마우스에서 평가 하였다. 결과의 비교 코니 밥탄의 연속 IV 정부는 코니 밥탄의 IP 관리는 달리, 마우스의 후 허혈성 뇌 부종을 완화 것으로 나타났습니다. 우리의 모델은 뇌졸중 및 뇌 부종의 컨텍스트에서 애플리케이션 코니 밥탄의 앞으로의 연구에 사용될 수 있다는 결론.

Protocol

실험 연구의 관심과 동물의 사용을위한 국립 보건원 (National Institutes of Health)의 지침에 따라 수행되었으며 스웨덴 의료 센터 동물 관리 및 사용위원회에 의해 승인되었습니다. 모든 절차는 적절한 무균 기술을 사용하여 수행 하였다. 연구에 활용 실험 동물은 25 ~ 27g에 체중와 야생형 C57 마우스, 3 개월, 남성이었다.

생체 스트로크 유도 1.

  1. 프리 코트 전에 수술에 치과 수지와 필라멘트.
    1. 7-0 나일론 봉합사에서 필라멘트의 12mm 긴 조각을 잘라. 경화제 1 부분과 수지의 2 부를 혼합 한 후 즉시 1/3 전체 길이를 덮도록 혼합물에 필라멘트의 팁을 담근다. 신속하게 제거하고이 치과 수지의 부드러운 표면 코팅으로 덮여 있는지 확인합니다.
    2. 공기는 사용하기 전에 2 시간 동안 필라멘트를 건조.
  2. 에 마우스를 놓고N 마취 유도 챔버 (2 L 부피), 및 2 L / 분으로 챔버에 들어가는 25 %의 산소가 풍부한 실내 공기 중의 1.5 % 이소 플루 란의 흐름을 설정한다.
  3. 꼬리 핀치에 대한 응답의 부족에 의해 결정 완전히 팔을 마취 할 때까지 마우스가 유도 챔버에 남아있을 수 있습니다.
  4. 가열 패드 수술대 위에 마우스를 놓고 코 콘을 통해 자발적으로 전달 마취의 유지 보수를 위해 1 %의 이소 플루 란 농도를 설정합니다.
  5. 전면과 목 뒤쪽에 머리를 클립하고, 소독 용 알코올로 목 스프레이. 두 눈에 수의학 안과 연고를 적용합니다.
  6. 연속적으로 체온을 모니터링하기 위해 수술 중 디지털 디스플레이에 접속 된 직장 온도 프로브를 사용한다.
  7. , 누운 위치에 마우스를 놓고 소독 용 포비돈 - 요오드 10 % 스크럽 솔루션을 적용, 멸균 드레이프로 커버 한 다음 크기 (10) 수술 메스 블레이드와 목을 따라 중간 선 절개를합니다.
  8. <리> 임시 6.0 실크 봉합사와 왼쪽 경동맥 (CCA)을 결찰.
  9. 왼쪽 외부 경동맥 (ECA)의 다른 넥타이를 놓습니다.
  10. 내부 경동맥 (ICA)의 미세 혈관 클립을 배치합니다.
  11. 미세 혈관 가위로 외부 경동맥에 작은 구멍을 잘라. 클립을 제거하는 동안 저항합니다 (CCA의 분기 지점에서 약 5-7mm)를 느낄 때까지의 ECA의 구멍에 치과 수지로 코팅 7-0 나일론 봉합사로 만든 필라멘트를 삽입하고 cephalically를 진행합니다.
  12. 위치에 필라멘트를 확보하기 위해 내부 경동맥 상에 임시 넥타이를 놓습니다. 그림, 그림 (1A)를 참조하십시오. 실크 봉합사로 피부를 닫고, 단계 260에서와 같이, 0.5 % 부피 바카 0.2 ml의 목의 전면에 상처 침투.
  13. 마우스가 60 분 동안 복구 실에서 의식을 마취에서 각성과 회복 할 수 있습니다. 이 회복 될 때까지 무인 동물을 두지 마십시오충분한 의식은 흉골 드러 누움을 유지합니다.
  14. = 나머지 3에서 반대쪽하지만 정상적인 자세로 선회 0 = 정상 운동 기능, 몸통과 꼬리 리프트에 반대측 앞다리 1 = 굴곡, 2 반대측에 기대어 = 다음과 같이 신경 학적 결손 점수 (NDS)에 마우스를 테스트 나머지 4의 측면 = 더 자연 모터 활동. 4,9
    1. NDS를 테스트를 위해, 관찰 (2-3 분)에 대한 평평한 표면에 꼬리 곳으로 마우스를 올립니다. 대안 적으로, 상기 회수 실의 마우스를 관찰. 때문에 MCA의 부족 폐색에 낮은 실험 2보다 NDS을 전시 마우스를 제외합니다.
      참고 : 레이저 도플러 flowmetry 기술은 MCA 폐색을 확인하는 데 사용할 수 있습니다 9-11.
  15. 다시 마취 전술 한 바와 같이, 유도 챔버 회복 60 분 후 동물을 10 % 포비돈 - 요오드 용액 스크럽 이전 피부 절개 재 소독 및 상처 수술의 재개절단 및 실크 봉합사를 제거하여 목의 앞.
  16. ECA에서 필라멘트를 제거하려면 다음 단계를 수행합니다 :
    1. ICA에의 미세 혈관 클립을 배치합니다. ICA에의 봉합을 풀어 오픈 클립을 누른 상태에서 필라멘트를 잡아 당깁니다.
    2. 클립을 닫고 절단에 근위 ECA 상에 넥타이를 놓습니다.
    3. 클립을 제거하고 뇌 혈류를 복원 할 CCA에서 합자를 제거합니다. 그림, 그림 1B를 참조하십시오.

연속 48 시간의 처리를위한 경정맥에 IV 카테터의 2. 설치

참고 : 바로 마우스의 각성없이 단계 1.16.3 후 카테터의 설치를 진행합니다.

  1. 유연한 튜브의 두 개의 서로 다른 크기를 사용하여 내부 튜브 삽입 (, 내부 튜브의 보호를 위해 외부 직경 3.18 mm)를 외부 배관에 (외경 0.94 mm를 약물을 포함하도록 주입되는).
  2. 피는 경향이 위치에 마우스를 레이스 소독 용 10 % 포비돈 - 요오드 스크럽 솔루션을 적용하고, 크기 (10) 수술 메스 블레이드와 목의 뒷면에 1cm 절개를합니다. , 앙와위로 마우스를 켜고 10 % 포비돈 - 요오드 스크럽 솔루션과 목의 전면을 다시 살균, 목의 전면에 수술 상처를 다시 엽니 다. 터널 목의 전면에 뒷면에 만든 절개의 피부 아래 튜브, 오픈 상처 1cm에서 그것을 외면 화하다.
  3. 정중선 약 1cm 횡 목의 앞쪽의 좌측에서 피하 지방 조직을 제거한다. 좌측 경정맥을 찾습니다 5mm 간격 정맥을 따라이 관계를 배치하고 약간 정맥을 스트레칭. 미세 혈관 가위로 두 관계 사이의 경정맥에 작은 구멍을; (마음으로) 내부 튜브 5mm 깊이 꼬리 쪽의 끝을 삽입합니다.
  4. 경정맥에 모두 관계로 튜브를 고정합니다. 목의 전면에 피부를 닫습니다3-0 실크 봉합사. 그림, 그림 1C를 참조하십시오.
  5. 봉합와 목에의 뒷면에 피부에 튜브를 고정하고 회전을 통해 microinfusion의 IV 펌프에 튜브를 연결합니다. 스위블은 음식과 물에 대한 전체 액세스와 케이지 내부 마우스의 자유로운 이동을 허용한다.
  6. 전면에 피부 절개 수술 후 통증을 방지하기 위해 0.5 % 부피 바카 0.2 mL를 목뒤 침투.
    주 : 특정 기관, 동물 프로토콜에 따라 동물 오피오이드, 소염 진통제, 항생제 전후 동작 적으로 처리 될 수있다. 그러나, 언급 치료는 허혈성 뇌졸중의 결과의 결과를 변경할 수 있습니다 (토론 섹션 참조). 11 ~ 14
  7. 동물 실험의 종점까지 별도의 장에 동물을 회수 챔버에서 각성하고 수용하도록 허용한다. 이 흉골 유지하기 위해 충분한 의식을 회복 할 때까지 무인 동물을 두지 마십시오드러 누움.
  8. 1.5 ㎖ / ㎏ / 시간, 4에서 연속 48 시간의 IV의 코니 밥탄의 치료 (5 % 포도당에서 0.14 ㎎ / ㎖) 또는 차량의 주입 속도를 설정하고 주입을 시작합니다.
    참고 : IV 주입 코니 밥탄의 총량​​은 1.44 ML의 총 부피의 약 0.2 밀리그램 / 마우스 / 일해야한다.
    주 : 1.44 ml의 5 % 포도당 0.2 mg의 총 양을 하루에 두 번 코니 밥탄의 복강 (IP) 주입을 수행합니다. IP 주입 앞서 설명한 구현한다. (15)는 몸체와 꼬리의 후방 표면의 피부를 파지하여 마우스 제지. 26 G / / 2 인치의 바늘을 사용하여 복부의 좌하 사분면에 코니 밥탄 또는 비히클을 주입한다. 15
  9. 실험 (48 시간)의 전체 지속 기간 동안 하루에 두 번 동물을 관찰한다. 동물들이 음식과 물에 대한 전체 액세스 권한을 허용합니다. 동물이 고통 또는 호흡 곤란의 증상이 나타나는 경우 수의사에게 문의하십시오. 안락사는 심각한 DIST에서 동물을 위해 필요한 경우RESS 아래의 단계 3.1를 참조하고, 연구에서 동물을 제외 할 수 있습니다.

엔드 포인트에서 뇌졸중 유발 뇌 부종 3. 평가

  1. 5 % 이소 플루 란과 오버 마취하여 마우스를 희생.
  2. 정중선을 따라 두개골 뼈 위에 피부 절개를하게 메스를 사용하여 뇌 위에 전체 두개골을 노출시키기 위해 피부를 철회. 난원 매그넘에서 시작, 측면 양쪽에있는 뇌의 둘레를 따라 두개골 뼈를 절단하고, 그 아래 뇌를 건드리지 않고 조심스럽게 들어 올립니다. 척추의 뇌와 두개골의베이스 상에 장착 된 신경 단절.
  3. 뇌를 제거 후각 망울과 소뇌에서 분리하고, 전술 한 바와 같이, 허혈성 및 비 허혈성 대뇌 반구에 반구 균열을 따라 뇌를 해부하다. (9)
  4. 습윤 건조 비교 비율 (WDR) -4,9- 이미 설명한 바와 같이하여 뇌 부종을 평가. 조직 무게전 오븐에서 100 ℃에서 3 일간 건조시킨 후. %의 H 2 O = 뇌의 수분 함량 (BWC) 계산 (1 건조 중량. / 습식 중량은.) × 100 %.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

동물의 체온은 생리 학적 범위 내이고 스트로크 유도 수술을 통해 안정적. MCAO이 연구에서 제외 된 직후 2보다 낮은 NDS를 나타내 두 쥐.

쥐에서 MCAO은 48 시간에서 동측 반구에서 경색 볼륨을 생성합니다. TTC에 묻은 조각의 평가는 뇌 허혈성 뇌졸중의 발병이 심한 원인이 2009 년 10 Zeynalov, E. 및 도레, S., 공표 한 반구의 약 50 %, MCAO (그림 1D) 후 경색에 의해 영향을받는 것을 알 수 산소와 영양분이 뇌 조직의 박탈. 이 로컬 뇌 조직 저산소증의 결과로서, 뉴런 및 신경교 세포는 뇌의 경색 부분을 형성하는 다이.도 1d는 MCAO 유도 경색에 의해 영향을 대표 마우스 뇌 조각을 나타내고, 상처의 크기의 추정을 제공한다.

48 시간 60 분 후 MCAO 유도에서 뇌 수분 함량 (BWC)의 평가 코니 밥탄 투여 IV (0.2 밀리그램 / 일)은 크게 두 동측 및 반대측 반구의 뇌 부종, (그림 2A)을 줄일 것으로 나타났습니다. 반면, 0.2 mg을 러스에 의해 코니 밥탄의 IP-치료는 매일 뇌졸중 유발 뇌 부종 (그림 2B)에 비슷한 긍정적 인 효과를 못했습니다.

혈장 및 뇨 삼투압 코니 밥탄의 효과 확인 실험의 종료 시점에 모든 실험 동물에서 달성되었다. 코니 밥탄은 IV 치료 또는 다음과 같이 IP는 플라즈마를 증가하고 모든 쥐에서 소변 삼투압 감소 4 혈장 삼투압 값을 마우스에있었습니다. 313 ± 4.4 mOsm / kg (차량, IV) 대 355 ± 7.5 * mOsm / kg (코니 밥탄, IV) 이전에 발표 된, 4, 340 ± 7.7 mOsm / kg (차량, IP) 대383 ± 8.8 * mOsm / kg (코니 밥탄, IP). 다음과 같이 마우스에서 소변 삼투압 값이 같다 : 1210.6 ± 13.4 mOsm / kg (차량, IV) 대 595.0 ± 57.4 * mOsm / kg (코니 밥탄, IV), 이전에 발표 된, 4, 1535.0 ± 80.9 mOsm / kg (차량, IP) 대 242.0 ± 23.2 * mOsm / kg (코니 밥탄, IP). 로 제시 모든 데이터는 제어 대응하는 대 * P ≤0.05 ± SEM을 의미한다.

그림 1
그림 1. 필라멘트의 스트로크 위치 후 48 시간에 실험 뇌졸중 모델 IV 카테터 설치 대표적인 경색 량의 다이어그램이 좌측 경동맥에 수지 (녹색)과 (ICA)를 사전 - 코팅 (청색 도시) 교합 (A) 및 재관류 시간 (B) 동안. 좌측 경정맥 (C)의가요 성 호스 팁의 정확한 위치. Experimenta마우스 리터 스트로크는 48 시간에서 동측 반구에서 경색 볼륨을 생성합니다. 생쥐 MCAO 후 48 시간에 희생시키고, 프로토콜에 기재된 바와 같이 뇌를 제거 하였다 (단계 3.1 내지 3.3). 뇌를 2 mm 두께의 부분으로 절단하고, TTC (D)으로 염색 하였다. 그림 1D는 Zeynalov, E. 및 도레, S., 2009 년까지 원래의 문서에서 수정 된 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.

그림 2
그림 2 :. 연속 정맥 주사 (IV) 및 복강 내 (IP) 코니 밥탄 (0.2 밀리그램 / 일) 뇌졸중 유발 뇌 부종에 대한 치료 코니 밥탄 IV 치료 48 시간 동안 투여의 효과. 코니 밥탄 처리는 IV는 동측과 반대측 H 포스트 허혈성 뇌 부종 감소 투여emisphere (A). 도 2a에 의해 Zeynalov 외. 원본 문서에서 수정 된, 48 시간 동안 2015 4 코니 밥탄 IP 처리는 각 그룹 (10)을 실험적 뇌졸중에 의한 뇌 부종을 감소하는데 실패 N =. (단계 1.1.1-1.15.3) 위의 프로토콜에 설명 된대로 마우스는 재관류와 MCAO을 시행 하였다. 그리고 코니 밥탄 (0.2 mg)을 IP 주사 22 시간 재관류 46 시간에서 즉시 투여 하였다. 마우스를 희생시켰다; 프로토콜에 기재된 바와 같이 뇌를 오븐에서 제거하고, 건조시키고 (3.1-3.4 단계). (B) 모든 데이터는 SEM ± 평균으로 제시, * P <0.05 해당 컨트롤 대. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

이 연구는 임상 뇌졸중 연구에 중요한 가치가있다. 이 연구는 쥐 실험 뇌졸중 후 코니 밥탄 (0.2 밀리그램 / 일)의 연속 IV 주입을 효율적으로 처리 48 시간 후 뇌부종을 감소 시킨다는 것을 알 수있다. 뇌부종에 코니 밥탄의 동일한 용량의 IP 주입의 효과도 조사 하였다. 모두 IV 및 IP 경로로 코니 밥탄 치료로 나타낸 바와 같이 마우스에 aquaresis을 생성합니다 약간 생리 학적 수준 위의 혈장 삼투압 1) 증가; 2)으로 인해 신장에서 물의 재 흡수의 차단에 소변 삼투압 감소. 따라서, 처리 결과에 기초하여, 우리는 IV 배송 방법은 뇌졸중 유발 부종 형성에 중요한 추가적인 유익한 효과가 있다고보고한다.

우리의 주요 결과는 IV 치료 코니 밥탄의 IP 경로보다 뇌 부종 완화에 더 나은 효과를 생산한다는 것이다. 임상 적으로 사용이 COR하는 코니 밥탄은 가능한 선택지 졸론 및 V2 수용체 길항제 인RECT 저 나트륨 혈증, 혈액 볼륨과 삼투압은. (16) 코니 밥탄은 다양한 조건을 가진 환자에서 저 나트륨 혈증을 교정하는 것으로 나타났다. 코니 밥탄의 17 임상 적 유용성은 뇌 부종의 맥락에서 탐사 빠른 벤치 투 베드 사이드 번역 될 수 있음을 시사한다. intracerebroventricularly 전달 실험 선택적 졸론 차단제의 사용은 그러나. 다른 연구자들에 의해 설명 된 포스트 - 허혈성 뇌 부종 형성을 감소시킬 3,18 입증되지 않았다하지도 약물에 대한 이들 연구에서 사용 된 약물이나 처리 경로는 가능한 임상 적용을 제안 가까운 미래.

메커니즘되는 뇌허혈 및 AVP 원인 뇌부종은 복잡하다. 그러나, 몇 가지 중요한 분자 선수들이 BBB 인터페이스에서 혈관 벽에 지역화 된 나트륨과 염소의 공동 수송 19, 20 및 졸론 수용체이다. 코니 밥탄의 효과를 차단 V2는 exces의 배설을 담당코니 밥탄은 코니 밥탄의 가용성을 감소시킬 수있다 조직 장벽을 피하기 위해 순환에 직접 전달 될 ​​때 신장과 뇌 부종의 개발을 방지하는 데 도움이 될 수 있습니다 혈액의 삼투압, 상승. (21) 이러한 메커니즘으로의 물은 여전히 플레이 할 수있다. 그러나, 투여 량 및 치료 기간의 정당성 4. 이전에 발행 된 관측에 기초 하였다는 코니 밥탄 지역적 혈류 감소 손상 유발 후 뇌의 허혈성 사이트에 도달 여부를 판단 할 남아있다. 또한 뇌의 대뇌 동맥 졸론 수용체를 차단함으로써 이러한 수축의 방지와 같은 바람직한 로컬 효과를 생성하기에 충분한 양의 코니 밥탄을 수신할지 여부를 조사 할 필요가있다.

실험 프로토콜은 코니 밥탄의 처리 경로에 대한 선택의 문제를 해결하기 위해 설계되었습니다. 결과를 바탕으로,이 연구는 코니 밥탄 광고의 IV 경로에 대한 강한지지를 제공한다직무. 그러나 프로토콜의 가장 중요한 단계는 설립 생쥐에서 뇌졸중 후 치료 결과에 큰 차이를 감지하기 위해 미세 조정 할 필요가 있었다. 이러한 단계 중 다음과 같습니다 MCAO (60 분) 1) 기간; 2) 투여 량 (0.2 mg)을 주입 속도 (1.5 ㎖ / kg / 시간); 3) 처리 (48 시간)의 길이. MCAO 기간은 프로토콜 그것은 비가 역적 손상 때문에 뇌 조직에 매우 중요하다 허혈성 모욕의 정도를 결정합니다. 어려운 동물이 48 시간 동안 생존하는, 또는 동물의 뇌 부종에 대한 코니 밥탄 치료에 덜 반응이 될 수 있도록 할 부상이 너무 심한. 한편, MCAO의 지속 시간이 60 분 뇌부종을 생성하지 않을 따라서, 마우스에 허혈을 유도하기에 불충분하고있다. 투여 량 및 치료 기간은 코니 밥탄 사용을 위해 FDA 권고에 기초하여 선택 하였다. (16) 그러나,보고 된마우스는 뇌졸중 후 뇌의 부종을 감소시키기에 코니 밥탄에 대한 인간의 용량은 효율적이지이었다. 따라서, 투여 량 후 허혈성 뇌 부종에 대해 상당한 보호를 유발 쥐에 대해 10 배 증가 될 수 있었다. 4 정확한 주입 속도 선택의 중요성은 총 혈류량, 혈압 및 간질 유체 축적하는 경우에 영향을 미칠 수 있다는 요금은 크게 제안 된 속도를 초과합니다. 그러나, 총 혈액량과 혈압의 측정은 매우 유익 할 것이다.

MCAO 외과 유도은 침습적이고, 상기 프로토콜의 모든 단계에 정확한주의가 필요하고,이 기술에 대한 문제 해결을 아는 것이 중요하다. 실수로 인해 찢어 동맥 과도한 동맥 출혈 예기치 수술 합병증, 실험에 대한 성공 확률을 감소시키고 사망률을 증가시킨다. 그러나, 정맥 출혈 w 적용 빛 압력에 의해 중단 될 수 있습니다멸균 스폰지 번째.

이 프로토콜은 MCA 폐색이 오른쪽이나 왼쪽 MCA에 중 생성되는 것을 의미 뇌 허혈의 일방적 인 유도를 설명합니다. 그러나, 프로토콜 MCA 폐색 및 IV 카테터 설치 의사의 바람직한 측면에 따라 변경 될 수있다. 한 도면도는 MCAO 절차도 1AB는 IV 카테터 설치 프로토콜의 가장 중요한 부분의 도면을 도시하고,도 1C, 이전에 발표 한 실험 (48 시간)의 최종 지점에서 MCAO에 의한 뇌 경색의 대표적인 뇌 조각, 10 그림 1D. 도면 및 대표적인 뇌 조각은 MCAO는 뇌의 왼쪽에 유도 된 것을 의미하더라도 MCAO가 실내에 걸쳐 일관성만큼 뇌의 우측에 의한 경우, 우리는 결과의 극적인 차이를 예상하지타이어 연구는 유지된다.

수술 및 마취 후 회복 기간 동안, 동물 때문에 수술 후 통증과 심한 신경 학적 결손으로 고통을 발생할 수 있습니다. 많은 경우에, 수술 후 통증 관리는 단지 국소 마취제 등을 0.5 % bupivacaine을 사용하도록 제한 될 수있다. 인간의 뇌 혈관 사고뿐만 아니라 쥐 실험 뇌졸중으로 인한 뇌졸중은 염증, 뇌 경색, 뇌 부종 등의 병태 생리 학적 요인을 포함한다. 9 이러한 병태 생리 학적 이벤트가 같은 cyclooxygenases 같은 주요 분자 선수들이 참여하고있다 (COX) (13)와 G 단백질 관련 수용체. 그들은 이러한 설정에 사용 된 13 경우 COX를 포함하는 분자 경로 22 간섭이의 NSAID 약물에 의해 발생 될 수 있습니다. 오피오이드는 G 단백질 및 제 메신저 (12)에 연결되고, 스트로크 (11) 및 결과의 병태 생리 학적 결과를 변경할 수있는 그들의 수용체에 작용이 연구의의. 이러한 요소들은 수술 후 마우스에서 진통제의 사용을 제한 할 수 있습니다.

요약하면, 우리의 연구는 지금까지 도달 목표로 코니 밥탄을 용도 변경의 가능성을 탐구한다. 코니 밥탄 연속 IV 주입 한 다음 실험 뇌졸중 유도 우리의 동물 모델은 뇌졸중 환자에서의 잠재적 인 사용을 제안 일관된 결과를 생성하는 것으로 나타났다. 구체적으로, 우리는 보조 뇌 손상을 방지하는 뇌졸중 후 코니 밥탄 연속 IV 치료 모델 마우스에서의 전임상 연구를 위해 사용될 수 있다는 것을 증명하고있다. 이 연구는 임상에 빠른 번역 중환자 실 환자의 생명을 구할 수 있기 때문에 뇌졸중 후 쥐의 뇌 부종을 연구하는 추가 도구로 코니 밥탄 치료의 다른 응용 프로그램을 제공하도록 구성되었다.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

저자는 공개 아무것도 없어.

Acknowledgments

우리는 자금 및 시설을 제공 스웨덴어 의료 센터 감사합니다. 우리는 또한 실험실 공간의 관대 한 사용을 위해 크레이그 병원 감사합니다.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Heated Pad K&H Manufacturing Inc 1060
Temperature Monitor with Rectal Probe Physitemp 7029
Silk Suture Spool, 6-0 Surgical Specialties Corporation SP114
Silk Suture on a Needle, 3-0 Ethicon 1684G
Nylon Suture, 7-0 Ethicon 1696G
Dental Resin Polysiloxane with Hardener Heraeus Kulzer 65817930
Microinfusion IV Pump Kent Scietific GT0897
Swivel 22GA Instech 375/22PS
Laboratory Tubing, 0.94 mm x 0.51 mm Dow Corning 508-002
Laboratory Tubing, 3.18 mm x 1.98 mm Dow Corning 508-009

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Gueniau, C., Oberlander, C. The kappa opioid agonist niravoline decreases brain edema in the mouse middle cerebral artery occlusion model of stroke. J Pharmacol Exp Ther. 282, 1-6 (1997).
  2. Krafft, P. R., et al. Etiology of stroke and choice of models. Int J Stroke. 7, 398-406 (2012).
  3. Vakili, A., Kataoka, H., Plesnila, N. Role of arginine vasopressin V1 and V2 receptors for brain damage after transient focal cerebral ischemia. J Cereb Blood Flow Metab. 25, 1012-1019 (2005).
  4. Zeynalov, E., Jones, S. M., Seo, J. W., Snell, L. D., Elliott, J. P. Arginine-Vasopressin Receptor Blocker Conivaptan Reduces Brain Edema and Blood-Brain Barrier Disruption after Experimental Stroke in Mice. PloS one. 10, e0136121 (2015).
  5. Med Lett Drugs Ther.. Conivaptan (Vaprisol) for hyponatremia. The Medical letter on drugs and therapeutics. 48, 51-52 (2006).
  6. Zhao, X. Y., et al. Effect of arginine vasopressin on the cortex edema in the ischemic stroke of Mongolian gerbils. Neuropeptides. 51, 55-62 (2015).
  7. Manaenko, A., Chen, H., Kammer, J., Zhang, J. H., Tang, J. Comparison Evans Blue injection routes: Intravenous versus intraperitoneal, for measurement of blood-brain barrier in a mice hemorrhage model. J Neurosci Methods. 195, 206-210 (2011).
  8. Adams, S., Pacharinsak, C. Mouse anesthesia and analgesia. Curr Protoc Mouse Biol. 5, 51-63 (2015).
  9. Zeynalov, E., et al. The perivascular pool of aquaporin-4 mediates the effect of osmotherapy in postischemic cerebral edema. Crit Care Med. 36, 2634-2640 (2008).
  10. Zeynalov, E., Dore, S. Low doses of carbon monoxide protect against experimental focal brain ischemia. Neurotox Res. 15, 133-137 (2009).
  11. Zeynalov, E., Nemoto, M., Hurn, P. D., Koehler, R. C., Bhardwaj, A. Neuroprotective effect of selective kappa opioid receptor agonist is gender specific and linked to reduced neuronal nitric oxide. J Cereb Blood Flow Metab. 26, 414-420 (2006).
  12. Ma, M. C., Qian, H., Ghassemi, F., Zhao, P., Xia, Y. Oxygen-sensitive {delta}-opioid receptor-regulated survival and death signals: novel insights into neuronal preconditioning and protection. J Biol Chem. 280, 16208-16218 (2005).
  13. Ahmad, M., Zhang, Y., Liu, H., Rose, M. E., Graham, S. H. Prolonged opportunity for neuroprotection in experimental stroke with selective blockade of cyclooxygenase-2 activity. Brain Res. 1279, 168-173 (2009).
  14. Meisel, C., et al. Preventive antibacterial treatment improves the general medical and neurological outcome in a mouse model of stroke. Stroke. 35, 2-6 (2004).
  15. Miner, N. A., Koehler, J., Greenaway, L. Intraperitoneal injection of mice. Appl Microbiol. 17, 250-251 (1969).
  16. Adis International Limited. Conivaptan: YM 087. Drugs in R&D. 5, 94-97 (2004).
  17. Murphy, T., Dhar, R., Diringer, M. Conivaptan bolus dosing for the correction of hyponatremia in the neurointensive care unit. Neurocrit Care. 11, 14-19 (2009).
  18. Liu, X., Nakayama, S., Amiry-Moghaddam, M., Ottersen, O. P., Bhardwaj, A. Arginine-vasopressin V1 but not V2 receptor antagonism modulates infarct volume, brain water content, and aquaporin-4 expression following experimental stroke. Neurocrit Care. 12, 124-131 (2010).
  19. Wallace, B. K., Jelks, K. A., O'Donnell, M. E. Ischemia-induced stimulation of cerebral microvascular endothelial cell Na-K-Cl cotransport involves p38 and JNK MAP kinases. Am J Physiol Cell Physiol. 302, C505-C517 (2012).
  20. O'Donnell, M. E., et al. Intravenous HOE-642 reduces brain edema and Na uptake in the rat permanent middle cerebral artery occlusion model of stroke: evidence for participation of the blood-brain barrier Na/H exchanger. J Cereb Blood Flow Metab. 33, 225-234 (2013).
  21. Walcott, B. P., Kahle, K. T., Simard, J. M. Novel treatment targets for cerebral edema. Neurotherapeutics. 9, 65-72 (2012).
  22. Shen, Z., et al. Inhibition of G protein-coupled receptor 81 (GPR81) protects against ischemic brain injury. CNS Neurosci Ther. 21, 271-279 (2015).

Comments

0 Comments


    Post a Question / Comment / Request

    You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

    Usage Statistics