كبسولات المستندة إلى مصنع استخراج للتطبيقات الكبسلة

Bioengineering

Your institution must subscribe to JoVE's Bioengineering section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

 

Summary

يصف هذا البروتوكول / مخطوطة عملية مبسطة لإنتاج كبسولات exine sporopollenin (ثانية) من الجراثيم clavatum يكوبوديوم وللتحميل من المركبات المائية في هذه سكس.

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Potroz, M. G., Mundargi, R. C., Park, J. H., Tan, E. L., Cho, N. j. Extraction of Plant-based Capsules for Microencapsulation Applications. J. Vis. Exp. (117), e54768, doi:10.3791/54768 (2016).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

كبسولات المستمدة من الجراثيم ذات الأصل النباتي أو حبوب اللقاح وتوفر منصة قوية لمجموعة متنوعة من التطبيقات الكبسلة. ويتم الحصول على كبسولات Sporopollenin exine (ثانية) عند معالجة الجراثيم أو حبوب اللقاح وذلك لإزالة محتويات جبلة البوغ الداخلي. وكبسولات جوفاء الناتجة يحمل درجة عالية من التوحيد micromeritic وتحتفظ الميزات المجهرية معقدة تتعلق الأنواع النباتية معينة. هنا، علينا أن نظهر عملية مبسطة لإنتاج سكس من الجراثيم clavatum يكوبوديوم وللتحميل من المركبات المائية في هذه سكس. الإجراء العزلة المجلس الأعلى للتعليم الحالي وقد تم تحسين مؤخرا لخفض كبير في متطلبات المعالجة التي تستخدم تقليديا في المجلس الأعلى للتعليم العزلة، وضمان إنتاج كبسولات سليمة. L. الطبيعية ومنزوع الدهن جراثيم clavatum مع الأسيتون، وتعامل مع حمض الفوسفوريك، وعلى نطاق واسع غسلها لإزالة sporoplasmiمحتويات ج. بعد defatting الأسيتون، وقد تبين تجهيز خطوة واحدة باستخدام 85٪ حمض الفوسفوريك لإزالة كافة محتويات جبلة البوغ. عن طريق الحد من وقت المعالجة الحمضية إلى 30 ساعة، فمن الممكن لعزل سكس نظيفة وتجنب المجلس الأعلى للتعليم والتكسير، وهو ما ثبت تحدث مع وقت المعالجة لفترة طويلة. غسل واسعة مع الماء، وتمييع الأحماض، يخفف قواعد، والمذيبات يضمن أن جميع المواد الكيميائية والمخلفات جبلة البوغ تتم إزالة بشكل كاف. ويستخدم تقنية فراغ تحميل تحميل البروتين نموذج (الأبقار مصل الزلال) كمركب ماء تمثيلا. يوفر فراغ تحميل تقنية بسيطة لتحميل المركبات المختلفة دون الحاجة إلى المذيبات قاسية أو المواد الكيميائية غير المرغوب فيها والتي غالبا ما يطلب في بروتوكولات الكبسلة أخرى. وبناء على هذه العزلة وتحميل البروتوكولات، سكس توفير المواد الواعدة لاستخدامها في مجموعة متنوعة من التطبيقات الكبسلة، مثل العلاجات والأغذية ومستحضرات التجميل، وهمز العناية الشخصيةتصدير منتجاتها.

Introduction

هناك اهتمام كبير في كبسولات ذات الأصل النباتي الطبيعي التي تم الحصول عليها من جراثيم النبات وحبوب اللقاح للاستخدام في التطبيقات الكبسلة. 1-15 في الطبيعة، وجراثيم وغبار الطلع وتوفر الحماية للمواد الوراثية الحساسة من الظروف البيئية القاسية. الهيكل الأساسي للجراثيم النبات وحبوب اللقاح ويتكون عادة قذيفة الطبقة الخارجية (exine)، طبقة القشرة الداخلية (intine)، والمواد هيولي الداخلية. وتتألف exine من البوليمر الحيوي القوي كيميائيا 1،9،10،13،16 يشار إلى sporopollenin وتتألف من intine أساسا من المواد السليلوزية 16-18 كبسولات فارغة يمكن أن تكون معزولة عن مختلف العمليات 7،9 لإزالة المواد هيولية والبروتينات، وطبقة intine. 2،12،16 هذه الكبسولات exine sporopollenin (ثانية) توفر بديلا مقنعا لencapsulants الاصطناعية بسبب توزيعها حجم الضيق والشكل النظامي. 7،9،13،19،20 وتطوير عمليات موحدة للحصول سكس من الأنواع النباتية المختلفة، مثل يكوبوديوم clavatum، يفتح إمكانات لمجموعة واسعة من التطبيقات الكبسلة في مجالات تقديم الأدوية، والأغذية، ومستحضرات التجميل. 6،10-13،21

من أجل الحصول على سكس والباحثين علاجها أولا جراثيم وغبار الطلع مع المذيبات العضوية ورجع في المحاليل القلوية لإزالة محتويات هيولي 22-25 ومع ذلك، فإن هيكل كبسولة المتبقية عازمة على لا تزال تحتوي على طبقة intine السليلوزية. من أجل إزالة هذا، بحث الباحثون استخدام لفترات طويلة تجهيز المائي الحمضية باستخدام حمض الهيدروكلوريك وحمض الكبريتيك الساخن، أو حامض الفوسفوريك الساخن على مدى عدة أيام، 22-25 مع حامض الفوسفوريك أصبح الأسلوب المفضل لإزالة intine المجلس الأعلى للتعليم. 2 ومع ذلك، مستمرة وقد أظهرت الأبحاث على مدار السنين أن مختلف الجراثيم وغبار الطلع وبدرجات متفاوتة من القدرة على مقاومة قاسية تجهيز ليthods شيوعا. 26،27 بعض الجراثيم وغبار الطلع هي المتدهورة تماما وتفقد جميع السلامة الهيكلية في المحاليل القلوية القوية، أو تصبح تضررت بشدة في المحاليل الحمضية قوية. 16 هو التباين في استجابة المجلس الأعلى للتعليم لظروف العلاج بسبب الاختلافات الطفيفة في المادة الكيميائية هيكل والتشكل exine من المواد sporopollenin exine بين الأنواع. 28 نظرا لتقلب في متانة كبسولات exine sporopollenin (ثانية)، فمن الضروري لتحسين ظروف التصنيع لكل أنواع الجراثيم وغبار الطلع.

أبواغ النباتات من الأنواع L. أصبحت clavatum على مصدر واحد درس على نطاق واسع من سكس. ومن المقترح أن هذا هو في المقام الأول نظرا لتوافرها على نطاق واسع، منخفضة التكلفة، monodispersity، ومتانة الكيميائية 9،29 الجراثيم يمكن بسهولة حصاد واحتواء محتويات جبلة البوغ على شكل تجمعات من 1 - 2 ميكرون العضيات الخلوية وبiomolecules 11 L. وقد استخدمت جراثيم clavatum ومواد التشحيم مسحوق الطبيعي، 30،31 قاعدة لمستحضرات التجميل، 30 و في طب الأعشاب 32-36 لمجموعة واسعة من التطبيقات العلاجية. وسكس تم الحصول عليها من L. وقد ثبت clavatum أن تكون أكثر مرونة لمعالجة من سكس من الأنواع الأخرى من جراثيم وغبار الطلع. 2 بعد المعالجة، وقد ثبت للسكس مما أدى إلى الاحتفاظ هياكلها microridge معقدة والتوحيد الصرفي عالية مع توفير تجويف داخلي كبير لتغليف 7 وتشير الدراسات إلى أن L. سكس clavatum يمكن استخدامها لتغليف الأدوية، 10،13 اللقاحات، 11 البروتينات، 7،14 الخلايا، 8 الزيوت، 5-7،9 والمكملات الغذائية. 5،15 الملاحظة الكفاءات تحميل المجلس الأعلى للتعليم مرتفعة نسبيا بالمقارنة مع التقليدية تغليف المواد. 7 وهناك أيضا عدد من الفوائد التي أبلغ عنهاإلى المجلس الأعلى للتعليم التغليف مثل القدرة على إخفاء الأذواق، 6،10، وتوفير قدر من الحماية الطبيعية ضد الأكسدة. 12 وفي الدراسات الحالية، والأكثر شيوعا المجلس الأعلى للتعليم طريقة استخراج لL. ويستند clavatum على أربع خطوات رئيسية. خطوة واحدة هي التكثيف الراجع المذيبات في الأسيتون لمدة تصل إلى 12 ساعة على 50 درجة مئوية ليزيل الدهن جراثيم. 11 الخطوة الثانية هي التكثيف الراجع القلوية في 6٪ هيدروكسيد البوتاسيوم لمدة تصل إلى 12 ساعة على 120 درجة مئوية لإزالة حشوية والمواد البروتينية. 11 خطوة ثلاثة هي التكثيف الراجع الحمضية في 85٪ حامض الفوسفوريك لمدة تصل إلى 7 أيام عند 180 درجة مئوية لإزالة المواد intine السليلوزية 11 الخطوة الرابعة هي عملية غسل شاملة باستخدام الماء والمذيبات والأحماض والقواعد لإزالة جميع ما تبقى من مواد غير قابلة للexine والمخلفات الكيميائية.

الأهداف الرئيسية لاستخراج المجلس الأعلى للتعليم في ما يتعلق تطبيقات التغليف هي لإنتاج كبسولات والتي هي فارغة من المواد هيولية، مجانا جيئة وذهابام البروتينات المسببة للحساسية محتملة، وسليمة شكليا. 2،37 ومع ذلك، من وجهة نظر الصناعة التحويلية، فمن المهم أيضا النظر في العوامل الاقتصادية والبيئية إضافية، مثل، وكفاءة الطاقة، ومدة الإنتاج، والسلامة، والناتجة من النفايات. وفيما يتعلق كفاءة استخدام الطاقة، سواء ارتفاع درجات الحرارة وأوقات المعالجة طويلة تؤثر على تكاليف الإنتاج، فضلا عن البصمة البيئية. مدة الإنتاج والفترة الزمنية هي العوامل الرئيسية التي تؤثر الربحية المعالجة. ومما يثير القلق بشكل خاص هو أن معالجة ارتفاع درجة الحرارة يزيد من حامض الفوسفوريك قضايا السلامة وكما هو معروف أن يؤدي إلى توسيع نطاق تآكل الأمر الذي يؤدي إلى زيادة كبيرة في صيانة البنية التحتية والتأخير في أوقات دفعة تحول 38-40 حيثما كان ذلك ممكنا، والتقليل من عدد من الخطوات المطلوبة قد يؤدي إلى الحد بشكل كبير من النفايات المنتجة. ومع ذلك، تستخدم عادة عملية من أربع خطوات من L. استخراج clavatum المجلس الأعلى للتعليم لديه ببساطة إفolved من عقود من البحث وكان القليل من عملية التحسين الفعلي. في الآونة الأخيرة، Mundargi وآخرون، قدمت 41 مساهمة كبيرة في الأعمال الجارية في هذا المجال من خلال تقييم وتحسين واحدة من تقنيات استخراج المجلس الأعلى للتعليم ذكرت الأكثر شيوعا بشكل منهجي.

في القسم الأول من هذه الدراسة: defatting بوغ ويتجلى ذلك باستخدام المعالجة الأسيتون عند 50 درجة مئوية لمدة 6 ساعات. وقد أثبت الإجراءات sporoplasm وإزالة intine استخدام 85٪ تصنيع حامض الفوسفوريك عند 70 درجة مئوية لمدة 30 ساعة. يستخدم الغسيل واسعة مع الماء، والمذيبات، وحامض، وقاعدة للتدليل على إزالة محتويات جبلة البوغ المتبقية؛ والمجلس الأعلى للتعليم التجفيف ويتجلى ذلك الاستفادة التجفيف الحراري وفراغ فرن التجفيف. في القسم الثالث، المجلس الأعلى للتعليم فراغ تحميل ويتجلى ذلك الاستفادة تحميل فراغ من بروتين نموذج، زلال المصل البقري (BSA)، تليها BSA محملة-SEC الغسيل وتجفيد. في القسم الرابع، وdeterminويتجلى ذلك أوجه كفاءة التغليف BSA الاستفادة الطرد المركزي، وتحقيق صوتنة، والأشعة فوق البنفسجية / فيس الطيف.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

1. استخراج Sporopollenin Exine كبسولات (ثانية) من L. clavatum الجراثيم

ملاحظة: تتضمن عملية الاستخراج المجلس الأعلى للتعليم مسحوق قابل للاشتعال (L. clavatum)، والأحماض تآكل الساخنة، والمذيبات القابلة للاشتعال، ومعدات بالتالي المناسبة الحماية الشخصية (نظارات واقية، قناع الوجه، والقفازات، معطف المختبر)، وتقييم المخاطر وافق على استخدام والتخلص من المواد الكيميائية التي كتبها العاملين في المختبرات المرخص أمر ضروري.

  1. بوغ Defatting
    1. إعداد الجزر لانشاء في غطاء الدخان باستخدام مكثف الزجاج، ونظام توزيع المياه، وحمام الماء (الشكل 1).
    2. تزن 100 غرام L. جراثيم clavatum دون خلق الغبار وبعيدا عن أي مصدر اشتعال.
      ملاحظة: الجراثيم المستخدمة هنا تم الحصول عليها تجاريا (انظر قائمة المواد).
    3. جراثيم نقل ببطء إلى تترافلوروإيثيلين 1 L (PTFE) قارورة أسفل جولة مع قضيب التحريك المغناطيسي.
    4. إضافة 500 مل الأسيتون إلى جراثيم فيقارورة PTFE ويهز القارورة بلطف لتشكيل تعليق متجانسة.
    5. ضع قارورة PTFE في مجموعة حمام مائي عند 50 درجة مئوية والاتصال المكثف الراجع.
    6. أداء التكثيف الراجع في الأسيتون لمدة 6 ساعة مع التحريك بسرعة 200 دورة في الدقيقة، ثم يترك ليبرد في RT.
    7. تصفية تعليق استعمال ورق الترشيح تحت الفراغ وجمع الجراثيم المنزوعة الدهن في الكبيرة (15 سم القطر) أطباق بتري زجاجي.
    8. تجفيف جراثيم في درجة حرارة الغرفة (غطاء الدخان) التي تغطي بورق الألومنيوم مع فتحات للتبخر المذيبات.
  2. Acidolysis
    1. إعداد 85٪ (ت / ت) وحامض الفوسفوريك مع منزوع الأيونات الماء (DI) ونقل الجراثيم الجافة المنزوعة الدهن إلى 1 لتر PTFE قارورة.
    2. إضافة 500 مل من حمض الفوسفوريك (85٪ ت / ت) لجراثيم المنزوعة الدهن.
    3. ضع قارورة PTFE في مجموعة حمام مائي عند 70 درجة مئوية والاتصال المكثف الراجع.
    4. أداء التكثيف الراجع لطيف (70 درجة مئوية) في حامض الفوسفوريك لمدة 30 ساعة ثم السماح لبارد في درجة حرارة الغرفة.
    5. تمييع تعليق باستخدام المياه DI 500 مل دافئ وجمع سكس عن طريق الترشيح فراغ باستخدام ورق الترشيح.
    6. نقل سكس لكوب زجاجي 3 L لتنفيذ سلسلة من الغسيل.
  3. المجلس الأعلى للتعليم الغسل
    1. ضع الدورق الزجاجي 3 L تحتوي سكس في غطاء الدخان.
    2. إضافة 800 مل الساخن (50 درجة مئوية) الماء DI إلى سكس مع التحريك لطيف لمدة 10 دقيقة.
    3. تصفية تعليق باستخدام ورق الترشيح والترشيح فراغ انشاء.
    4. جمع سكس في كوب زجاج 3 L نظيفة.
    5. كرر الخطوات من 1.3.1. إلى 1.3.4. خمس مرات.
    6. إضافة 600 مل الساخن (45 درجة مئوية) الأسيتون لسكس مع التحريك لطيف لمدة 10 دقيقة.
    7. جمع سكس عن طريق الترشيح في ظل فراغ ونقل سكس لكوب زجاجي 3 L نظيفة.
    8. كرر الخطوات من 1.3.6. و1.3.7. باستخدام 600 مل الساخنة (50 درجة مئوية) 2 M حمض الهيدروكلوريك.
    9. كرر الخطوات من 1.3.6. و1.3.7. باستخدام 600 مل حور (50 ° C) 2 M هيدروكسيد الصوديوم.
    10. كرر الخطوات من 1.3.1 و 1.3.4 ثماني مرات.
    11. كرر الخطوات من 1.3.6. و1.3.7. باستخدام 600 مل الساخنة (45 درجة مئوية) الأسيتون.
    12. كرر الخطوات من 1.3.6. و1.3.7. باستخدام 600 مل الساخنة (45 درجة مئوية) الايثانول.
    13. كرر الخطوات من 1.3.6. و1.3.7. باستخدام 800 مل الساخنة (50 درجة مئوية) المياه DI.
    14. نقل سكس نظيفة لستة أطباق بتري زجاجي كبير والجافة في غطاء الدخان في RT لمدة 24 ساعة لإزالة كل محتوى الماء.
    15. تجفيف سكس في فرن الفراغ عند 60 درجة مئوية و 1 مللي بار فراغ لمدة 10 ساعة أو حتى وزن ثابت.
    16. جمع سكس المجففة ونقل إلى زجاجة البولي بروبلين.
    17. تخزين سكس في خزانة جافة.

2. توصيف سكس

  1. أداء المسح الإلكترون التحليل المجهري 41 عن طريق الأبواغ وسكس المنتجة في مراحل مختلفة.
  2. أداء تحليل العناصر 41 باستخدام الجراثيم وسكس المنتجة في مراحل مختلفة. دراي جميع العينات عند 60 درجة مئوية لمدة لا تقل عن 1 ساعة قبل التحليل الأولي وحساب محتوى البروتين باستخدام النيتروجين في المئة مع عامل الضرب 6.25 11 الحصول على النتائج باستخدام القياسات ثلاث نسخ لكل عينة.
  3. إجراء تحليل خصائص micromeritic باستخدام الديناميكي محلل صورة الجسيمات. 41
  4. مسح غير المجهزة، وتجهيزها، وسكس FITC-BSA تحميلها باستخدام ليزر متحد البؤر المجهر 41

3. Biomacromolecule تغليف من فراغ تحميل تقنية

  1. إعداد 1.2 مل من 125 ملغ / مل حل ألبومين المصل البقري (BSA) باستخدام المياه DI ونقل إلى أنبوب البولي بروبلين 50 مل.
  2. تزن 150 ملغ من سكس ونقل إلى حل جيش صرب البوسنة.
  3. دوامة أنبوب لمدة 10 دقيقة لتكوين محلول متجانس.
  4. تغطية الأنبوب باستخدام ورق الترشيح.
  5. نقل أنبوب إلى قارورة مجفف تجميد وجافة لمدة 4 ساعات مع فراغ في 1 مللي بار.
  6. تنفيذ الخطوات 3.1إلى 3.5. لمدة ثلاث دفعات مستقلة.
  7. جمع سكس تحميل BSA وإزالة الكتل باستخدام هاون ومدقة.
  8. نقل سكس BSA تحميلها إلى أنبوب 50 مل وإضافة 2 مل من الماء DI لإزالة BSA المتبقية.
  9. جمع سكس بواسطة الطرد المركزي في 4704 x ج لمدة 5 دقائق والتخلص من طاف.
  10. تكرار غسل بالماء DI مرة واحدة.
  11. تغطية الأنبوب الذي يحتوي سكس تحميل BSA باستخدام ورق الترشيح.
  12. نقل سكس لالثلاجة (-20 درجة مئوية) وتجميد لمدة 1 ساعة.
  13. تجميد تجفيف سكس لمدة 24 ساعة وتخزينها في الفريزر حتى مزيد من التوصيف.
  14. إعداد سكس همي دون BSA باستخدام نفس الإجراء كما هو الحال في الخطوات 3.1. إلى 3.13.
  15. إعداد FITC-BSA سكس المحملة باستخدام نفس الإجراء كما هو الحال في الخطوات 3.1. إلى 3.13.

4. تحديد تغليف الكفاءة

  1. تزن 5 ملغ من سكس BSA تحميلها في 2 مل أنابيب البولي بروبلين.
  2. إضافة 1.4 مل phosphaمخزنة الشركة المصرية للاتصالات المالحة 7.4 درجة الحموضة (PBS) ودوامة لمدة 5 دقائق.
  3. يصوتن تحقيق وقف عند 40٪ السعة لمدة 3 دورات من 10 ثانية.
  4. تصفية الحل باستخدام فلتر 0.45 ميكرون Polyethersulfone (PES).
  5. تنفيذ نفس الإجراء كما هو الحال في الخطوات 4.1. إلى 4.4. باستخدام سكس همي.
  6. قياس الامتصاصية في 280 نانومتر باستخدام الدواء الوهمي كما فارغة.
  7. قياس كمية من BSA مغلفة باستخدام المنحنى القياسي BSA (200 إلى 1000 ميكروغرام / مل) في برنامج تلفزيوني (42).

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

عملية استخراج مبسطة لSporopollenin Exine كبسولات

وL. وقد تحقق استخراج clavatum المجلس الأعلى للتعليم عن طريق ثلاث خطوات رئيسية: (1) Defatting استخدام الأسيتون. (2) Acidolysis باستخدام حمض الفوسفوريك 85٪ (ت / ت). و (3) واسعة النطاق المجلس الأعلى للتعليم غسل استخدام المذيبات. ويرد تدفق عملية الاستخراج المجلس الأعلى للتعليم مبسطة في الشكل 1 أ - وأنا لفترة وجيزة، وتنطوي العملية خطوة defatting مع التكثيف الراجع الأسيتون لمدة 6 ساعة على 50 درجة مئوية، ثم تم تجفيف جراثيم المنزوعة الدهن بين عشية وضحاها في غطاء الدخان لإزالة المتبقي الأسيتون. تعرضوا للجراثيم المنزوعة الدهن إلى acidolysis استخدام حمض الفوسفوريك لمدة 30 ساعة. خلال acidolysis يتم حل معظم المواد جبلة البوغ ثم إزالة أثناء الخطوة فراغ الترشيح. من أجل إزالة المواد جبلة البوغ المتبقية سلسلة واسعة من خطوات الغسيل باستخدام المذيبات، وحامض، يتم تنفيذ القاعدة، والمياه. وقد جفت سكس مبدئيا RT لمدة 24 ساعة وتجفيفها مرة أخرى في 60 درجة مئوية و 1 مللي بار فراغ لمدة 10 ساعة لإزالة المذيبات المتبقية والرطوبة.

كما هو مبين في الشكل رقم 1، تم تنفيذ جميع الخطوات استخراج المجلس الأعلى للتعليم في غطاء الدخان مع إشعار الخطر. خلال استخراج المجلس الأعلى للتعليم، ما يقرب من يلاحظ فقدان كتلة 70٪ ويرجع ذلك إلى إزالة المواد جبلة البوغ وبياناتنا يتسق مع التقارير الحالية للإنتاج سكس نظيفة وسليمة. 7، 19،20،29 عملية مبسطة من الخطوة defatting الأولية إلى المنتج النهائي اكتمال في حوالي 5 أيام وعملية يمكن زيادتها بسهولة ما يصل الى 1 كغ مختبر دفعة النطاق مع ضوابط السلامة المناسبة.

وتعرض الخطوات التغليف باستخدام سكس في الشكل 1 J - M، وهذه هي فائدة نظرا لكونها خطوات بسيطة دون involvinز المذيبات العضوية القاسية أو التي تتطلب قوى القص الميكانيكية. 7 تجاربنا التغليف تنطوي على 150 ملغ من سكس وتحميل حجم حلا كافيا لامتصاص من قبل سكس. تحميل في هذه سكس محدودة بسبب الذوبان في المذيبات مجمع مائي أو العضوية مختارة، والتحميل يمكن أن يتحقق عن طريق أي من ثلاث طرق التحميل: السلبي والضغط، والفراغ التحميل. ومع ذلك، يوفر فراغ تحميل التغليف أعلى نسبيا من المركبات. 7، 19،20

، توصيف الفيزيائية من Sporopollenin Exine كبسولات

لتحديد نظافة سكس إنتاجها باستخدام عملية مبسطة المعروضة في الشكل 1، تم فحص السطح ومستعرضة التشكل، والخصائص micromeritic، والتركيب العنصري في مراحل مختلفة من عملية الاستخراج المجلس الأعلى للتعليم. كما يظهر فيالرقم 2، والصور ووزارة شؤون المرأة وتشير جراثيم سليمة مع المجهرية فريدة من نوعها، وقبل المعالجة، لوحظت العضيات جبلة البوغ ميكرون النطاق في صورة مقطعية. مع defatting الجراثيم ومعالجة القلويات لم يلاحظ أي تغيرات شكلية والهيكلية وبصرف النظر عن تمزق من العضيات جبلة البوغ.

ويبين الشكل 3 صور SEM من سكس بعد acidolysis باستخدام حمض الفوسفوريك في نقاط زمنية مختلفة من الموارد البشرية 5 إلى 30 ساعة. هذه النتائج الدعم الذي acidolysis لمدة تصل إلى 30 ساعة ويوفر سكس سليمة ونظيفة خالية من المواد جبلة البوغ. من أجل التأكد من المواد البروتينية المتبقية، وقد أجريت CHN تحليل العناصر 29 ووتقدم البيانات في الشكل 4. هذه النتائج تقدم توجيهي لاختيار أفضل حالة تجهيز لتحقيق سكس نظيفة وسليمة. في حالة المنزوعة الدهن والقلويات تعامل سكس، لا البروتينية كبيرةلوحظ إزالة المادية. ومع ذلك، مع acidolysis باستخدام حمض الفوسفوريك، ويتم إزالة معظم المواد البروتينية في 30 ساعة ويتم احترام أي تخفيض إضافي مع زيادة زمن العملية ما يصل إلى 120 ساعة. البيانات عنصر يتسق مع التقارير السابقة بشأن معالجة طويلة من سكس 7،11 ومع سكس التجارية.

وقد تم تحليل خصائص Micromeritic عن طريق تحليل الصور الملتقطة للجسيمات الحيوي (DIPA) ويتم عرض النتائج في الشكل 5. هذه النتائج تدعم توزيع حجم موحد للسكس بعد acidolysis لمدة تصل إلى 30 ساعة، مع حجم 31.0 ± 2.2 ميكرون. في المقابل، تنخفض المجلس الأعلى للتعليم السلامة الهيكلية مع acidolysis فترات طويلة وتبدأ تسبب تجزئة كبير من سكس خارج فترات العلاج 30 ساعة.

ويبين الشكل 6 البيانات ووزارة شؤون المرأة وDIPA للسكس تنتج سوى acidolysis المواليةcessing استخدام حمض الفوسفوريك لمدة 30 ساعة. وتؤكد هذه النتائج أنه بعد خطوة defatting، acidolysis المنتجة سكس نظيفة وسليمة مع توزيع حجم موحد من 32.5 ± 2.7 ميكرون. سكس Acidolysis فقط لديها محتوى البروتين المتبقية من٪ فقط 0.15 ± 0.0، وقريب مصممة على محتوى٪ نيتروجين، 11 وهو مشابه لسكس تنتجها القلويات وacidolysis المعاملة على النحو المبين أعلاه ومع تقارير سابقة 7.

الكبسلة باستخدام Sporopollenin Exine كبسولات

من أجل شرح استخدام L. سكس clavatum المنتجة باستخدام عملية acidolysis فقط، وقد أجريت التجارب الكبسلة باستخدام BSA كما بروتين نموذج. وقد تحقق التحميل إلى سكس باستخدام تقنية الفراغ تحميل باستخدام 150 ملغ سكس و 1.2 مل من 125 ملغ / مل BSA الشكل 7 يظهر ايم CLSMعمر سكس قبل وبعد المعالجة acidolysis فقط ومع FITC-BSA التغليف. وتشير البيانات إلى أن تألق ذاتي سكس غير المعالجة المعرض نظرا لوجود مكونات sporoplasm داخل تجويف بوغ. ومع ذلك، بعد تجهيز acidolysis فقط، تتم إزالة كافة محتويات جبلة البوغ مما أدى إلى تجويف الداخلي فارغة. لافت للنظر، بعد التغليف من FITC-BSA، لوحظ مخضر داخل سكس، مؤكدا التغليف من البروتين النموذج في سكس. 19،20،41

وعلاوة على ذلك، للتحقيق في التغيرات الشكلية والخصائص micromeritic من BSA تحميلها سكس، أجريت SEM وتحليل DIPA ويتم تقديم البيانات في الشكل 8. الصور ووزارة شؤون المرأة تؤكد وجود microridges سليمة ونظيفة بعد BSA التحميل. وبالإضافة إلى ذلك، لم يلاحظ حدوث أي تغييرات كبيرة في قطر، دائرية، ونسبة الارتفاع بعد BSA تحميل في سكس. وهذه البيانات هي consisteالإقليم الشمالي مع التقارير السابقة عن تغليف الأدوية باستخدام سكس. 7،10

لقياس كمية BSA مغلفة، تم استخراج BSA من 5 ملغ من سكس تحميل BSA، ويتم تقديم البيانات الواردة في الجدول 1. وتشير بيانات 0.170 ± 0.01 غرام من BSA تحميل في كل غرام من سكس. وبشكل عام، ووزارة شؤون المرأة، DIPA، CLSM، وتقدير حجم BSA عن طريق التحليل الطيفي، تأكيد التغليف الناجح لجيش صرب البوسنة في L. سكس clavatum والمجلس الأعلى للتعليم الاستقرار الصرفي.

شكل 1
شخصية عملية 1. تبسيط استخراج لL. clavatum Sporopollenin Exine كبسولات (ثانية). (A) جراثيم غير المعالجة. (ب) سبور defatting باستخدام التكثيف الراجع انشاء عند 50 درجة مئوية لمدة 6 ساعات. (C) الترشيح المذيبات وجمع أيون من الجراثيم المنزوعة الدهن. (D) تجفيف جراثيم المنزوعة الدهن في درجة حرارة الغرفة. (E) acidolysis سبور في قارورة PTFE باستخدام 85٪ (ت / ت) وحامض الفوسفوريك عند 70 درجة مئوية لمدة 30 ساعة. (F) حمض الترشيح باستخدام فراغ الترشيح انشاء (G) المجلس الأعلى للتعليم الغسيل باستخدام سلسلة من الماء، الحمضية، وقاعدة، والمذيبات خطوات الغسيل. (H) المجلس الأعلى للتعليم التجفيف باستخدام فرن الفراغ عند 60 درجة مئوية و 1 مللي بار فراغ لمدة 10 ساعة. (I) سليمة ونظيفة ، والمجففة سكس كمنتج نهائي. (J) خلط سكس وBSA الحل. (K) تجانس سكس وBSA الحل. (L) فراغ تحميل BSA إلى سكس. سكس (M) BSA تحميلها. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

54768 / 54768fig2.jpg "/>
الشكل 2. المسح الإلكترونية تحليل مجهري للL. clavatum الجراثيم خلال مراحل مختلفة من قبل الحمضية العلاج. (A) جراثيم غير المعالجة تظهر العضيات والجزيئات الحيوية الخلوية جبلة البوغ. (ب) الأسيتون الجراثيم المعالجة عرض تعطلت محتويات جبلة البوغ. (C) و (D) القلوي تعامل جراثيم تظهر إزالة محتويات جبلة البوغ و التجاعيد الداخلية طبقة intine السليلوزية. مقتبس من 41 وتستخدم مع إذن من التقارير العلمية. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

الشكل (3)
الشكل 3. المسح الإلكترونية تحليل مجهري للL. clavatum الجراثيم خلال مراحل مختلفة من حمضالعلاج 5-30 ساعة (A - D). على التوالي، 5، 10، 20، و 30 ساعة حمض تعامل الجراثيم المجهرية تبين خارجية سليمة وتجويف داخلي نظيف. مقتبس من 41 وتستخدم مع إذن من التقارير العلمية. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

الشكل (4)
الشكل 4. محتوى البروتين من الجراثيم وSporopollenin Exine كبسولات (ثانية). البروتين المتواجد بعد مراحل مختلفة من العلاج. يتم تمثيل البيانات هي في المتوسط ​​من القياسات ثلاث نسخ مع الانحراف المعياري (ن = 3). مقتبس من 41 وتستخدم مع إذن من التقارير العلمية. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر سو هذا الرقم.

الرقم 5
الرقم 5. الديناميكي التصوير تحليل الجسيمات (DIPA) من الجراثيم وSporopollenin Exine كبسولات (ثانية) في مراحل مختلفة من العلاج أعمدة (A - C). هي على التوالي، ومعالجة ما قبل الحمضية، والعلاج حامض، وسكس سليمة. المؤامرات هي الرسوم البيانية تمثيلية من المجلس الأعلى للتعليم بقطر، دائرية، نسبة الارتفاع، وحافة الانحدار. مقتبس من 41 وتستخدم مع إذن من التقارير العلمية. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

الشكل (6)
الشكل 6. المجهر الإلكتروني الماسح (SEM) والديناميكي التصوير تحليل الجسيمات (DIPA) المؤرخ 30 ساعة Acidoly(A) سكس جهاز الأمن والمخابرات فقط Sporopollenin Exine كبسولات (ثانية). تبين المجهرية الخارجية سليمة وتجويف داخلي نظيف. (ب) الرسوم البيانية ممثل المجلس الأعلى للتعليم بقطر، دائرية، ونسبة الارتفاع. مقتبس من 41 وتستخدم مع إذن من التقارير العلمية. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

الرقم 7
الرقم 7. متحد البؤر الليزر الضوئي المجهري (CLSM) تحليل Sporopollenin Exine كبسولات (ثانية) قبل وبعد العلاج وBSA تغليف. ويصور الصف الأول جراثيم غير المعالجة تظهر العضية الخلوية جبلة البوغ وتألق ذاتي جزيء حيوي. الصف الثاني يصور 30 ​​ساعة سكس-acidolysis إلا مع وجود تجويف الداخلي فارغة. الصف الثالث يصور FITC-BSA تحميلفي 30 ساعة سكس-acidolysis فقط. (الحانات هي مقياس 10 ميكرون). مقتبس من 41 وتستخدم مع إذن من التقارير العلمية. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

شكل 8
الرقم 8. المجهر الإلكتروني الماسح (SEM) والديناميكي التصوير تحليل الجسيمات (DIPA) توصيف تحميل BSA-Sporopollenin Exine كبسولات (ثانية). الصور (A) SEM من سكس BSA تحميلها. (ب) الرسوم البيانية التمثيلية للتحميل BSA-قطر المجلس الأعلى للتعليم، دائرية، نسبة الارتفاع، وحافة الانحدار. مقتبس من 41 وتستخدم مع إذن من التقارير العلمية. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

مادة BSA تحميل لكل دفعة (125 ملغ / مل) BSA في 5 سكس ملغم (ملغم) كمية BSA تحميل (غ لكل غرام من ثانية) جراثيم غير المعالجة 0.6 مل 0.654 ± 0.05 0.131 ± 0.01 سكس 1.2 مل 0.831 ± 0.05 0.170 ± 0.01

الجدول 1. تغليف من الأبقار مصل الزلال (BSA) في غير المعالجة الجراثيم وسكس. حجم محلول BSA تستخدم لتحميل في 150 ملغ دفعة من "جراثيم غير المعالجة 'أو' سكس '. يتم تمثيل البيانات هي في المتوسط ​​دفعات ثلاث نسخ مع الانحراف المعياري (ن = 3). مقتبس من 41 وتستخدم مع إذن من التقارير العلمية.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

في هذا العمل، وتحليل منهجي لاستخراج المجلس الأعلى للتعليم من L. ويرد جراثيم clavatum ويبين هذا التقرير أنه من الممكن لإنتاج كبسولات ذات جودة أعلى مع تحقيق أيضا تبسيط كبير من قبل القائمة بروتوكول شائعة الاستخدام. 11 وعلى عكس بروتوكول الحالية التي تتطلب درجة حرارة عملية عالية (180 درجة مئوية) و وقد ركز مدة طويلة عملية (7 أيام)، 11 الحالي SEC معالجة استخراج الأمثل في المقام الأول على خفض درجة الحرارة ومدة خطوة acidolysis.

توفر العلاجات defatting والقلوية إزالة الحد الأدنى من المواد جبلة البوغ من الجراثيم. ومع ذلك، acidolysis من 5 ساعة إلى 120 ساعة إزالة أكبر قدر ممكن من المواد جبلة البوغ. وأشارت النتائج إلى أن مدة المعالجة الشاملة ودرجات الحرارة يمكن أن تخفض بشكل كبير من التقنيات التقليدية، 11، وأن ساعة فقط 30 في درجة حرارة معتدلة (70° C) توفير حامض الفوسفوريك كبسولات الجودة المثلى. أيضا، بعد 30 ساعة acidolysis، تبين أن سكس بدأت لكسر ولوحظ وجود زيادة كبيرة في أجزاء الجسيمات، مما يشير إلى أن الدفعة بأكملها سكس يجوز المعرض وجود انخفاض في السلامة الهيكلية الشاملة. بالإضافة إلى ذلك، تجدر الإشارة إلى أن L. يعتبر clavatum لتشمل sporopollenin قوية نسبيا، 2 وأن ظروف التصنيع المحددة المعنية في هذا البروتوكول، مثل تركيز الحمض، ودرجة الحرارة، و / أو مدة التحلل، قد تحتاج إلى تعديل لأنواع حبوب اللقاح الأخرى.

وقد تبين أن إنتاج سكس كتبها acidolysis فقط باستخدام حمض الفوسفوريك (85٪ ت / ت) لمدة 30 ساعة عوائد سكس نظيفة وسليمة. ويؤكد 41 البيانات أن acidolysis هو خطوة حاسمة في إنتاج المجلس الأعلى للتعليم. وأخيرا، تم استخدام سكس حمض الوحيدة للتغليف من جيش صرب البوسنة ولوحظ وجود درجة عالية من التحميل. تحميل ثكما حقق مع تطبيق فراغ، حيث يتم تبديل المجلس الأعلى للتعليم ضغط تجويف داخلي لرسم بقوة على حل جيش صرب البوسنة في كبسولات فارغة. Nanochannels (ديا 15 - 20 نانومتر)، والتي تم تحديدها سابقا في جدران exine من L. clavatum، 7 سماح الحل للدخول في تجويف داخلي كبير. بعد التحميل، وكانت تغسل الكبسولات والمجففة في تجميد أكثر جفافا لانتاج مسحوق تتدفق الحرة.

حجم التوحيد والصفات المورفولوجية من العوامل الهامة لتقييم نوعية من مادة التغليف ناجحة. وأكد حجم التوحيد لوحظ ومورفولوجيا سليمة من سكس تحميل BSA-إمكانية إستخدام سكس acidolysis فقط معالجتها لتطبيقات الكبسلة.

هذه النتائج مهمة للإنتاج الصناعي على نطاق واسع من سكس وتحفيز المزيد من الاهتمام في التطبيقات المحتملة للسكس في الكبسلة المخدرات،البروتينات، والببتيدات والمكملات الغذائية، والمغذيات، ومستحضرات التجميل.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

الكتاب ليس لديهم ما يكشف.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Lycopodium clavatum spores (s-type) Sigma 19108-500G-F
Bovine serum albumin Sigma A2153-50G
FITC-conjugated BSA Sigma A9771-250MG
Phosphoric acid (85% w/v) Sigma 438081-2.5L
Hydrochloric acid Sigma V800202 
Sodium hydroxide Sigma S5881-1KG 
Acetone Sigma V800022
Ethanol AcME  C000356
Deionized water Millipore purified water 
Qualitative filter paper (grade No. 1, cotton cellulose)
Polystyrene microspheres (50 ± 1 µm)  Thermoscientific (CA, USA) 4250A
Vectashield  Vector labs (CA, USA) H-1000
Sticky-slides, D 263 M Schott glass, No.1.5H (170 μm, 25 mm x 75 mm) unsterile glass slide Ibidi GmbH (Munich, Germany) 10812
Commercial Lycopodium SECs (L-type) Polysciences, Inc. (PA, USA) 16867-1
Heating plates IKA, Germany
Scanning electron microscope Jeol, Japan  JFC-1600
Elemental analyzer  Elementar, Germany VarioEL III
FlowCam: The benchtop system Fluid Imaging Technologies, USA FlowCamVS
Confocal laser scanning microscope Carl Zeiss, Germany LSM710
Freeze dryer Labconco, USA 
UV Spectrometer Boeco, Germany S220

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Paunov, V. N., Mackenzie, G., Stoyanov, S. D. Sporopollenin micro-reactors for in-situ preparation, encapsulation and targeted delivery of active components. J. Mater. Chem. 17, (7), 609-612 (2007).
  2. Barrier, S. Physical and chemical properties of sporopollenin exine particles. Doctoral dissertation thesis. University of Hull. (2008).
  3. Dosage Form. US Patent. Beckett, S. T., Atkin, S. L., Mackenzie, G. US 7,608,270 B2 (2009).
  4. Lorch, M., et al. MRI contrast agent delivery using spore capsules: controlled release in blood plasma. Chem. Comm. (42), 6442-6444 (2009).
  5. Wakil, A., Mackenzie, G., Diego-Taboada, A., Bell, J. G., Atkin, S. L. Enhanced bioavailability of eicosapentaenoic acid from fish oil after encapsulation within plant spore exines as microcapsules. Lipids. 45, (7), 645-649 (2010).
  6. Barrier, S., et al. Sporopollenin exines: A novel natural taste masking material. LWT-Food Sci. Technol. 43, (1), 73-76 (2010).
  7. Barrier, S., et al. Viability of plant spore exine capsules for microencapsulation. J. Mater. Chem. 21, (4), 975-981 (2011).
  8. Hamad, S. A., Dyab, A. F., Stoyanov, S. D., Paunov, V. N. Encapsulation of living cells into sporopollenin microcapsules. J. Mater. Chem. 21, (44), 18018-18023 (2011).
  9. Diego-Taboada, A., et al. Sequestration of edible oil from emulsions using new single and double layered microcapsules from plant spores. J. Mater. Chem. 22, (19), 9767-9773 (2012).
  10. Diego-Taboada, A., et al. Protein free microcapsules obtained from plant spores as a model for drug delivery: Ibuprofen encapsulation, release and taste. Mater. Chem. B. 1, (5), 707-713 (2013).
  11. Atwe, S. U., Ma, Y., Gill, H. S. Pollen grains for oral vaccination. J. Control. Release. 194, 45-52 (2014).
  12. Mackenzie, G., Beckett, S., Atkin, S., Diego-Taboada, A., et al. Ch 24. Microencapsulation in the Food Industry: A Practical Implementation Guide. Gaonkar, A. G., et al. Elsevier. 283-297 (2014).
  13. Diego-Taboada, A., Beckett, S. T., Atkin, S. L., Mackenzie, G. Hollow Pollen Shells to Enhance Drug Delivery. Pharmaceutics. 6, (1), 80-96 (2014).
  14. Ma, H., et al. Preparation of a novel rape pollen shell microencapsulation and its use for protein adsorption and pH-controlled release. J. Microencapsul. 31, (7), 667-673 (2014).
  15. Archibald, S. J., et al. How does iron interact with sporopollenin exine capsules? An X-ray absorption study including microfocus XANES and XRF imaging. J. Mater. Chem. B. 2, (8), 945-959 (2014).
  16. Southworth, D., et al. Ch 10. Microspores Evolution and Ontogeny: Evolution and Ontogeny. Blackmore, S., et al. Academic Press. 193-212 (2013).
  17. Stanley, R. G., Linskens, H. F. Pollen: Biology, Biochemistry, Management. Springer-Verlag. Berlin, Germany. 307 (1974).
  18. Ariizumi, T., Toriyama, K. Genetic regulation of sporopollenin synthesis and pollen exine development. Annu. Rev. Plant Biol. 62, 437-460 (2011).
  19. Mundargi, R. C., et al. Natural Sunflower Pollen as a Drug Delivery Vehicle. Small. 12, (9), 1167-1173 (2015).
  20. Mundargi, R. C., et al. Lycopodium Spores: A Naturally Manufactured, Superrobust Biomaterial for Drug Delivery. Adv. Funct. Mater. 26, (4), 487-497 (2015).
  21. Topical Formulations Containing Sporopollenin. US Patent. Beckett, S. T., Atkin, S. L., Mackenzie, G. WO2007012857A1 (2007).
  22. Zetzsche, F., Huggler, K. Untersuchungen über die Membran der Sporen und Pollen I. 1. Lycopodium clavatum L. Liebigs Ann. Chem. 461, (1), 89-109 (1928).
  23. Zetschke, F., Kaelin, O. Untersuchungen über die membran der sporen und pollen v. 4. Zur autoxydation der sporopollenine. Helv. Chim. Acta. 14, (1), 517-519 (1931).
  24. Zetzsche, F., Vicari, H. Untersuchungen über die Membran der Sporen und Pollen III. 2. Picea orientalis Pinus silvestris L., Corylus Avellana L. Helv. Chim. Acta. 14, (1), 62-67 (1931).
  25. Zetzsche, F., Kalt, P., Liechti, J., Ziegler, E. Zur Konstitution des Lycopodium-Sporonins, des Tasmanins und des Lange-Sporonins. XI. Mitteilung über die Membran der Sporen und Pollen. Journal für Praktische Chemie. 148, (9-10), 267-286 (1937).
  26. Shaw, G., Yeadon, A. Chemical studies on the constitution of some pollen and spore membranes. Grana. 5, (2), 247-252 (1964).
  27. Shaw, G., Yeadon, A. Chemical studies on the constitution of some pollen and spore membranes. J. Chem. Soc. C Org. 16-22 (1966).
  28. Domìnguez, E., Mercado, J. A., Quesada, M. A., Heredia, A. Pollen sporopollenin: degradation and structural elucidation. Sex. Plant Reprod. 12, (3), 171-178 (1999).
  29. Mundargi, R. C., Tan, E. L., Seo, J., Cho, N. J. Encapsulation and controlled release formulations of 5-fluorouracil from natural Lycopodium clavatum spores. J. Ind. Eng. Chem. 36, 102-108 (2016).
  30. Orhan, I., Küpeli, E., Şener, B., Yesilada, E. Appraisal of anti-inflammatory potential of the clubmoss, Lycopodium clavatum L. J. Ethnopharmacol. 109, (1), 146-150 (2007).
  31. Baytop, T. Therapy with medicinal plants in Turkey. 2nd, Nobel Tip Kitabevleri Ltd. Istanbul. 334-335 (1999).
  32. Pathak, S., Banerjee, A., Paul, S., Khuda-Bukhsh, A. R. Protective potentials of a plant extract (Lycopodium clavatum) on mice chronically fed hepato-carcinogens. Indian J. Exp. Biol. 47, (7), 602-607 (2009).
  33. Ma, X., Gang, D. R. The lycopodium alkaloids. Nat. Prod. Rep. 21, (6), 752-772 (2004).
  34. Bishayee, K., Chakraborty, D., Ghosh, S., Boujedaini, N., Khuda-Bukhsh, A. R. Lycopodine triggers apoptosis by modulating 5-lipoxygenase, and depolarizing mitochondrial membrane potential in androgen sensitive and refractory prostate cancer cells without modulating p53 activity: signaling cascade and drug-DNA interaction. Eur. J. Pharmacol. 698, (1), 110-121 (2013).
  35. Durdun, C., Papuc, C., Crivineanu, M., Nicorescu, V. Antioxidant potential of Lycopodium clavatum and Cnicus benedictus hydroethanolic extracts on stressed mice. Scientific Works-University of Agronomical Sciences and Veterinary Medicine, Bucharest Series C, Veterinary Medicine. 57, (3), 61-68 (2011).
  36. Banerjee, J., Biswas, S., Madhu, N. R., Karmakar, S. R., Biswas, S. J. A better understanding of pharmacological activities and uses of phytochemicals of Lycopodium clavatum: A review. J. Pharmacogn. Phytochem. 3, (1), 207-210 (2014).
  37. Mundargi, R. C., et al. Extraction of sporopollenin exine capsules from sunflower pollen grains. RSC Adv. 6, (20), 16533-16539 (2016).
  38. Modeling Polyethylene Fractionation Using the Statistical Associating Fluid Theory. Mathias, P. M., Chen, C. C., Walters, M. Proceedings of 3rd Joint China/USA Chemical Engineering Conference, Beijing, China, (2000).
  39. El-Bayaa, A., Badawy, N., Gamal, A., Zidan, I., Mowafy, A. Purification of wet process phosphoric acid by decreasing iron and uranium using white silica sand. J. Hazar. Mater. 190, (1), 324-329 (2011).
  40. Carr, J., Zhang, L., Davis, M., Ravishankar, S., Flieg, G. Scale Controlling Chemical Additives for Phosphoric Acid Production Plants. Procedia Engineering. 83, 233-242 (2014).
  41. Mundargi, R. C., et al. Eco-friendly streamlined process for sporopollenin exine capsule extraction. Sci. Rep. 6, 1-14 (2016).
  42. Smith, B. C. Fundamentals of Fourier transform infrared spectroscopy. CRC press. 182 (2011).

Comments

0 Comments


    Post a Question / Comment / Request

    You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

    Usage Statistics