में होस्ट phenotypes की परीक्षा

Immunology and Infection

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Summary

इस अध्ययन के एक एंटीबायोटिक से त्वचा और पेट Microbiome समुदायों रचना के परिवर्तन के बाद एक मॉडल मछली मेजबान पर प्रभाव प्रकट करने के तरीकों में शामिल है।

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Carlson, J. M., Chavez, O., Aggarwal, S., Primm, T. P. Examination of Host Phenotypes in Gambusia affinis Following Antibiotic Treatment. J. Vis. Exp. (120), e55170, doi:10.3791/55170 (2017).

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Abstract

Introduction

यह स्थापित किया है कि एंटीबायोटिक दवाओं मानव Microbiome dysbiosis के लिए अग्रणी बाधित कर सकते हैं, एक माइक्रोबियल समुदाय असंतुलन अर्थ। एंटीबायोटिक उपचार के बाद माइक्रोबायोटा की compositional परिवर्तन समुदाय की विविधता को कम करने के लिए, प्रमुख सदस्यों को कम करने, और समुदाय के चयापचय में परिवर्तन, विशेष रूप से पेट 1, 2 में दिखाया गया है। पेट Microbiome की एंटीबायोटिक अशांति क्लोस्ट्रीडियम बेलगाम 3, 4 और 5 के लिए साल्मोनेला बसाना प्रतिरोध को कम कर सकते हैं।

इसके अतिरिक्त, माइक्रोबायोटा के विघटन कई सिंड्रोम और मनुष्यों में बीमारियों का विकास करने के लिए जोड़ा गया है (जैसे, एंटीबायोटिक जुड़े आंत्रशोथ, सूजन आंत्र रोग, चयापचय संबंधी विकार, आदि।)। एंटीबायोटिक्स भी व्यापक रूप में विकास प्रमोटरों के रूप में कृषि के क्षेत्र में लागू किया जाता हैपशुधन और कुक्कुट उत्पादन 6। इन शक्तिशाली उपकरण का उपयोग जमानत के प्रभाव है, जो एंटीबायोटिक प्रतिरोध के तेजी से वृद्धि के साथ-साथ एक बाधित Microbiome के प्रभाव में स्पष्ट है इसकी बसे मेजबान के साथ है बिना नहीं है। कई अध्ययनों से पता चला व्यापक स्पेक्ट्रम एंटीबायोटिक के उपयोग की संरचना और माइक्रोबायोटा के समारोह के लिए लंबे समय तक चलने परिणाम है, अभी तक एक एंटीबायोटिक बाधित Microbiome को प्रभावित मेजबान शरीर क्रिया विज्ञान से साइड इफेक्ट होते हैं केवल अटकलों अभी तक समर्थित होना है जो मौजूद है।

के बीच मेजबान, माइक्रोबायोटा, और एंटीबायोटिक दवाओं के परस्पर क्रिया एक संक्षिप्त तरीके से समझा जा रहा से दूर है। इसलिए, एक सरल और अधिक विनयशील मॉडल अत्यधिक जटिल स्तनधारी प्रणाली पर प्रकाश बहा के लिए फायदेमंद है। मानव में mucosal सतहों, पेट सहित, सबसे अधिक घनत्व और रोगाणुओं की विविधता, और भी सबसे अंतरंग सूक्ष्म जीव मेजबान बातचीत बंदरगाह। मछली प्रस्तावों एस की श्लैष्मिक त्वचा Microbiomeएक मॉडल प्रणाली के रूप में everal लाभ। Teleostei (बोनी मछली) जल्द से जल्द प्रजातियों कशेरुकी अर्थ है कि teleosts दोनों सहज है और प्रतिरक्षा प्रणाली है कि है खानेवाला बैक्टीरियल समुदायों 7 के साथ एक रिश्ता सह-विकसित का अधिग्रहण भीतर हट में से एक है। मछली त्वचा के शेयरों के साथ इस तरह के शारीरिक कार्यों, प्रतिरक्षा घटक है, और बलगम उत्पादक कोशिकाओं 8 की व्यवस्था के रूप में स्तनधारियों के प्रकार 1 श्लैष्मिक सतहों, कई विशेषताओं। मछली त्वचा mucosal सतह की बाहरी स्थान एक Microbiome प्रयोगात्मक हेरफेर करने के लिए आसान है और नमूना प्रदान करता है।

पश्चिमी mosquitofish, Gambusia एफिनिस (जी एफिनिस), एक मॉडल मछली है कि संभोग और विष विज्ञान 9, 10, 11 के अध्ययन के लिए अतीत में इस्तेमाल किया गया है। एक आक्रामक प्रजाति के रूप में छोटे आकार, जंगली में आबादी बहुतायत को देखते हुए, मी inimal देखभाल की लागत, और हार्डी प्रकृति, हम एक श्लैष्मिक Microbiome मॉडल के रूप में जी एफिनिस विकसित किया है। इसके अलावा, Gambusia जीवित बच्चा जनने वाली स्तनधारी, जो मछली की प्रजातियों में असामान्य है के साथ युवा रहने के लिए जन्म देने के शरीर क्रिया विज्ञान का हिस्सा है। हम मछली त्वचा सामान्य माइक्रोबायोटा के समय में सबसे व्यापक अध्ययन -16 का उपयोग कर Gambusia 12 के साथ की रूपरेखा पूरा किया। इसके अलावा काम त्वचा और पेट microbiota के विघटन एक व्यापक स्पेक्ट्रम एंटीबायोटिक 13 का उपयोग कर निम्न मेजबान पर तीन नकारात्मक प्रभाव का प्रदर्शन किया।

पांच अलग अलग प्रभाव एंटीबायोटिक प्रदर्शन के बाद मछली में जांच की गई। Microbiome की सबसे अच्छी तरह से स्थापित मेजबान लाभ रोगाणुओं की प्रतिस्पर्धी अपवर्जन है। मछली रोगज़नक़ Edwardsiella ictaluri वाणिज्यिक कैटफ़िश खेतों 14 में आंतों का सेप्टीसीमिया के फैलने के कारण जाना जाता है। ई ictaluri भी घातक zebrafish संक्रमित करने के लिए दिखाया गया हैवर्ग = "xref"> 15, 16 और 17 Gambusia। पानी स्तंभ से इस रोगज़नक़ के साथ एक चुनौती बहिष्कार का एक उपाय के रूप में काम कर सकते हैं। एक व्यक्ति रोगज़नक़ के लिए संवेदनशीलता के लिए एक तुलना के रूप में, मिश्रित जीवों की एक उच्च घनत्व के प्रदर्शन के दौरान अस्तित्व भी बाहर किया गया था। मल और कार्बनिक युक्त मिट्टी माइक्रोबियल समुदायों के सामान्य रूप से सामना करना पड़ा स्रोत के रूप में इस्तेमाल किया गया।

एक अन्य की स्थापना की भूमिका जीवाणु पेट समुदाय करता है पोषक तत्व प्रसंस्करण और ऊर्जा फसल है, इस प्रकार की मेजबानी के लिए समग्र पोषण तेज प्रभावित। पोषण की सकल माप के रूप में, मछली शरीर के वजन से पहले और एक मानक आहार खिलाया जा रहा से एक महीने के बाद की तुलना में था। एंटीबायोटिक का इलाज मछली के रूप में एक औसत वजन खो दिया है, जबकि औसत पर नियंत्रण मछली महीने से अधिक वजन प्राप्त की। वजन बढ़ाने की इस कमी के लिए तंत्र स्पष्ट नहीं है। एक संभव योगदान कारक पेट में भोजन के पारगमन समय है। एक सैनिक मोतीlity विधि zebrafish (एडम रिच, सनी Brockport, व्यक्तिगत संचार) से रूपांतरित किया गया पारगमन समय निर्धारित करने के लिए। यह अभी तक यदि एंटीबायोटिक का इलाज मछली एक बदल पारगमन समय नहीं निर्धारित किया गया है।

एक आम चुनौती सभी जीवों, विशेष रूप से मछली, द्वारा प्राकृतिक वातावरण में अनुभवी आसमाटिक तनाव है। Gambusia जल्दी से अनुकूलित करने के लिए जब तीव्रता से लवणता 18 की उच्च सांद्रता में जोर दिखाया गया है। हैरानी की बात है, एक एंटीबायोटिक-बदल Microbiome का प्रदर्शन के साथ मछली एक उच्च नमक तनाव के अस्तित्व को कम कर दिया। इस उपन्यास phenotype के लिए तंत्र जांच के अधीन है। जलीय जानवर, विशेष रूप से एक्वेरियम में एक अन्य आम तनाव, नाइट्रोजन के जहरीले रूपों (अमोनिया, नाइट्रेट, नाइट्राइट और) है। नाइट्रेट के खिलाफ अस्तित्व एंटीबायोटिक का इलाज और नियंत्रण मछली के बीच काफी अलग नहीं था। इस पांडुलिपि में प्रस्तुत तरीकों ऐसे ज़ेबरा के रूप में Gambusia या इसी तरह मछली मॉडल जीवों के साथ इस्तेमाल किया जा सकतामछली और medaka, प्रयोगात्मक हेरफेर निम्नलिखित मछली में phenotypes को मापने के लिए।

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Protocol

सभी पशु प्रयोगों, IACUC प्रोटोकॉल के अनुमोदन के तहत आयोजित की गई 14-05-05-1018-3-01 गिने, 13-04-29-1018-3-01, और 14-04-17-1018-3-01।

1. पशु संग्रह, हैंडलिंग, और नैतिक देखभाल

  1. क्षेत्र साइट (http://www.sms.si.edu/irlspec/Gambusia_affinis.htm पर पहचान गाइड) 19 एल बाल्टी में एक छोटे से डुबकी शुद्ध और जगह का उपयोग करने से Gambusia एफिनिस लीजिए। दृश्य निरीक्षण का प्रयोग प्रजातियों की पहचान करने के लिए।
  2. तालाब के पानी के साथ एक बाल्टी में 2 डी - 1 रेस्ट मछली। बाद में, 76 या 189 एल मछलीघर 25 डिग्री सेल्सियस पर आधा तालाब के पानी / आधा नल के पानी से भरे टैंक, उत्साह से भरा हुआ airstone साथ पदार्थो में मछली हस्तांतरण। जब मछली निपटने के रूप में न्यूनतम उनकी त्वचा Microbiome परेशान करने के लिए एक छोटा सा डुबकी नेट का प्रयोग करें।
    नोट: मछली घनत्व कोई 20 मछली / मछलीघर पानी की 38 एल से अधिक होना चाहिए। मछली के लिए प्रयोग से पहले कम से कम 5 डी मछलीघर को आदत रहे हैं।
  3. मछली प्रति परत भोजन के 5 मिलीग्राम के साथ एक दैनिक आहार पर मछली फ़ीड। होएक 12 घंटे प्रकाश / 12 घंटे अंधेरे चक्र के साथ एलडी मछली।

सभी प्रयोगों के लिए 2. प्रारंभिक एंटीबायोटिक एक्सपोजर

  1. एक ही मछलीघर से प्रत्येक प्रयोग से सभी मछली आकर्षित, दो अलग-अलग समूहों में जगह (इलाज: एंटीबायोटिक और नियंत्रण के संपर्क में: unexposed) 19 एल बाल्टी में। पिछले डेटा से पता चलता है कि एक ही मछलीघर में मछली त्वचा microbiomes समुदाय संरचना में थोड़ा बदलाव किया है कि homogenized है एकत्र। 12
  2. प्रयोगों के दौरान, कृत्रिम तालाब के पानी के 2 एल में मछली रखने (APW; 0.33 छ / एल 2 CaCl, 0.33 छ / एल MgSO 4, 0.19 छ / एल NaHCO 3) है कि उपयोग से पहले autoclaving द्वारा निष्फल है।
  3. डाइमिथाइल sulfoxide (DMSO) में 50 मिलीग्राम / एमएल जोड़कर रिफैम्पिसिन एंटीबायोटिक शेयर समाधान तैयार है। रिफैम्पिसिन एक प्रतिनिधि व्यापक स्पेक्ट्रम एंटीबायोटिक है कि मछली के लिए गैर विषैले है। इंसानों और चूहों में, यह ऊतकों में अच्छी तरह से वितरित करता है।
  4. रिफैम्पिसिन स्टॉक से एक अंतिम प्रशासन3 दिन के लिए इलाज मछली समूह की एंटीबायोटिक निवेश के लिए APW के 2 एल में 25 माइक्रोग्राम / एमएल की एकाग्रता। ध्यान दें कि बाद 3 डी, कृषि त्वचा बैक्टीरियल संख्या pretreated मछली त्वचा के समान वापसी।
  5. समानांतर में, APW में इलाज मछली के एक समूह रखने के लिए और एक बराबर पानी स्तंभ में DMSO की राशि (APW के एल प्रति 0.5 एमएल) एक नियंत्रण समूह के रूप में कार्य करने के लिए दे।
  6. प्रयोगों मछली phenotypes पर एक एंटीबायोटिक-बदल Microbiome के प्रभाव को मापने के लिए, क्रम में एंटीबायोटिक से ही सीधे प्रभाव से बचने के लिए, के 2 एल के साथ तीन दिवसीय एंटीबायोटिक जोखिम (या नियंत्रण) की अवधि, एक बाल्टी में हस्तांतरण मछली निम्नलिखित इरादा कर रहे हैं के रूप में ताजा APW।
    1. एक 10 घंटे बाकी अवधि का प्रयोग करें ताकि एंटीबायोटिक मछली के शव से निकाल दिया जाता है। बेस प्रयोगों पर इस उन्मूलन समय जहां मछली तीन दिन के लिए 25 माइक्रोग्राम प्रति एंटीबायोटिक का / एमएल से अवगत कराया गया। रीढ़ की हड्डी pithing द्वारा पीछा किया snipping द्वारा मछली euthanize, तो पूरे शरीर को एक ऊतक बनाने की मशीन का उपयोग कर homogenize।
    2. एक अगर पेट्री डिश के केंद्र में होने के बाद 0.2 माइक्रोन छानने इस निलंबन के 50 μL रखकर एंटीबायोटिक उपस्थिति निर्धारित करते हैं। अगर है, जो एक छोटा सा प्लग को हटा में बाँझ 200 μL विंदुक टिप नीचे एक ऊपर दबाने से इस निलंबन के लिए एक छेद बनाओ।
    3. पोषक तत्व अगर 20 एमएल मापा मात्रा के साथ अगर प्लेट का प्रयोग करें, और एक संकेतक के जीव, बेसिलस subtilis, जो रिफैम्पिसिन के प्रति संवेदनशील है के साथ एक कपास झाड़ू का उपयोग समान रूप से फैला। एक पोषक तत्व अगर 25 डिग्री सीओ / एन में incubated से बी subtilis प्राप्त करें और कपास झाड़ू का उपयोग कर एक कॉलोनी प्राप्त करने के लिए। 25 डिग्री सेल्सियस पर रात ऊष्मायन के बाद निषेध के एक क्षेत्र अवलोकन मछली ऊतकों में एंटीबायोटिक की उपस्थिति इंगित करता है।

3. Microbiome निष्कर्षण

  1. एक बाँझ 15 एमएल शंक्वाकार 2 एमएल बाँझ PBST (137 मिमी ना के साथ भरा ट्यूब में मछली रखकर बाहरी श्लैष्मिक एपिडर्मिस से एक त्वचा Microbiome नमूना निकालेंसीएल, 10 मिमी फॉस्फेट, 0.1% बीच 20, 7.4 पीएच) समाधान और 10 S रोक वेतन वृद्धि के साथ 1 मिनट के लिए 10 की एक सेटिंग में vortexing। डिटर्जेंट और बफर में नमक के घोल में बैक्टीरिया का भी फैलाव को बढ़ावा देता है। तुलनीय परिणाम 0.85% नमक के साथ मिल गया है लेकिन शुद्ध पानी के साथ बैक्टीरियल मायने रखता उतारा गया।
  2. एक बाल्टी के लिए वसूली शंक्वाकार ट्यूब से मछली स्थानांतरण। त्वचा निकासी की मारक आम तौर पर 10% से भी कम है। या तो, तुरंत निकासी पर ट्यूब में जीवाणु निलंबन का विश्लेषण या भविष्य के विश्लेषण के लिए -80 डिग्री सेल्सियस पर 15,000 XG और दुकान पर कमरे के तापमान पर एक अपकेंद्रित्र में एक 2 मिनट स्पिन से बैक्टीरिया गोली।
    नोट: सभी संस्कृति और जैव रासायनिक विश्लेषण तत्काल रहे हैं; डीएनए या प्रोटीन निकासी जमे हुए नमूनों से हो सकता है।
  3. एक आंत Microbiome नमूना प्राप्त करने के लिए, पहली बार एक बाँझ पेट्री डिश में मछली जगह है। शल्य कैंची के साथ सिर के पीछे सीधे ग्रीवा रीढ़ की हड्डी विच्छेद करके मछली euthanize, pithing द्वारा पीछा किया, और फिर बाहर से 70% इथेनॉल पोंछे के साथ शरीर साफ करता।
  4. विच्छेदन के बाद, घेघा के बाद और गुदा से पहले काटने से पूरे पेट को हटा दें।
  5. छोटे वर्गों में पेट काट 1 - लंबाई में 2 मिमी और एक शंक्वाकार ट्यूब में दो एमएल PBST समाधान में सभी वर्गों जगह है। 1 मिनट के लिए vortexing के बाद, एक और स्वच्छ ट्यूब में सतह पर तैरनेवाला हटाने (सावधानी रखना पेट वर्गों को आकर्षित नहीं)।
    नोट: सतह पर तैरनेवाला निकाले पेट के बैक्टीरिया है कि या तो प्रत्यक्ष विश्लेषण के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है या pelleted पिछले विधि त्वचा के नमूनों के लिए उल्लेख द्वारा होता है।

4. संक्रमण मॉडल तैयार करना और एक विशिष्ट पैथोजन का स्नान

  1. Edwardsiella ictaluri (ई ictaluri) के एक संक्रामक तनाव प्राप्त करें और -80 डिग्री सेल्सियस पर संग्रहीत संस्कृति रहते हैं। तनाव 93 - 146 इस अध्ययन में इस्तेमाल किया, एक संक्रमित कैटफ़िश से अलग-थलग, मार्क लॉरेंस, पशु चिकित्सा कॉलेज, मिसिसिपी स्टेट यूनिवर्सिटी से प्राप्त हुई थी।
  2. streएके ई ictaluri शेयर पर संस्कृति के लिए बैक्टीरिया एक चयनात्मक और अंतर मीडिया ई ictaluri मीडिया (EIM) नामक 19 अगर और 27 डिग्री सेल्सियस पर 2 डी के लिए सेते हैं।
  3. संस्कृति से एक शुद्ध पृथक कॉलोनी स्थानांतरण और पोषक तत्व शोरबा के 40 एमएल युक्त एक 150 एमएल कुप्पी टीका लगाना (नायब; 5 ग्राम / एल peptone, 4 जी / एल बीफ निकालने)। एक प्रकार के बरतन 27 डिग्री सेल्सियस पर 2 डी के लिए 150 rpm पर सेट में रखें कुप्पी।
  4. ऊष्मायन के बाद, वांछित संक्रामक खुराक की मात्रा के लिए ई ictaluri संस्कृति जांच करने के लिए 650 एनएम पर 0.2 ओवर ड्राफ्ट की एक स्पेक्ट्रोमीटर पढ़ने के लिए PBST में संस्कृति का एक नमूना पतला।
  5. अगला स्थानांतरण दोनों का इलाज (के बाद एंटीबायोटिक जोखिम के 3 डी) और मछली ऊतकों से दवा मंजूरी के लिए लगभग 10 घंटे के लिए नए सिरे से कृत्रिम तालाब के पानी की 130 एमएल, या APW युक्त व्यक्ति प्लास्टिक के कप में इलाज मछली समूहों।
  6. तो फिर दोनों समूहों से, फिर 8 औंस प्लास्टिक साफ APW के 130 एमएल युक्त कप में प्रत्येक मछली हस्तांतरण। प्रत्येक मछली 2.8 x 10 6 CFU / APW में ई ictaluri संस्कृति के एमएल (स्नान संक्रमण मॉडल) युक्त एक घातक खुराक देने के लिए और 24 घंटे के लिए एक 27 डिग्री सेल्सियस इनक्यूबेटर में रखने के लिए।
  7. ई ictaluri स्नान के बाद, APW के 130 एमएल के साथ नई कप में व्यक्तिगत रूप से मछली हस्तांतरण।
  8. पानी प्रतिस्थापन, एक सप्ताह की अवधि से अधिक रिकॉर्ड मछली मृत्यु दर के बाद। मछली इस अवधि में नहीं खिलाया जाता है। कैटफ़िश के विपरीत, Gambusia संक्रमण का कोई बाहरी लक्षण दिखाने, इसलिए यह एक प्रायोगिक समापन बिंदु के रूप में मारक का उपयोग करने के लिए आवश्यक है।

5. मल और मिट्टी के साथ polymicrobial चैलेंज

  1. मल उपचार
    1. एक स्वस्थ स्वयंसेवक विषय है जो पिछले दो हफ्तों में एंटीबायोटिक दवाओं प्राप्त नहीं हुआ है, बाँझ दस्ताने और एक बाँझ 50 मिलीलीटर शंक्वाकार ट्यूब का उपयोग करने से ताजा मानव मल प्राप्त करते हैं।
    2. संग्रह करने पर, एक बाँझ प्लास्टिक की थैली में fecal बात इकट्ठा होते हैं और फिर एक बाँझ 15 एमएल सी में स्थानांतरितonical ट्यूब। 800 मिलीग्राम / एमएल - PBST में मल निलंबित 500 के एक शेयर समाधान देने के लिए एक शेयर एकाग्रता बनाएँ। इस मोटी मिश्रण अच्छी 1 एमएल या बड़ा प्लास्टिक विंदुक टिप है कि बाँझ कैंची के साथ नीचे काट दिया गया तो यह है कि उद्घाटन बड़ा है का उपयोग कर हस्तांतरण है।
    3. इलाज और इलाज पर नियंत्रण मछली समूहों की प्रारंभिक एंटीबायोटिक जोखिम के बाद, 130 एमएल की कुल मात्रा के साथ या तो 15 मिलीग्राम / एमएल या 10 मिलीग्राम / एमएल APW में की अंतिम सांद्रता में मल निलंबन युक्त व्यक्ति प्लास्टिक के कप में बाँटें। 25 डिग्री सेल्सियस पर एक मशीन में कप पकड़ो।
    4. पर 2 डी करीब अवलोकन द्वारा मल प्रदर्शन के दौरान रिकॉर्ड मछली मृत्यु दर।
  2. मिट्टी उपचार
    1. अमीर कार्बनिक मिट्टी की ऊपरी परत 2 किलो (सबसे अधिक घनत्व और रोगाणुओं की विविधता को शामिल करना चाहिए) लगभग 7 - - 1 लीजिए 15 सेमी नीचे गहराई में और एक साफ प्लास्टिक कंटेनर में रखें। ध्यान दें कि मिट्टी संग्रह के बाद दो दिनों के भीतर किया जाना चाहिए।
    2. भयानकctly प्रारंभिक निवेश की अवधि के बाद, APW के 130 एमएल में मिट्टी के 18.2 ग्राम युक्त व्यक्ति प्लास्टिक के कप में एंटीबायोटिक और इलाज मछली के दोनों समूहों को अलग। मछली जोड़ने से पहले हाथ से पानी में अच्छी तरह से मिट्टी के मिश्रण। विविक्त में से अधिकांश को निरस्त करने और कप के तल पर नहीं रहते।
    3. 25 डिग्री सेल्सियस पर 3 डी की अवधि के लिए मछली का पर्दाफाश करने और किसी भी मृत्यु दर रिकॉर्ड है।

6. आसमाटिक तनाव चैलेंज

  1. जैसा कि ऊपर वर्णित एक 10 घंटे बाकी अवधि के बाद उपचार के बाद, APW के 150 एमएल में 17.5 मिलीग्राम / एमएल (300 मिमी) में सोडियम क्लोराइड युक्त अलग कप में मछली विशिष्ट। यह समुद्री जल का खारापन ठेठ है, जो पूरी तरह से घातक नहीं है (<50%) मछली को नियंत्रित करने का आधा है लेकिन दृढ़ता से तनावपूर्ण है, प्रभावी osmoregulation की जरूरत पड़ेगी।
  2. 36 घंटा की अवधि से अधिक मछली मृत्यु दर के लिए निरीक्षण करें।

7. नाइट्रेट विषाक्तता चैलेंज

  1. एंटीबायोटिक Expos के बाद एक 10 घंटे की अवधि के लिए रेस्ट मछलीUre, और व्यक्ति की एक सोडियम नाइट्रेट एकाग्रता युक्त कप में तो अलग मछली या तो 10 मिलीग्राम / एमएल (118 मिमी) या APW के 130 एमएल में 17.5 मिलीग्राम / एमएल (206 मिमी)।
  2. के लिए कम खुराक के लिए डी और 1 उच्च खुराक के लिए डी मृत्यु दर 4 से अधिक रिकॉर्ड।

8. व्यक्तिगत या बांटा मछली के विकास विश्लेषण

  1. बाल्टी में समूहों के रूप में पूर्ण 3 डी एंटीबायोटिक जोखिम या नियंत्रण अवधि।
  2. व्यक्ति के लिए, 150 एमएल APW प्रत्येक के साथ 8-आस्ट्रेलिया स्टायरोफोम कप को भरने के कप में एक व्यक्ति मछली हस्तांतरण और प्रारंभिक आकलन के लिए शरीर के कुल वजन का रिकॉर्ड है।
    1. दोनों और इलाज समूहों में सभी मछली के लिए दोहराएँ। स्पष्ट प्लास्टिक के कप के बजाय सफेद स्टायरोफोम कप का प्रयोग करें क्योंकि मछली जब स्पष्ट कप में खाने के लिए नहीं होगा।
  3. मछली दैनिक फ़ीड मछली प्रति दो छर्रों का मानक आहार के साथ। हिमपात के गुच्छे के बजाय इस्तेमाल किया गया क्योंकि छर्रों व्यक्ति मास में कम विचरण (3.53 ± 0.42 मिलीग्राम प्रत्येक, या 8% रूपांतर), resultin हैमछली में जी भोजन की समान मात्रा में प्राप्त करने। नेत्रहीन uneaten छर्रों की रिकॉर्डिंग के द्वारा खपत की निगरानी। खपत की दर 80% से अधिक आम तौर पर थे।
  4. 4 हफ्तों में प्रत्येक सप्ताह के अंत में, मछली वजन का निर्धारण। ताजा APW के साथ एक नया कप की तैयारी के लिए एक संतुलन पर जगह है, और फिर वजन रिकॉर्ड। फिर, मूल कप से एक डुबकी जाल में एक मछली डालो और नए कप है, जो उसके बाद फिर से तौला जाता है में स्थानांतरित। मछली तनाव से बचने के लिए संभाला नहीं कर रहे हैं।
  5. समूह के लिए, एक 19 एल बाल्टी में जगह APW के 2 एल और बड़े पैमाने मरोड़ा। जब नए APW बाल्टी में स्थानांतरित तो कुल समूह वजन रिकॉर्ड दोनों समूहों में एक साथ मछली रखें। रिकॉर्ड मछली समूह वजन एक नया बाल्टी के लिए स्थानांतरित करने से एक महीने के समय अंतराल पर प्रत्येक सप्ताह।

9. आंत पारगमन समय

  1. fluorescein लेबल 70 केडीए anionic dextran का प्रयोग करें। Dextran काफी पचता नहीं है, और बहुत बड़ी आंत परत भर में अवशोषित किया जा रहा है, इस प्रकार के पारित होने के पेट के माध्यम से पारगमन समय उपाय करेंगे।लेबल dextran मछली भोजन में शामिल किया गया था।
  2. एक बाँझ 1.7 मिलीलीटर ट्यूब में, जिलेटिन पिघला देता है जब तक एक 60 डिग्री सेल्सियस गर्मी ब्लॉक पर बाँझ विआयनीकृत पानी के 360 μL और (13% समाधान) जिलेटिन की 52 मिलीग्राम जोड़ने के लिए, और जगह ट्यूब और पूरी तरह से भंग कर रहा है।
    1. एक ठीक पाउडर के लिए पीस सुनहरी भोजन गुच्छे एक मोर्टार और मूसल, और ट्यूब को यह पाउडर के 40 मिलीग्राम जोड़ने के लिए, मछली के तेल के 20 μL के साथ उपयोग कर। मिश्रण के बाद, FITC-dextran के 1.6 मिलीग्राम जोड़ें।
  3. गर्म तरल मिश्रण 20 में μL प्रयोगशाला बेंच पर Parafilm पर बूँदें बांटना, और उन्हें जल्दी शांत और जमना। बूंदों के लिए अप करने के लिए 4 डी संग्रहित किया जा सकता से पहले वे भी मुश्किल मछली खाने के लिए हो गया है। स्टोर एक पेट्री डिश है, जो तब एक मोहरबंद प्लास्टिक कंटेनर, जो बूंदों humidified रहता अंदर बाँझ पानी पर जारी है के आधे पर Parafilm रखकर फ्रिज में चला जाता है।
  4. बस खिलाने से पहले, तिमाही एक रेजर ब्लेड का उपयोग कर वर्गों में चला जाता है। Styro के लिए मछली acclimateफोम कप 2 दिनों के लिए व्यक्तिगत रूप से बिना खिला (नोट: केवल unexposed नियंत्रण मछली इस्तेमाल किया गया)। भोजन के चार तिमाहियों मछली के साथ कप में जगह है, और वे खाना खाने के प्रत्येक के कितने टुकड़े के लिए 30 मिनट के लिए मछली पालन।
  5. निगरानी की अवधि शुरू करने के लिए, APW के 80 एमएल एक डुबकी नेट का उपयोग के साथ कप में व्यक्तिगत रूप से मछली हस्तांतरण। हर 2 घंटे, धीरे हाथ से APW चक्कर आने, और फिर 4 डिग्री सेल्सियस पर एक लेबल 1.7 एमएल ट्यूब में एक 1 एमएल नमूना और दुकान ले। 36 घंटे के लिए नमूने ले लो।
  6. रिकार्ड प्रतिदीप्ति, एक ही समय में एक प्रतिदीप्ति स्पेक्ट्रोफोटोमीटर परख के पूरा होने के बाद सभी नमूनों के साथ। पूरे 1 एमएल नमूना एक क्युवेट में रखें, और प्रतिदीप्ति 520 एनएम पर 495 एनएम पर उत्तेजना और उत्सर्जन का उपयोग करके मापा रिकॉर्ड है।

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Representative Results

प्रयोगात्मक एंटीबायोटिक जोखिम 13 से मछली मेजबान प्रभाव का अध्ययन करने के लिए इस्तेमाल किया प्रणाली का एक समग्र योजनाबद्ध आरेख चित्रा 1 ए में प्रतिनिधित्व किया है और मछली से त्वचा (चित्रा 1 बी) और पेट (चित्रा 1 सी) microbiomes निकालने के लिए तकनीक भी शामिल है। क्योंकि पिछले आंकड़ों से पता चलता है कि कुल कृषि योग्य त्वचा नंबर इलाज में जल्दी बूँदें है, यह बाद 3 डी पूर्व उपचार के स्तर के लिए वापस आ गया है तीन दिनों के प्रदर्शन के एंटीबायोटिक अवधि के रूप में चयनित किया गया था। इस बीच, सामुदायिक संरचना, के रूप -16 की रूपरेखा द्वारा निर्धारित है, दृढ़ता से बदल दिया गया है। इसलिए, 3 दिन की अवधि में लगभग एक ही घनत्व की एक बदले हुए समुदाय से प्रभाव का विश्लेषण करने के लिए इष्टतम होना चाहिए। ध्यान दें कि संस्कृति विश्लेषण, अगर प्लेटों पर कॉलोनी नंबर का उपयोग कर, प्रजातियों में से एक नंबर के बाहर छोड़ सकते हैं। त्वचा Microbiome फैलाव विधि की दक्षता (चित्रा 1 बी 5 CFU / छ मछली वजन) एक ही निलंबन प्रक्रिया के अधीन कई मछली से कॉलोनी नंबर के लिए एक दूसरी बार (किसी भी शेष मात्रा ठहराना - रोंग>) निलंबन बफर (आमतौर पर 10 4 की रेंज में से प्लेटों पर कॉलोनी संख्या की तुलना द्वारा विश्लेषण किया गया था बैक्टीरिया)। इस दूसरे निलंबन से मायने रखता 100 से कम CFU / छ थे, सुझाव निलंबन विधि प्रभावी (अप्रकाशित) है।

एक एंटीबायोटिक-बदल Microbiome के साथ मछली नियंत्रण मछली (चित्रा 2) की तुलना में एक ई ictaluri संक्रमण के लिए अतिसंवेदनशील हो दिखाई दिया। इलाज किया मछली के लिए 56.1 ± 15 h और नियंत्रण मछली के लिए 98.5 ± 48 घंटे की मौत के लिए मतलब समय में अंतर सांख्यिकीय महत्वपूर्ण (दो पूंछ छात्र के टी परीक्षण, पी = 0.12) नहीं था। इस छोटे से समूह आकार की वजह से होने की संभावना है (इलाज एन = 6, नियंत्रण एन = 5)। कम से कम एक दर्जन से अधिक के समूह आकार इसलिए सिफारिश कर रहे हैं। इस संक्रमण के मॉडल का एक लाभ यह है खएथलीट प्रोटोकॉल है, जो संक्रमण या भोजन का सेवन की ट्रैकिंग के लिए सुइयों की आवश्यकता नहीं है। ई ictaluri स्वाभाविक रूप से पानी स्तंभ से कैटफ़िश पर हमला। सुरक्षा अधिक है क्योंकि ई ictaluri तापमान संवेदनशील है, और इस तरह खराब मनुष्य के लिए संक्रामक। अन्य अध्ययनों से पता चला है कि जी एफिनिस में मौत के लिए समय बैक्टीरिया की प्रारंभिक खुराक के साथ संबद्ध है। 27 डिग्री सेल्सियस के तापमान ऊष्मायन दोनों बैक्टीरिया और मछली के लिए इष्टतम के रूप में चयनित किया गया था।

इलाज या नियंत्रण मछली मिश्रित रोगाणुओं के उच्च गिनती के साथ दूषित पानी में अस्तित्व में महत्वपूर्ण मतभेद नहीं था। कोई मृत्यु दर पर नियंत्रण के लिए 4 दिनों में मनाया गया (एन = 8) या इलाज (एन = 9) मछली जब मिट्टी माइक्रोबियल स्रोत के रूप में इस्तेमाल किया गया था। कुछ मृत्यु दर रोगाणुओं (तालिका 1) के स्रोत के रूप में मानव मल के साथ होती थी, वहीं एंटीबायोटिक उपचार कोई फर्क नहीं बनाया। 50% - APW में मल की एकाग्रता 20 मिलीग्राम / एमएल, 40 पर थामछलियों की मौत हो गई। हालांकि, भंग ऑक्सीजन एकाग्रता केवल 10% (बाल्टी या एक्वेरियम में> 80% की तुलना में) था, इस प्रकार की कमी वाली स्थिति व्याख्या को चकित कर दिया। जब 16 या 10 मिलीग्राम निचले स्तर / एमएल इस्तेमाल किया गया, जीवित रहने की दरों मिलान किया गया (दो तरफा फिशर सटीक परीक्षण, पी = 0.95 या समूहों के बीच एक अंतर के लिए अधिक से अधिक)। इन दो परीक्षणों में घुलित ऑक्सीजन का स्तर 65% या उससे ऊपर थे। Gambusia एक बहुत साहसी आक्रामक प्रजातियों कि कम गुणवत्ता वाले पानी में रह सकते हैं। यह दूषित पानी की एक चुनौती के खिलाफ अन्य प्रजातियों के अस्तित्व को मापने के लिए प्राकृतिक माइक्रोबियल जोखिम के इन assays का उपयोग करने के लिए दिलचस्प होगा। विशिष्ट पर्यावरण साइटों, विशेष रूप से उन eutrophication के अधीन है, इसी तरह की एक परख में इस्तेमाल किया जा सकता से पानी के नमूने, हालांकि पानी की गुणवत्ता (भंग 2 हे, नाइट्रेट, लवणता, आदि।) की आवश्यकता होगी एक संभावित confounding कारक के रूप में, निर्धारित किया जाना है।

मछली ईरिफैम्पिसिन को Xposed नियंत्रण मछली (चित्रा 3) की तुलना में आसमाटिक तनाव के लिए अतिसंवेदनशील थे। लॉग-रैंक परीक्षण जीवित रहने की दर में एक महत्वपूर्ण अंतर (पी = 0.049) मनाया (नियंत्रण समूह और इलाज समूह में 88% मृत्यु में 43% की मौत, एन = दोनों समूहों के लिए 9) जब ऊंचा लवणता के साथ चुनौती दी। इस परख से परिणाम जी के साथ एफिनिस मीठे पानी में 20 से 24 घंटे में सोडियम क्लोराइड के लिए नियंत्रण रेखा के रूप में 50 18.1 मिलीग्राम / एमएल के एक संकल्प के साथ सहमति व्यक्त की। खारा तनाव के लक्षण मछली प्रदर्शनी गहरे नाले के आसपास लाल होना शामिल हैं और आंदोलन तैराकी में कमी आई है। इस परख के साथ, 18 मिलीग्राम से ऊपर लवणता का स्तर / एमएल तेजी से मछली मौत हो गई।

जब पानी कॉलम में विष नाइट्रेट से अवगत कराया, एंटीबायोटिक के लिए पूर्व-प्रदर्शन को प्रभावित नहीं किया अस्तित्व (तालिका 2)। प्रत्येक परीक्षण के लिए, मृत्यु दोनों एक छोटी और लंबी समय बिंदु पर दर्ज किया गया था, तीव्र और अधिक पुरानी प्रभाव को दर्शाता है। एकाग्रचित्त होना10 मिलीग्राम / एमएल यह 48 घंटे 21 में मीठे पानी में जी एफिनिस के लिए एलडी 50 किया जा रहा है के आधार पर चुना गया था। इस परख के परिणाम से, इस एलडी 50 मूल्य के साथ संगत कर रहे थे 90 घंटे के बाद दोनों का इलाज किया और नियंत्रण समूहों में 50% की मारक साथ। नाइट्रेट के एक उच्च चुनौती (17.5 मिलीग्राम / एमएल) ने भी जांच की गई थी, और अधिक तेजी से मृत्यु के लिए अग्रणी। फिर वहाँ उपचार समूहों में अंतर नहीं था। नाइट्राइट 0.0015 मिलीग्राम / एमएल के एक एलडी 50 48 घंटे 22 में से जी एफिनिस नाइट्रेट की तुलना में नाटकीय रूप से अधिक विषैला होता है। सामुदायिक जैव रासायनिक विश्लेषणात्मक प्रोफ़ाइल सूचकांक प्रणाली (अप्रकाशित) का उपयोग विश्लेषण से पता चलता मछली त्वचा माइक्रोबायोटा संभावित नाइट्रेट को कम करने के लिए किया है। हालांकि, दोनों परीक्षणों के दौरान APW में नाइट्राइट का स्तर पता लगाने सीमा (0.001 मिलीग्राम / एमएल) से नीचे बनी रही। यह चुनौती विधि किसी भी छोटे घुलनशील रसायनों के साथ इस्तेमाल किया जा सकता है।

जब कप और फेड टी में individualizedवह एक महीने के लिए प्रत्येक मछली के लिए एक ही राशि, एक प्रवृत्ति वजन के रूप में अच्छी तरह से नियंत्रण मछली हासिल नहीं एक सांख्यिकीय महत्वपूर्ण अंतर के बिना, के लिए एंटीबायोटिक का इलाज मछली के लिए मनाया गया (डेटा) नहीं दिखाया। वैयक्तिकरण के तनाव से बचने के लिए, मछली एक महीने के लिए बाल्टी में और इलाज मछली के लिए एक समूह के रूप में एक साथ रखे और भोजन के लिए मिलान मात्रा में दिए गए थे। इस सेटअप की सीमा यह है कि मछली एक व्यक्तिगत आधार पर ही भोजन प्राप्त नहीं किया जा सकता है। हालांकि, समूह मॉडल में, मछली औसत खो वजन और नियंत्रण मछली पर औसत फायदा हुआ वजन (3 टेबल) पर इलाज किया। खाद्य मछली उपभोग कर रहे थे की राशि से पहले एंटीबायोटिक जोखिम से प्रभावित होने लगते नहीं था, इसलिए भूख दमन वजन की कमी के लिए एक अप्रत्याशित उम्मीदवार व्याख्या है। कई अन्य कारकों के पेट में सूजन में परिवर्तन, बलगम उत्पादन का स्तर, पेट पारगम्यता, और / या पेट गतिशीलता सहित योगदान कर सके। इस परख का एक प्रमुख लाभ nutriti को मापने के लिएonal प्रभाव सादगी है। यह सस्ती है, और केवल इंस्ट्रूमेंटेशन के रूप में एक प्रयोगशाला संतुलन की आवश्यकता है। यह एक प्रभाव के लिए स्क्रीन करने के लिए अन्य शामिल प्रयोग करने के लिए अग्रणी तंत्र निर्धारित करने के लिए उपयुक्त है।

एक उदाहरण के कारक मछली वजन बढ़ाने के लिए संबंधित जांच के लिए खाद्य पारगमन समय है, जो गतिशीलता आंत से संबंधित है। FITC लेबल dextran gelatinized भोजन में शामिल किया जा सकता है और मछली के लिए nonlethal है। आसपास के पानी में मापने प्रतिदीप्ति समय के साथ कितनी तेजी से FITC-dextran पेट से गुजर रहा है की एक माप देता है। एक अधिकतम के साथ 16 घंटे के बाद खिला (चित्रा 4) के बाद तक पहुँच पृष्ठभूमि के ऊपर प्रतिदीप्ति, के रूप में जल्द ही 2 घंटे के रूप में पता लगाया जा सकता है। इस परिणाम के एक मछलीघर से नियंत्रण मछली के साथ है। एंटीबायोटिक का इलाज मछली से विश्वसनीय परिणाम अभी तक प्राप्त नहीं की है। इस प्रक्रिया की एक सीमा है कि मछली खाने के लिए भोजन के लिए एक 2-डी भुखमरी अवधि की आवश्यकता है। एक adv प्रोटोकॉल के antage, मछली खाने के लिए केवल एक खाद्य अनुभाग परिणाम दे सकते हैं के रूप में उच्च संवेदनशीलता (कम पृष्ठभूमि प्रतिदीप्ति) है, हालांकि डेटा और अधिक सुसंगत है जब दो वर्गों में खाया जाता है। इस प्रोटोकॉल चूहों 23 के लिए इसी तरह की एक और घातक विधि की तुलना में कम जटिल है।

आकृति 1
चित्रा 1: आम प्रयोगात्मक प्रोटोकॉल के योजनाबद्ध अवलोकन। एक एक प्रवाह चार्ट illustrating, ठीक है, मछली मछलीघर टैंक से स्थानांतरित, एंटीबायोटिक का इलाज (लाल पानी का प्रतिनिधित्व) या नियंत्रण (नीला) के समूहों में विभाजित है, और फिर phenotypes ट्रैक करने के लिए व्यक्तिगत कप में रखा करने के लिए छोड़ दिया है। बी और सी मछली त्वचा और पेट microbiomes निकालने की प्रक्रिया को दर्शाती है। vortexing के बाद, बैक्टीरिया माइक्रोबियल समुदाय के विश्लेषण के लिए समाधान में निलंबित कर दिया है।55,170 / 55170fig1large.jpg "लक्ष्य =" _blank "> यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

चित्र 2
चित्रा 2: पैथोजन संवेदनशीलता। मछली के लिए ई ictaluri को प्रदर्शन के दौरान एक अस्तित्व वक्र रिफैम्पिसिन (लाल रेखा) या एक अनुपचारित नियंत्रण समूह (काला लाइन) मछली के साथ पूर्व इलाज। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

चित्र तीन
चित्रा 3: आसमाटिक तनाव के लिए संवेदनशीलता। दोनों एंटीबायोटिक और इलाज समूहों में मछली के लिए उच्च लवणता को प्रदर्शन के दौरान एक अस्तित्व की अवस्था। मिसालएएसई यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

चित्रा 4
चित्रा 4: खाद्य पारगमन समय। दो मछली से पानी में समय पर प्रतिदीप्ति FITC-dextran खिलाया। मछली एक दो जिलेटिन खाद्य वर्गों खाया और मछली बी एक खा लिया। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

तालिका एक
तालिका 1: उच्च माइक्रोबियल वातावरण के लिए संवेदनशीलता। मानव मल बात के संपर्क में 3 अलग सांद्रता में मूल्यांकन किया गया था। एक्स की मौत अनुपात: y एक्स प्रयोगात्मक समूह y में मछली की कुल संख्या की तुलना में संकेत समय बिंदु पर मछली मृतकों की कुल संख्या से पता चलता है।


तालिका 2: नाइट्रेट विषाक्तता चैलेंज। एक जहरीले नाइट्रेट एकाग्रता के लिए जोखिम भर इलाज और नियंत्रण समूहों में मछली मृत्यु के समय दर्ज की गई। एक्स की मौत अनुपात: y एक्स प्रयोगात्मक समूह y में मछली की कुल संख्या की तुलना में संकेत समय बिंदु पर मछली मृतकों की कुल संख्या से पता चलता है।

टेबल तीन
तालिका 3: विकास विश्लेषण। एंटीबायोटिक या नियंत्रण इलाज के बाद एक महीने के बाद शरीर के कुल वजन में परिवर्तन। प्रारंभिक मतलब शरीर के वजन में अंतर प्रतिशत अंतिम मतलब शरीर के वजन की तुलना में (जो परीक्षण समूह में मछली के लिए) स्तंभ Δweight है। एन उस समूह में मछली की संख्या है। परीक्षण के अंत में मछली प्रति मतलब वजन कम वजन / मछली है।

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Discussion

कुछ चुनौतियों एंटीबायोटिक उपचार के लिए दवा मछली ऊतकों में समाप्त होने के बाद साफ APW में एक आराम की अवधि की आवश्यकता होती है। बाकी अवधि को छोड़ दिया जाता है, तो एंटीबायोटिक उपस्थिति परिणाम उलझाना सकता है, खासकर जब परख बैक्टीरिया के लिए जोखिम शामिल है। आदेश एंटीबायोटिक प्रदर्शन के दौरान मेजबान, प्रारंभिक प्रयोगों निगरानी Microbiome रचना (-16 की रूपरेखा या पूरे जीनोम अनुक्रमण) और जनसंख्या घनत्व (qPCR के माध्यम से -16 quantitation) पर रोगाणुओं की कुल संख्या में बड़े बदलाव के बिना एक बदल Microbiome रचना से प्रभाव की जांच करने के लिए किया जाएगा की आवश्यकता है। जबकि 3 डी इस प्रणाली में इष्टतम है, मेजबान बदल रहा है और / या एंटीबायोटिक recalibration की आवश्यकता होगी।

जैव चिकित्सा अनुसंधान के विशिष्ट, माउस मॉडल सामान्यतः Microbiome अध्ययन के लिए उपयोग किया जाता है। सबसे आम मछली मॉडल zebrafish है। आदेश में संरचना और श्लैष्मिक microb के समारोह के सार्वभौमिक गुणों का एक बेहतर समझ पाने के लिएiomes और मेजबान बातचीत, नए और असामान्य मॉडल एक जरूरत हैं। हमारे गुम्मट मछली मॉडल प्रयोगशाला उठाया पशु प्रजनन 24 की पीढ़ियों के कारण प्राकृतिक मेजबान आनुवंशिक परिवर्तनशीलता कि अन्य मॉडलों को खो दिया है शामिल करके मेजबान Microbiome बातचीत के अध्ययन के लिए एक प्रामाणिक स्रोत के रूप में कार्य करता है। Gambusia का एक प्रमुख प्रयोगात्मक लाभ उनकी हार्डी प्रकृति, स्थितियों की एक विस्तृत श्रृंखला बर्दाश्त है। उच्च जीवित रहने की दरों पानी है कि तापमान में बदलता में देखा गया है (4 - 38 डिग्री सेल्सियस), लवणता (0 - 17 मिलीग्राम / एमएल), भंग ऑक्सीजन (110 - 25%), और पीएच (4 - 8)। यह केवल कई पर्यावरण की स्थिति, लेकिन यह भी बहु कदम प्रयोगात्मक प्रक्रियाओं है कि अक्सर अन्य मछली प्रजातियों के लिए भी तनावपूर्ण रहे हैं के लिए की जांच नहीं की अनुमति देता है।

यहाँ प्रस्तुत प्रक्रियाओं के लिए एक विशेष उपचार से मेजबान प्रभाव की खोज करने के लिए तेजी से जांच के लिए उपयुक्त हैं। अनुवर्ती अध्ययन प्रत्यक्ष करणीय और तंत्र का निर्धारण करने के लिए आवश्यक हैं। उदाहरण विस्तार Studiमछली Microbiome मेजबान प्रभाव के लिए तों शामिल हैं: आंतों में सूजन, मोटी दुकानों बढ़ाता द्वारा मछली स्वास्थ्य की जांच, और त्वचा पर और पेट में बलगम के स्तर की माप को मापने। एक gnotobiotic प्रणाली विशेष मेजबान phenotypes के लिए विशिष्ट रोगाणुओं के विस्तार के संबंध में अध्ययन करने के लिए विकसित किया जा रहा है।

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Materials

Name Company Catalog Number Comments
Rifampicin Calbiochem 557303-1GM
Sodium Nitrate Sigma Aldrich S5506
Fluorescein-labeled 70 kDa anionic dextran ThermoFisher Scientific D1823
Phosphate-buffered Saline (PBS) tablets Calbiochem 6500-OP tablets dissolve in water to make PBS

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