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Vivo में Multimodal इमेजिंग और माउस लेजर प्रेरित धमनियां Neovascularization मॉडल का विश्लेषण

Neuroscience

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Summary

यहाँ, हम चूहों में लेजर प्रेरित धमनियां neovascularization के रूपात्मक परिवर्तन के अनुवर्ती में vivo इमेजिंग में अनुदैर्ध्य की उपयोगिता प्रस्तुत करते हैं ।

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Ragauskas, S., Kielczewski, E., Vance, J., Kaja, S., Kalesnykas, G. In Vivo Multimodal Imaging and Analysis of Mouse Laser-Induced Choroidal Neovascularization Model. J. Vis. Exp. (131), e56173, doi:10.3791/56173 (2018).

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Abstract

लेजर प्रेरित धमनियां neovascularization (CNV) उंर से संबंधित धब्बेदार अध (AMD) के गीले फार्म की नकल करने के लिए एक अच्छी तरह से स्थापित मॉडल है । इस प्रोटोकॉल में, हम neovascular प्रक्रियाओं को ट्रिगर करने के लिए लेजर प्रेरित घावों पैदा करने के तकनीकी विचार के माध्यम से नहीं बस पाठक गाइड करने के लिए लक्ष्य है, बल्कि multimodal अनुदैर्ध्य से प्राप्त किया जा सकता है कि शक्तिशाली जानकारी पर ध्यान केंद्रित है कि अनुवर्ती अवधि के दौरान vivo इमेजिंग में ।

लेजर प्रेरित माउस CNV मॉडल एक डायोड लेजर प्रशासन द्वारा उत्पंन किया गया था । vivo इमेजिंग तकनीक में Multimodal CNV प्रेरण, प्रगति और प्रतिगमन पर नजर रखने के लिए इस्तेमाल किया गया । सबसे पहले, वर्णक्रमीय डोमेन ऑप्टिकल जुटना टोमोग्राफी (एसडी-OCT) तुरंत लेजरिंग के बाद Bruch की झिल्ली के एक तोड़ सत्यापित करने के लिए किया गया था । fluorescein एंजियोग्राफी (एफए) का उपयोग कर vivo इमेजिंग में बाद में धमनियां स्तर पर अधिग्रहीत धारावाहिक छवियों से Bruch की झिल्ली की सफल क्षति की पुष्टि की । अनुदैर्ध्य अनुवर्ती CNV प्रसार और प्रतिगमन के 5 दिनों, 10, और 14 के बाद लेजरिंग दोनों एसडी-अक्टूबर और एफए का उपयोग कर प्रदर्शन किया गया था । एफए छवियों से टपका हुआ CNV पट्टे की सरल और विश्वसनीय ग्रेडिंग प्रस्तुत की है । कुल रेटिना मोटाई के माप के लिए स्वचालित विभाजन, CNV साइटों पर रेटिना मोटाई की माप के लिए मैनुअल कैलिबर आवेदन के साथ संयुक्त, शोफ की उपस्थिति के निष्पक्ष मूल्यांकन की अनुमति. अंत में, CNV के ऊतकीय सत्यापन isolectin जीएस-IB4 धमनियां flatmounts पर दाग का उपयोग किया जाता है । धुंधलान थ्रेशोल्ड है, और isolectin-धनात्मक क्षेत्र ImageJ के साथ परिकलित की जाती है ।

यह प्रोटोकॉल विशेष रूप से CNV विकृति विज्ञान के उच्च प्रवाह की तरह स्क्रीनिंग की आवश्यकता के लिए चिकित्सकीय अध्ययन में उपयोगी है, के रूप में यह तेजी से, multimodal, और CNV विकृति और रेटिना शोफ के विश्वसनीय वर्गीकरण की अनुमति देता है । इसके अलावा, उच्च संकल्प एसडी OCT, इस तरह के उपरेटिना या intraretinal द्रव के संचय के रूप में अन्य रोग की पहचान की रिकॉर्डिंग में सक्षम बनाता है । हालांकि, इस विधि के लिए एक संभावना प्रदान नहीं करता है CNV मात्रा विश्लेषण को स्वचालित से एसडी-OCT छवियां, जो मैंयुअल रूप से किया जा करने के लिए है ।

Introduction

पहली सफल करने के लिए कुतर में मानव CNV की विकृति की नकल करने का प्रयास लगभग तीन दशक पहले लंबे समय से इवांस चूहों1में एक क्रीप्टोण लेजर के साथ प्रदर्शन किया गया था । इसके बाद, एक क्रीप्टोण लेजर सबसे लोकप्रिय माउस तनाव, C57BL/6J2,3,4में Bruch की झिल्ली को तोड़ने के लिए इस्तेमाल किया गया था । CNV प्रेरण की सफलता की दर एफए और ऊतकीय दाग के साथ सत्यापित किया गया था । ऐसी OCT के रूप में इनवेसिव इमेजिंग विधियों, के एक तेजी से विकास, कुतर नैदानिक मॉडल के क्षेत्र के विकास को बढ़ावा । एक ही आंख में कई समय बिंदुओं पर रेटिना में रूपात्मक परिवर्तन की निगरानी करने की क्षमता काफी पशु उपयोग की कमी के लिए योगदान देता है, और प्रयोगात्मक अध्ययन में दक्षता बढ़ जाती है. CNV घावों के ऊतकीय मूल्यांकन बल्कि सीधा है, और लेजर प्रशासन, छवि अधिग्रहण की साइट के आसपास असामान्य संवहनी विकास के लेबल की आवश्यकता है, और एक छवि विश्लेषण सॉफ्टवेयर का उपयोग कर क्षेत्र/ इसके विपरीत, vivo में इमेजिंग मोडलों CNV विकृति और इसकी व्याख्या के और अधिक जटिल विश्लेषण परिचय ।

यहां हम ग्रेड प्रेरण, प्रगति के लिए एक सरल और अपेक्षाकृत तेजी से विधि वर्तमान, और CNV के प्रतिगमन एफए का उपयोग कर, एसडी अक्टूबर, और माउस लेजर प्रेरित CNV मॉडल में स्वचालित विभाजन विधि ।

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Protocol

सभी जानवरों नेत्र और दृष्टि अनुसंधान में पशुओं के उपयोग के लिए ARVO बयान के अनुसार इलाज किया गया और चुनाव आयोग के निर्देश 86/609/EEC पशु प्रयोगों के लिए, प्रोटोकॉल का उपयोग अनुमोदित और फिनलैंड के पशु प्रयोग बोर्ड द्वारा निगरानी की ।

1. लेजर प्रेरित माउस CNV मॉडल 5

  1. किसी भी विषमता के लिए पशु macroscopically की आंखों का निरीक्षण करे ।
  2. माउस तौलना ।
  3. गणना और निश्चेतक का एक उचित राशि का उपयोग करने के लिए तैयार, पशु के वजन के आधार पर, medetomidine (1 मिलीग्राम/किग्रा), ketamine (७५ मिलीग्राम/किग्रा), और आसुत जल (०.९% NaCl समाधान) के अनुपात में 1:1.5:2.5, या ketamine (40-75 मिलीग्राम/किग्रा) का एक मिश्रण उदा xylazine (5 मिलीग्राम/kg), और आसुत जल (०.९% NaCl समाधान) 1 के अनुपात में: 2.5:1; एक 20 जी माउस के लिए, मिश्रण के ०.१ मिलीलीटर सुई ।
  4. सुई संवेदनाहारी intraperitoneally.
  5. जगह माउस पिंजरे में वापस और जब तक पशु anesthetized है रुको । पुष्टि माउस ठीक से एक पेडल पलटा की कमी से anesthetized है ।
  6. लेजर सुरक्षा व्यक्तिगत सुरक्षात्मक उपकरणों के उपयोग को सुनिश्चित करें ।
  7. एक भट्ठा लैंप और एक ५३२ एनएम डायोड लेजर पर बारी ।
  8. पिंजरे और हीटिंग पैड पर जगह से माउस को हटा दें ।
  9. pupillary फैलाव के लिए Tropicamide की एक बूंद लागू करें । पूर्ण (3 मिमी) pupillary फैलाव के लिए 3-5 मिनट के लिए रुको ।
  10. भट्ठा दीपक के मंच पर माउस रखें ।
  11. एक coverslip पर opthalmic तरल जेल की एक बूंद कॉर्निया applanate करने के लिए जगह है ।
  12. ओरिएंट केंद्र में ऑप्टिक तंत्रिका सिर के साथ माउस आंख ।
  13. लेजर पावर सेट करने के लिए १०० मेगावाट, अवधि के लिए १०० ms, और स्थान आकार के लिए ५० µm.
  14. रेटिना वर्णक उपकला (RPE) पर लेजर बीम ध्यान केंद्रित.
  15. एक आंख में तीन लेजर शॉट्स आदर्श रूप से 4, 8, और 12 बजे ऑप्टिक तंत्रिका, क्रमशः के आसपास की स्थिति में रेटिना रक्त वाहिकाओं से बचने के द्वारा बनाओ । रेटिना रक्तस्राव के अभाव के लिए सभी लेजर शॉट्स के बाद आंख के fundus का निरीक्षण । contralateral आंख एक गैर लेजर नियंत्रण के रूप में कार्य करता है ।
  16. coverslip और जगह माउस हीटिंग पैड पर वापस त्यागें ।
  17. दोनों आंखों पर खूंटी जेल बूंदों की एक बूंद लागू करें ।

2. SD-OCT 6,7

  1. माउस को कुतर संरेखण अवस्था में रखें, और सिर को स्थिर करें ।
  2. एसडी-OCT सिस्टम के लेंस को संरेखित करें (उदा., Bioptigen/Leica Envisu R2200) X-और Y-चरण नियंत्रकों का उपयोग करके vivo इमेजिंग के लिए आंख का सामना करने के लिए ।
  3. Bruch की झिल्ली के टूट सत्यापित करने के लिए एसडी-oct स्कैन करें: एक बार sd-oct पूरी आंखों को स्कैन करता है, मैंयुअल रूप से लेजर साइटों पर संदर्भ लाइन ले जाएं । Bruch की झिल्ली के टूटता लेजर क्षेत्रों में स्पष्ट रूप से दिखाई जानी चाहिए ( चित्र 1देखें) ।

3. Fluorescein एंजियोग्राफी 7,8,9

  1. धारक के साथ माउस निकालें, और एफए प्रणाली पर जगह (उदा, हीडलबर्ग Spectralis HRA2) ।
  2. आंख के fundus के लेजर जला क्षेत्रों पर ध्यान केंद्रित देखने की खिड़की के बीच में ऑप्टिक तंत्रिका के सिर के साथ अवरक्त चिंतनशील मोड का उपयोग कर ।
  3. एक 20 जी माउस के लिए 5% fluorescein सोडियम नमक की ०.१ मिलीलीटर चमड़े के नीचे या intraperitoneally सुई ।
  4. धमनियां स्तर पर ध्यान दें ।
  5. धमनियां फोकस स्तर से एक छवि ले लो ।
  6. रेटिना के स्तर पर फिर से ध्यान केंद्रित करने और एक छवि ले.
  7. 30 एस के लिए प्रतीक्षा करें और दोहराएं कदम 3.4-3.6 ।
  8. धारक से माउस निकालें और हीटिंग पैड पर जगह है ।
  9. medetomidine, atipamezole (०.५ मिलीग्राम/kg, आईएफसआई), या संज्ञाहरण से पशु वसूली के लिए प्रतीक्षा के लिए α2-विरोधी द्वारा रिवर्स संज्ञाहरण ।
  10. का पालन करें पर anesthetized पशुओं में vivo एसडी OCT और एफए इमेजिंग में दोहराएं 5, 10, और 14 दिनों तक ।

4. CNV ग्रेडिंग

  1. ग्रेड अक्टूबर छवियों और धमनियां एफए के तुरंत बाद 0 दिन पर लेजरिंग के बाद लिया छवियों से है Bruch झिल्ली की क्षति निंनलिखित:
    0-Bruch की झिल्ली क्षतिग्रस्त नहीं हुई
    1-Bruch की झिल्ली की सफल क्षति
  2. ग्रेड के रूप में रेटिना एफए छवियों की एक श्रृंखला में fluorescein संकेत की गतिशीलता की तुलना द्वारा मनाया गया था कि लेजर स्पॉट से CNV की उपस्थिति के रूप में निंनलिखित:
    0-रेटिना की सामान्य उपस्थिति
    ०.५-बेहोश रिसाव के दाग
    १.०-टपका हुआ CNV क्षेत्रों
    नोट: CNV या संदिग्ध एफए में अतिरिक्त पुष्टि के लिए oct इमेजिंग का प्रयोग करें, जहां अक्टूबर छवियों में intraretinal द्रव की उपस्थिति CNV ग्रेडिंग सुझाव है ।

5. रेटिना मोटाई माप

  1. रेटिना मोटाई माप के लिए एक स्वचालित विभाजन सॉफ्टवेयर का प्रयोग करें । सुनिश्चित करें कि कुल रेटिना की मोटाई, RPE (स्वस्थ माप साइटों) के लिए तंत्रिका फाइबर परत से सभी परतों की मोटाई के रूप में माना जाता है, या एक काल्पनिक क्षति की साइट के आसपास RPE को जोड़ने लाइन (लेजर साइटों) ( यह भी चित्रा 7देखें).

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Representative Results

लेजरिंग के तुरंत बाद एक बुलबुला या उपरेटिना रक्तस्राव हमेशा दिखाई नहीं देता है । इसलिए, SD-OCT Bruch की झिल्ली की क्षति की पुष्टि करने के लिए विशेष रूप से महत्वपूर्ण है । चित्रा 1 लेजर प्रशासन के बाद अलग समय बिंदुओं पर अक्टूबर इमेजिंग का एक उदाहरण से पता चलता है ।

Figure 1
चित्र 1 : अक्टूबर एन नेत्र fundus (वीआईपी छवि) के चेहरे को देखने के तीन लेजर सफेद, हरे और लाल हलकों में उल्लिखित क्षेत्रों से पता चलता है । अक्टूबर बी-स्कैन छवियों पहले लेजरिंग (आधारभूत) लिया गया, तुरंत लेजरिंग के बाद Bruch की झिल्ली (0 दिन, तीर नुकसान की साइट के लिए बिंदु), और 5, 10 और 14 दिन लेजर प्रशासन के बाद एक को तोड़ने के लिए सत्यापित करने के बाद । के रूप में सफेद (छवियों की पहली पंक्ति) में उल्लिखित क्षेत्र से देखा जा सकता है, CNV बाद में timepoints विकसित नहीं किया । हरे और लाल विकसित CNV में उल्लिखित क्षेत्र, जो अनुवर्ती दिन 5 पर पता लगाया गया था । हालांकि, 10 और 14 दिन timepoints में, इन CNV घावों regressed । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।

आंकड़े 2 और 3 शो सीरियल इमेजिंग एफए का उपयोग कर, जो 0 दिन पर सभी तीन स्थानों में Bruch की झिल्ली के सफल नुकसान की पुष्टि की एक पुरुष में 10-सप्ताह पुराने C57BL/6jRj माउस ।

Figure 2
चित्र 2 : सीरियल एफए इमेजिंग हर 20 एस लिया (छवियां 1 से 18) के तुरंत बाद धमनियां स्तर पर लेजर प्रशासन । छवि में सफेद तीर 1 लेजर साइटों, जो बाद में timepoints (18 छवि में सफेद तीर) पर fluorescein रिसाव दिखाने के लिए बिंदु । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।

Figure 3
चित्र 3 : सीरियल एफए इमेजिंग हर 20 एस लिया (छवियों 1 के माध्यम से 18) रेटिना स्तर पर तुरंत लेजर प्रशासन के बाद. CNV क्षेत्र है कि fluorescein रिसाव है और 1 की ग्रेडिंग (टपका हुआ CNV) 18 छवि में सफेद तीर से बताया है । एक बढ़ती हुई तीव्रता नोट, साथ ही fluorescein सकारात्मक क्षेत्र, एफए इमेजिंग के timecourse के दौरान (8 और 11 छवियों में सफेद तीर). दो छवि 18 में सफेद में उल्लिखित क्षेत्रों में एक बेहोश एफए सिग्नल (ग्रेडिंग ०.५) होने के रूप में वर्गीकृत किया गया । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।

CNV पैथोलॉजी की ग्रेडिंग के अलावा, एसडी-अक्टूबर घाव साइट में अतिरिक्त जानकारी प्रकट करने के लिए भी उपयोगी है, उदा, रेटिना द्रव की उपस्थिति, शोफ, और CNV प्रतिगमन. चित्रा 4 चूहों में लेजर प्रेरित CNV की मुख्य रोग की पहचान से पता चलता है.

Figure 4
चित्र 4 : वर्णक्रमीय CNV पैथोलॉजी के डोमेन ऑप्टिकल जुटना टोमोग्राफी इमेजिंग । एसडी अक्टूबर रेटिना ऊतक के भीतर एक विस्तृत CNV विकृति प्रदान करता है, के रूप में scarring ऊतक, CNV गठन, और तरल संचय पर इन प्रतिनिधि छवियों से देखा जा सकता है । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।

धब्बेदार शोफ के मुख्य रोग की पहचान में से एक है गीले फार्म AMD मनुष्यों में. लेजर प्रेरित CNV मॉडल में, रेटिना मोटाई स्वचालित विभाजन का उपयोग कर मूल्यांकन किया जा सकता है. चयनित लेजर साइटों के मैनुअल माप CNV की साइट पर रेटिना मोटाई को मापने के लिए आवश्यक है । आरेख 5 स्वचालित सेगमेंटेशन के बाद जेनरेट की गई रिपोर्ट का एक उदाहरण दिखाता है ।

Figure 5
चित्र 5 : रेटिना मोटाई के ठहराव. रेटिना की मोटाई के रूप में स्वचालित विभाजन द्वारा मापा इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए यहाँ क्लिक करें ।

स्वचालित विभाजन का उपयोग रेटिना की मोटाई (तालिका 1) का अवलोकन प्रदान करने के लिए एक तेज़ तरीका है. आंकड़े 6A और घमण्ड एक स्वस्थ रेटिना क्षेत्र से और CNV विकृति, क्रमशः के साथ रेटिना क्षेत्र से स्वचालित विभाजन के प्रतिनिधि उदाहरण दिखाएँ. व्यक्तिगत रेटिना परतों भेद में पाया मामूली अशुद्धता के बावजूद, कुल मिलाकर, सॉफ्टवेयर मज़बूती से pigmented चूहों में कुल रेटिना मोटाई पहचानता है.

Figure 6
चित्र 6 : रेटिना परतों के स्वचालित विभाजन । स्वस्थ रेटिना क्षेत्र (एक) और रेटिना क्षेत्र के स्वचालित विभाजन CNV युक्त (छवि बीमें तारांकन चिह्न). कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।

आदेश में लेजर क्षेत्रों में रेटिना की मोटाई का मूल्यांकन करने के लिए, प्रत्येक लेजर क्षेत्र मैन्युअल रूप से निम्नलिखित के रूप में मापा गया था: कुल रेटिना की मोटाई के साइट के आसपास RPE को जोड़ने काल्पनिक लाइन के लिए तंत्रिका फाइबर परत से सभी परतों की मोटाई के रूप में माना जाता था क्षति (चित्रा 7 और तालिका 1) ।

क्षेत्र Day 5 दिन 10 दिन 14
कुल रेटिना मोटाई, माइक्रोन 218 ± 7.8 220 ± 7.2 221 ± 9.8
लेजर्ड क्षेत्र 1 २०० २०४ २१४
लेजर क्षेत्र 2 २२६ २१७ २२०
लेजर क्षेत्र 3 २२२ २२३ २२७
डेटा मतलब ± एसडी के रूप में प्रस्तुत कर रहे हैं

तालिका 1. inVivoDiver सॉफ्टवेयर (v. 3.0.8) का उपयोग कर स्वचालित विभाजन द्वारा निर्धारित के रूप में एक 14 दिन अनुवर्ती के दौरान CNV साइटों पर कुल रेटिना मोटाई और रेटिना की मोटाई.

Figure 7
चित्र 7 : CNV विकृति के साथ लेजर क्षेत्र में रेटिना मोटाई के मैनुअल माप. पीला लाइन लेजर प्रशासन की साइट पर एक काल्पनिक RPE परत (काली लाइन) के लिए तंत्रिका फाइबर परत से कुल रेटिना की मोटाई को इंगित करता है । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।

Histologically, CNV घावों isolectin जी एस-IB4 लेबलिंग (चित्रा ८अ) का उपयोग कर पुष्टि की गई । छवि विश्लेषण सॉफ्टवेयर छवि जंमू CNV घावों (चित्रा 8B) के क्षेत्र की गणना करने के लिए इस्तेमाल किया गया था ।

Figure 8
चित्र 8 : ऊतकीय विश्लेषण. धमनियां flatmount से CNV घावों का ऊतकीय दाग (हरे रंग में, A) Image J (B) में थ्रेसहोल्ड का प्रयोग मात्रा किया जा सकता है । A के लिए स्केल बार ५० माइक्रोन है । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।
 

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Discussion

Multimodal इमेजिंग CNV पैथोलॉजी मूल्यांकन के लिए मूल्यवान उपकरण प्रदान करता है । यहां हम एक इमेजिंग एफए, एसडी-अक्टूबर से मिलकर प्रोटोकॉल प्रस्तुत किया, और त्वरित, प्रतिलिपि, और CNV विकृति के विश्वसनीय मूल्यांकन के लिए स्वत: विभाजन । लेजर प्रशासन की पुष्टि के बाद Bruch की झिल्ली का टूटना । इसके अलावा, इस स्तर पर एसडी OCT का उपयोग भी संभव intraretinal और रेटिना नकसीर, जो परिणामों की व्याख्या को मिल सकता है की तत्काल दृश्य की अनुमति दी । रेटिना लीक एफए छवियों से fluorescein संकेत के आधार पर वर्गीकृत किया गया । एसडी के उपयोग-OCT CNV विकृति का एक और अधिक विस्तृत विवरण प्रदान की है । इसके अलावा, अनुदैर्ध्य एसडी अक्टूबर अनुवर्ती अवधि के दौरान विभिंन समय बिंदुओं पर विश्लेषण विकृति है कि अगर अकेले एफए पर भरोसा मायावी रहेगा में अस्थाई मतभेदों पर प्रकाश डाला ।

कुल रेटिना की मोटाई स्वचालित विभाजन का उपयोग कर मापा गया था । CNV साइटों पर रेटिना मोटाई प्रेरित किया गया था मैंयुअल रूप से मापा गया । धमनियां flatmount के ऊतकीय मूल्यांकन का सत्यापन किया जाता है, और neovascularization के क्षेत्र को इमेज एनालिसिस सॉफ्टवेयर इमेज जे का उपयोग करके मापा जाता है ।

प्रस्तुत प्रोटोकॉल के सफल प्रदर्शन के लिए दृश्य अक्ष की उचित पारदर्शिता महत्वपूर्ण है । कॉर्निया का सूखापन और मोतियाबिंद के गठन समस्या निवारण में शामिल मुख्य कारक हैं । इसलिए, एक बार माउस anesthetized हो जाता है, आंखों लगातार कृत्रिम आंसू या कॉर्निया के उचित जलयोजन बनाए रखने के लिए जेल के साथ हाइड्रेटेड किया जाना चाहिए । प्रस्तावित प्रोटोकॉल संज्ञाहरण के प्रेरण से 10 मिनट के भीतर तरजीही प्रदर्शन किया जाना चाहिए । विस्तारित संज्ञाहरण समय मोतियाबिंद के गठन और vivo इमेजिंग में रोकने के कारण हो सकता है ।

बताया प्रोटोकॉल रेटिना के स्तर पर संवहनी लीक के आधार पर CNV प्रगति की प्रेक्षणीय ग्रेडिंग करने के लिए सीमित है । रेटिना रिसाव का मात्रात्मक आकलन हीडलबर्ग Spectralis सॉफ्टवेयर का उपयोग कर जोड़ा जा सकता है, जो रिसाव के क्षेत्र के विरेखांकन की अनुमति देता है, और ब्याज के क्षेत्र पर मात्रात्मक डेटा प्रदान करता है. इसके अलावा, सुलेमान और उनके सहयोगियों (२०१५) ने हाल ही में ellipsoid विधि10का उपयोग कर अक्टूबर छवियों का अधिग्रहण किया vivo में से CNV मात्रा की गणना का प्रस्ताव किया. ज्यादातर मामलों में CNV के रूप में घावों की मात्रा के अधिक से अधिक अनुमान के पूर्वाग्रह का परिचय ellipsoid मॉडल एक अनियमित आकार की है । हालांकि, ऊतकीय नमूनों की फोकल विश्लेषण और अक्टूबर छवियों से प्रस्तावित ellipsoid ठहराव से मात्रा माप के बीच उच्च सहसंबंध प्रमाण प्रदान करता है कि विधि CNV मात्रा का मात्रात्मक मूल्यांकन के लिए एक महत्वपूर्ण उपकरण है10 .

समाप्त करने के लिए, हम मानते है कि vivo इमेजिंग मोडलों में अलग से प्रस्तुत संयोजन, स्वचालित विभाजन और ऊतकीय विश्लेषण के साथ, नैदानिक अध्ययन में CNV विकृति के प्रतिलिपि और विश्वसनीय मूल्यांकन प्रदान करता है । विधि अवधारणा चिकित्सीय हस्तक्षेप अध्ययन के सबूत के लिए विशेष रूप से उपयोगी हो सकता है ।

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Disclosures

लेखक Symantas Ragauskas, पीएच. डी. एक कर्मचारी (अनुसंधान वैज्ञानिक) और Experimentica लिमिटेड के शेयरधारक है कि अनुबंध अनुसंधान सेवा इस लेख में प्रयुक्त नैदानिक CNV मॉडल को रोजगार प्रदान करता है ।

लेखक ईवा Kielczewski एक कर्मचारी (अनुसंधान अनुप्रयोगों के इंजीनियर, अक्टूबर) Leica माइक्रोसिस्टंस कि एसडी-oct इस लेख में इस्तेमाल किया प्रणालियों का उत्पादन है ।

लेखक यूसुफ Vance Leica माइक्रोसिस्टंस के एक कर्मचारी (न अक्टूबर बिक्री निदेशक) है कि एसडी oct इस लेख में इस्तेमाल किया प्रणालियों का उत्पादन है । यूसुफ Vance भी राष्ट्रपति और Spective, LLC के प्रबंध निदेशक है ।

लेखक साइमन कजा, पीएच. डी. सलाहकार मुख्य वैज्ञानिक अधिकारी और Experimentica लिमिटेड, एक नैदानिक अनुबंध अनुसंधान संगठन के शेयरधारक है कि अनुबंध अनुसंधान सेवाएं, भंडार प्रदान करता है । इस आलेख में प्रयुक्त होने वाले नैदानिक CNV मॉडल. साइमन कजा, पीएच. डी. और वैज्ञानिक, LLC, एक जीवन विज्ञान परामर्श फर्म के सीईओ भी है, और डॉ जॉन पी और Therese ई. Mulcahy लोयोला विश्वविद्यालय शिकागो, Stritch स्कूल ऑफ मेडिसिन में नेत्र विज्ञान में संपंन प्रोफेसर के रूप में कार्य करता है । इस व्यवस्था की शर्तों की समीक्षा और उसकी ब्याज नीति के विरोध के अनुसार लोयोला विश्वविद्यालय शिकागो द्वारा अनुमोदित किया गया है ।

लेखक Giedrius Kalesnykas, पीएच. डी. एक कर्मचारी (सीईओ) और Experimentica लिमिटेड के शेयरधारक है कि अनुबंध अनुसंधान नैदानिक CNV इस लेख में इस्तेमाल किया मॉडल रोजगार सेवाएं प्रदान करता है ।

Acknowledgments

लेखक उत्कृष्ट तकनीकी और Experimentica समर्थन के लिए Yuliya Naumchuk (लोयोला विश्वविद्यालय शिकागो) और अगने žiniauskaitė (videographic लिमिटेड) का शुक्रिया अदा करना चाहते हैं । डॉ कजा के अनुसंधान कार्यक्रम लोयोला विश्वविद्यालय शिकागो में नेत्र विज्ञान में डॉ जॉन पी और Therese ई. Mulcahy संपंन प्रोफेसर द्वारा समर्थित है ।

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Medetomidine (commercial name Domitor) Orion Vnr 01 56 02 Anesthesia
Ketamine Intervet Vnr 51 14 85 Anesthesia
0,9% NaCl B Braun 357 0340 Anesthesia
Xylazine (commercial name Rompun vet) Bayer vnr 14 89 99 Anesthesia
Tropicamide Santen Vnr 04 12 36 Mydriatic agent
Viscotears Alcon Vnr 44 54 81 Lubricant
Systane Alcon  - Lubricant
5% Fluorescein sodium salt Sigma Aldrich F6377-100G Fluoresent agent
Atipamezole (commercial name Antisedan) Orion Vnr 47 19 53 Anesthesia

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References

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