Author Produced

En In Vivo evaluering af blod - hjerne barrieren forstyrrelser i en rotte Model af iskæmisk slagtilfælde

Neuroscience

Your institution must subscribe to JoVE's Neuroscience section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

 

Summary

Det overordnede mål med denne fremgangsmåde er at give en meget reproducerbare teknik i vivo vurdering af blod - hjerne barrieren forstyrrelser i rotte modeller af iskæmisk slagtilfælde.

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Panahpour, H., Farhoudi, M., Omidi, Y., Mahmoudi, J. An In Vivo Assessment of Blood-Brain Barrier Disruption in a Rat Model of Ischemic Stroke. J. Vis. Exp. (133), e57156, doi:10.3791/57156 (2018).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Iskæmisk slagtilfælde fører til vasogenic hjerneødem og efterfølgende primære hjerneskade, hvilket er medieret gennem destruktion af blod - hjerne barrieren (BBB). Rotter med inducerede iskæmisk slagtilfælde blev etableret og brugt som i vivo modeller til at undersøge den funktionelle integritet af BBB. Spektrofotometriske påvisning af Evans blå (EB) i hjernen prøver med iskæmisk skade kunne give pålidelige begrundelse for forskning og udvikling af nye terapeutiske metoder. Denne metode genererer reproducerbare resultater, og finder anvendelse på et laboratorium, uden behov for specialudstyr. Vi præsenterer her, visualiseret og tekniske retningslinjer på påvisning af ekstravasation af EB efter induktion af iskæmisk slagtilfælde i rotter.

Introduction

Vasogenic hjerneødem på grund af blod - hjerne barrieren (BBB) afbrydelse er fortsat en vigtig komplikation af iskæmisk slagtilfælde og en væsentlig faktor for overlevelsesraten i apopleksi patienter1,2. Blod - hjerne barrieren (BBB), som er dannet af hjernen kapillære endotelceller (BCECs) og består af særskilte neurovaskulære komponenter (fx stramme kryds blandt BCECs, pericytes, astroglial og neuronale celler3), giver en specialiserede og dynamisk grænseflade mellem det centrale nervesystem (CNS) og perifere blodcirkulation4,5. Fornærmelser som iskæmi-reperfusion skader kunne forstyrre BBB funktionelle integritet og føre til efterfølgende penetration af cirkulerende leukocytter i hjernen parenkym, der i sidste ende udløser cerebral betændelse og primære hjerneskader 6 , 7. dyremodeller er nødvendige for den nøjagtige påvisning af dysfunktion af BBB efter forekomst af et slagtilfælde. Sådanne modeller er af stor betydning for at studere bagvedliggende patofysiologiske mekanismer og indføre nye neuroprotektive strategier. In vitro celle kultur-baserede modeller af BBB er blevet stærkt udviklet og anvendt til molekylære studier af BBB Patofysiologi8,9,10. Ikke desto mindre, i vivo animalske modeller, som producerer iskæmisk beskadigelse af BBB svarende til humane kliniske tilstande, er også meget værdifuldt i denne henseende. Kvantitativ påvisning af ekstravasation af Evans blå (EB) er et godt anerkendte og følsom teknik, der har været anvendt til vurdering af BBB integritet og funktion i neurodegenerative sygdomme, herunder iskæmisk slagtilfælde11, 12 , 13 , 14. denne metode er omkostningseffektiv, realistisk, reproducerbare og helt gældende i et forsøgslaboratorium. Dets gennemførelse kræver ikke avancerede udstyr, såsom radioaktive sporstoffer15 eller magnetisk resonans imaging (MR)16, som er en forudsætning for andre metoder. I denne artikel viser vi grundigt grundlæggende tekniske processer af BBB vurdering ved hjælp af EB ekstravasation i rotte modeller af iskæmisk slagtilfælde.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

Alle procedurer blev udført i overensstemmelse med retningslinjerne i Ardabil University of Medical Sciences Research Council for udførelse af dyreforsøg (etiske id-nummer: IR. ARUMS. REC.1394.08). I denne visualiseret undersøgelse, brugte vi voksne mandlige Sprague-Dawley rotter (300-350 g) fremstillet af græs Institute (Teheran, Iran).

1. anæstesi og Flowmetry

  1. Fremkalde anæstesi ved hjælp af 4% isofluran og opretholde det med isofluran (1-1,5%) i en blanding af lattergas (70% v/v) og ilt (30% v/v) for varigheden af operationen.
  2. Placere et bedøvet dyr i tilbøjelige positur på et feed-back kontrolleret varme tæppe og opretholde kropstemperaturen på 37±0.5 ° C ved hjælp af en rektal sonde tilsluttet denne opvarmning enhed.
  3. Påfør en lille mængde af oftalmologiske salve på begge øjne til at forhindre tørhed.
  4. Barbere den kirurgisk område på venstre side af kraniet med elektrisk trimming. Bruge betadine løsning med en gaze pad til at desinficere huden. Skyl denne region med en steril pad, der indeholder 70% ethanol og Gentag begge trin for tre cyklusser17.
  5. For analgesi, injicere 0,2 mL 0,5% bupivacaine subkutant i kirurgi region17.
  6. Gøre en 1 cm lang hud indsnit på kraniet (strækker sig fra den laterale øjenkrog af venstre øje til bunden af venstre øre) og dissekere venstre temporalis musklen til at udsætte kraniet. Derefter, skabe en lille burr hul 5 mm lateral til og 1 mm posteriort for bregma18 at lette placering af spidsen af Doppler flowmeter blyant sonde.
  7. Drej rotte fra tilbøjelige til liggende stilling, og derefter sætte laser blyant sonden i tidligere boret kraniet blind-hullet til at overvåge regional cerebral blodgennemstrømningen (rCBF).
  8. Registrere hvert enkelt dyr baseline rCBF og betragte dette som 100%. Navnlig, starter midt cerebral arterieokklusion (MCAO), når et fald i rCBF på mere end 80% er opdaget19,20.

2. induktion af fokale Cerebra iskæmi

  1. Barbere halsregionen og desinficere huden med betadine løsning og 70% ethanol. Injicere 0,2 mL 0,5% bupivacaine subkutant i kirurgi site for analgesi17.
  2. Gøre en 2 cm lange kirurgiske indsnit i den ventrale overflade af hals til at få adgang til den venstre fælles halspulsåren (LCCA). Isolere LCCA fra den nærliggende fascia og vagus nerve for at få adgang til tvedeling af den eksterne halspulsåren (ECA) og den interne halspulsåren (ICA).
  3. Ligate permanent enten LCCA eller ECA beskæftiger en 5-0 silke sutur og dissekere ICA gratis til niveauet af pterygopalatine arterie.
  4. Løst placere en uafgjort i 5-0 silke sutur omkring LCCA, og derefter midlertidigt ICA klemme med en vaskulær mikro-klip.
  5. Gør et lille snit på LCCA inden den tidligere indsatte løs tie, og derefter indsætte en 4-0 silicium-belagt nylon sutur i den luminale plads af ICA og stramme sutur omkring LCCA at sikre nylon sutur og forhindre blodet siver ud.
  6. Fjerne den vaskulære mikro-klip fra ICA. Derefter, fremme en silicium-coatede intraluminal glødetråd indtil iagttage et markant fald i rCBF, der angiver okklusion af MCA oprindelse. I slutningen af iskæmisk periode (90 min), skal du starte reperfusion ved at trække intraluminal sutur21.

3. halsfedt Cannulation og Evans blå (EB) injektion

  1. Lave en 1 cm langsgående snit i halsen til venstre side af midterlinjen og derefter ligeud dissekere lager overfladiske fascie for at få adgang til den eksterne gren af den venstre halsfedt (LGV). Derefter, permanent ligate kraniel slutningen af LGV med 5-0 silke sutur. Løst placere to bånd omkring venen og derefter midlertidigt klemme hjerte slutningen af LGV med en vaskulær mikro-klemme.
  2. Gør et lille snit på LGV mellem to suturer, og derefter indsætte heparinized serum fyldt kateter i den luminale plads af LGV og forhånd det ca 10 mm. bagefter, stramme ligaturer omkring venen til sikre kateteret og forhindre blødning. Injicere små mængder af serum til at undgå kollapse venen.
  3. I begyndelsen af perioden reperfusion, langsomt injicere EB farvestof (1 mL/kg 2% EB løsning i saltvand) over en periode på 5 min. Efterfølgende vask kanylen ved injektion af 0,5 mL normale saltvand og injektion kanyle, opsige vene12,22.
  4. Endelig, sutur af nakke og hoved indsnit og injicere 0,05 mg/kg buprenorphin intraperitoneal (IP) og Gentag injektion hver 6-8 h i reperfusion periode for postoperativ analgesi17.
  5. Indsprøjtes 5 mL af pre varmede saline(IP) at give hydrering i recovery bur17.
  6. Sted dyret i en speciel opsving bur udstyret med temperatur og air condition kontrol og overvåge inddrivelse af dyret fra anæstesi.

4. vurdering af blod hjerne barrieren permeabilitet

  1. Efter 24 timer af reperfusion, dybt bedøver dyr med natrium thiopental. Åbn derefter af brysthulen ved at gøre et lille hul under brystbenet.
  2. Lave en lille åbning i højre atrium og injicere 250 mL af pre varmede 0,9% saltvand (37 ˚C) ved et tryk på 110 mmHg gennem den venstre ventrikel for 15 min at vaske EB fra cirkulationen, indtil de normale saltvand udgange fra atrium bliver farveløs23.
  3. Straks fjerne hjernen fra kraniet og placere det i hjernen matrix. Dissekere de olfaktoriske pære og lillehjernen, og derefter bruge en ren barberblad, adskille den højre hjernehalvdel fra venstre (Lesioned) langs midterlinjen.
  4. Vejer hver halvkugle og homogeniseres dem separat i 2,5 mL af fosfatbufferet saltopløsning, og bland det med 2,5 mL af trichloreddikesyre (60%) i 2 min. ved hjælp af en vortex maskine.
  5. Hjernen prøver for 30 min på 1,322 x g der centrifugeres og tillade prøver at køle ned i 4 ° C køleskab i 10 min.
  6. Bruge supernatanter for at vurdere EB absorbans ved et spektrofotometer på 610 nm23.
  7. Beregne EB koncentrationer mod en standardkurve og udtrykkelige resultater som µg/g af hjernevæv.

5. fremstilling af EB standardkurven

  1. Forberede 10 prøve løsninger af EB med koncentrationer af 1-10 µg af EB i 5 mL af fosfatbufferet saltopløsning.
  2. Måling af absorbans værdier af hver prøve på 610 nm med et spektrofotometer.
  3. Gøre et punktdiagram, ved hjælp af et regneark og nuværende EB koncentrationer på X-aksen og absorbans værdier på Y-aksen (figur 1).
  4. Definere en lineær tendenslinje for kurve med sin ligning. Derefter bruge det til EB koncentration af prøver.
  5. Rapporter de endelige resultater af EB ekstravasation som µg/g af hjernens væv vægt.

6. sham Operation

  1. Udføre den samme kirurgiske proces med rotter i sham-opererede gruppe (herunder at gøre et snit i halsregionen og EB injektion) men udelukke MCAO.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

Der var ingen signifikant forskel i EB niveauer i den højre hjernehalvdel versus den venstre hjernehalvdel sham-drives rotter (1,06 ± 0,1 µg/g og 1,1 ± 0,09 µg/g, henholdsvis). Som vist i tal 2A-2B, induktion af forbigående iskæmi (90 min iskæmi / 24 h reperfusion) forårsaget en betydelig forskel i EB niveauer (10.41 ± 0,84 µg/g, p < 0,001) i den venstre hjernehalvdel af iskæmisk rotter, sammenlignet med de respektive halvkugle i sham-drives rotter. Kollektivt, viser disse resultater, at under normale forhold, EB ikke let krydse BBB ind cerebral parenkym og cerebral iskæmisk fornærmelser fremkalde ekstravasation af EB gennem en øget gennemtrængelighed af BBB (tal 2A og 2B).

Figure 1
Figur 1 : Standardkurven bruges til at bestemme EB koncentrationen fra absorbans værdier. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.

Figure 2
Figur 2 : Vurdering af BBB afbrydelse af EB ekstravasation 24 timer efter iskæmisk slagtilfælde. Fotografi af hjerner i sham-drives og iskæmisk dyr (A). Intensiteten af EB ekstravasation i hjernevæv (blå farve) skyldes omfanget af BBB forstyrrelser i den lesioned halvkugle. EB koncentration i prøver forberedt fra venstre (lesioned) og højre hjernehalvdele af hjernen i sham-drives og iskæmisk dyr (B) (n = 6, *p< 0,001 i forhold til venstre hjernehalvdel i sham gruppe, p< 0,001 i forhold til ipsilaterale halvkugle i samme gruppe). Venligst klik her for at se en større version af dette tal.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Hidtil, forskellige metoder såsom Autoradiografi og påvisning af radioaktive sporstoffer24,25, immunofluorescens mikroskopi26,27, og EB ekstravasation teknik20, 23 har været brugt til at evaluere den blod - hjerne barriere skade. EB farvestof er stærkt stand til at binde til serum albumin og bruges som røbestof til påvisning af vaskulær lækage og kvantificere BBB opdeling11,28,29. Som en yderst accepteret og pålidelig metode giver EB ekstravasation teknik en direkte vurdering på integriteten af BBB, der påvirkes af forskellige cerebrale skader herunder iskæmisk slagtilfælde.

In vivo evaluering af BBB giver forskere til at studere muligt patofysiologiske mekanismer af iskæmi induceret vasogenic hjerneødem og finde nye terapeutiske indgreb. Denne model kræver ikke særlige faciliteter og kan producere troværdige resultater med en høj succesrate i eksperimenter (mere end 80%)13,20. Med direkte adgang til hjernevæv, denne model giver mulighed for meget præcise vurderinger af BBB integritet men er begrænset til langtidsstudier.

Patologiske ændringer i BBB forårsaget af iskæmisk slagtilfælde udvikle i tre faser: akut (i timer), sub-akutte (timer til dage), og kronisk (dage til måneder)30,31. Naturligvis, de tidligste terapeutiske indgreb producerer værdifulde beskyttende virkninger i den akutte patologiske fase. EB dosis og tidspunkt af injektion er to afgørende parametre for at opnå pålidelige resultater på grund af den dynamiske natur af BBB efter iskæmisk fornærmelser. Derfor, injektion af EB farvestoffet langsomt via en vene kanyle ved hjælp af passende dosis (1 mg/kg af 2% EB løsning i saltvand) efter begyndelsen af reperfusion periode er en vigtig faktor og giver mulighed for undersøgelse af patofysiologiske forandringer i de tidlige stadier af slagtilfælde .

Flere eksperimentelle metoder er blevet indført for at studere iskæmisk slagtilfælde. I denne eksperimentelle model brugte vi MCAO med metoden intraluminal glødetråd, der skaber betingelser ligner menneskers slagtilfælde21,32. Denne teknik er enkel og pålidelig; dets gennemførelse skal dog tage hensyn til nogle tekniske punkter at øge effektiviteten af teknikken og sikre dets nøjagtighed. Kropstemperatur bør holdes inden for de fysiologiske interval under operationen, mens blodtrykket og blod gasser skal være overvåget33,34,35. Konstant optagelse af rCBF med en laser Doppler flowmeter og ved hjælp af en egnet indstillet silikone-belagt glødetrådens kan ikke kun øge MCAO succesrate, men også reducere dødeligheden.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Forfatterne har ikke noget at oplyse.

Acknowledgments

Forfatterne er taknemmelige at vicekansler for forskning af Ardabil University of Medical Sciences (Ardabil, Iran) den finansielle støtte (indrømme ingen: 9607).

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Isoflurane Piramal AWN 34041100 20 - 25 °C
2,3,5-Triphenyltetrazolium chloride (TTC) Molekula 31216368 4 years
Sprague–Dawley rats  Pasture Institute (Tehran, Iran) 300-350g
Evans Blue  Sigma-Aldrich  314-13-6
Trichloroacetic acid  Sigma-Aldrich  76-03-9 2 years
Bupivacaine HCl (0.5%) Delpharm Tours below  25 °C
Bupernorphine Exir (Iran)
Sodium Carbonate Sigma-Aldrich  497-19-8
Sodium chloride  Sigma-Aldrich  7647-14-5
Di- Sodium hydrogen phosphate EMD Millipore  231-448-7
Potassium chloride Sigma-Aldrich   7447-40-7
Ethanol  Sigma-Aldrich  64-17-5
silicone(Xantopren) Heraeus EN ISO 4823
Activator universal plus Heraeus 66037445
Micro-Dissecting forceps Stoelting 52100-41
Spring Scisors Stoelting 52130-00
Operating  Scissors Roboz 52140-70
Brain matrix  Stoelting 51390
Anesthesia Machine for Small Animals |  Kent Scientific SS-01
Power Lab system AD Instruments ML880
Laser Doppler flowmeter AD Instruments ML191
Heating feed back system Harvard Appratus 72-7560
Vascular micro clamp FineScience Tools 18055-03
Silk 5-0 suture thread Ethicon 682G
Ethilon 4-0 suture thread  Ethicon EH6740G

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Jin, G., et al. Protecting against cerebrovascular injury: contributions of 12/15-lipoxygenase to edema formation after transient focal ischemia. Stroke. 39, (9), 2538-2543 (2008).
  2. Lo, E. H., Dalkara, T., Moskowitz, M. A. Mechanisms, challenges and opportunities in stroke. Nat Rev Neurosci. 4, (5), 399-415 (2003).
  3. Tam, S. J., Watts, R. J. Connecting vascular and nervous system development: angiogenesis and the blood-brain barrier. Annu Rev Neurosci. 33, 379-408 (2010).
  4. Zhang, C., et al. The potential use of H102 peptide-loaded dual-functional nanoparticles in the treatment of Alzheimer's disease. J Control Release. (2014).
  5. Obermeier, B., Daneman, R., Ransohoff, R. M. Development, maintenance and disruption of the blood-brain barrier. Nat Med. 19, (12), 1584-1596 (2013).
  6. Fang, W., et al. Attenuated Blood-Brain Barrier Dysfunction by XQ-1H Following Ischemic Stroke in Hyperlipidemic Rats. Mol Neurobiol. 52, (1), 162-175 (2015).
  7. Huang, J., et al. CXCR4 antagonist AMD3100 protects blood-brain barrier integrity and reduces inflammatory response after focal ischemia in mice. Stroke. 44, (1), 190-197 (2013).
  8. Omidi, Y., Barar, J. Impacts of blood-brain barrier in drug delivery and targeting of brain tumors. Bioimpacts. 2, (1), 5-22 (2012).
  9. Cho, H., et al. Three-dimensional blood-brain barrier model for in vitro studies of neurovascular pathology. Sci Rep. 5, (2015).
  10. Barar, J., Rafi, M. A., Pourseif, M. M., Omidi, Y. Blood-brain barrier transport machineries and targeted therapy of brain diseases. Bioimpacts. 6, (4), 225-248 (2016).
  11. Kaya, M., et al. Magnesium sulfate attenuates increased blood-brain barrier permeability during insulin-induced hypoglycemia in rats. Can J Physiol Pharmacol. 79, (9), 793-798 (2001).
  12. Pasban, E., Panahpour, H., Vahdati, A. Early oxygen therapy does not protect the brain from vasogenic edema following acute ischemic stroke in adult male rats. Sci Rep. 7, (1), 3221 (2017).
  13. Haghnejad Azar, A., Oryan, S., Bohlooli, S., Panahpour, H. Alpha-Tocopherol Reduces Brain Edema and Protects Blood-Brain Barrier Integrity following Focal Cerebral Ischemia in Rats. Med Princ Pract. 26, (1), 17-22 (2017).
  14. Belayev, L., Busto, R., Zhao, W., Ginsberg, M. D. Quantitative evaluation of blood-brain barrier permeability following middle cerebral artery occlusion in rats. Brain Res. 739, (1-2), 88-96 (1996).
  15. Bodsch, W., Hossmann, K. A. 125I-antibody autoradiography and peptide fragments of albumin in cerebral edema. J Neurochem. 41, (1), 239-243 (1983).
  16. Jiang, Q., et al. Quantitative evaluation of BBB permeability after embolic stroke in rat using MRI. J Cereb Blood FlowMetab. 25, (5), 583-592 (2005).
  17. Uluç, K., Miranpuri, A., Kujoth, G. C., Aktüre, E., Başkaya, M. K. Focal cerebral ischemia model by endovascular suture occlusion of the middle cerebral artery in the rat. J Vis Exp. (48), (2011).
  18. Hungerhuber, E., Zausinger, S., Westermaier, T., Plesnila, N., Schmid-Elsaesser, R. Simultaneous bilateral laser Doppler fluxmetry and electrophysiological recording during middle cerebral artery occlusion in rats. J Neurosci Methods. 154, (1-2), 109-115 (2006).
  19. Panahpour, H., Nouri, M. Post-Ischemic Treatment with candesartan protect from cerebral ischemic/reperfusioninjury in normotensive rats. Int J Pharm Pharm Sci. 4, (4), 286-289 (2012).
  20. Panahpour, H., Dehghani, G. A., Bohlooli, S. Enalapril attenuates ischaemic brain oedema and protects the blood-brain barrier in rats via an anti-oxidant action. Clin Exp Pharmacol Physiol. 41, (3), 220-226 (2014).
  21. Panahpour, H., Nekooeian, A. A., Dehghani, G. A. Blockade of Central Angiotensin II AT1 Receptor Protects the Brain from Ischemia/Reperfusion Injury in Normotensive Rats. Iran J Med Sci. 39, (6), 536-542 (2014).
  22. Panahpour, H., Nekooeian, A. A., Dehghani, G. A. Candesartan attenuates ischemic brain edema and protects the blood-brain barrier integrity from ischemia/reperfusion injury in rats. Iran Biomed J. 18, (4), 232-238 (2014).
  23. Kaya, M., et al. The effects of magnesium sulfate on blood-brain barrier disruption caused by intracarotid injection of hyperosmolar mannitol in rats. Life sci. 76, (2), 201-212 (2004).
  24. Schöller, K., et al. Characterization of microvascular basal lamina damage and blood-brain barrier dysfunction following subarachnoid hemorrhage in rats. Brain Res. 1142, 237-246 (2007).
  25. Bodsch, W., Hossmann, K. A. 125I-Antibody Autoradiography and Peptide Fragments of Albumin in Cerebral Edema. J Neurochem. 41, (1), 239-243 (1983).
  26. Sandoval, K. E., Witt, K. A. Blood-brain barrier tight junction permeability and ischemic stroke. Neurobiol Dis. 32, (2), 200-219 (2008).
  27. Zhu, H., et al. Baicalin reduces the permeability of the blood-brain barrier during hypoxia in vitro by increasing the expression of tight junction proteins in brain microvascular endothelial cells. J Ethnopharmacol. 141, (2), 714-720 (2012).
  28. Kucuk, M., et al. Effects of losartan on the blood-brain barrier permeability in long-term nitric oxide blockade-induced hypertensive rats. Life Sci. 71, (8), 937-946 (2002).
  29. Uyama, O., et al. Quantitative evaluation of vascular permeability in the gerbil brain after transient ischemia using Evans blue fluorescence. J Cereb Blood Flow Metab. 8, (2), 282-284 (1988).
  30. Kleinig, T. J., Vink, R. Suppression of inflammation in ischemic and hemorrhagic stroke: therapeutic options. Curr Opin Neurol. 22, (3), 294-301 (2009).
  31. Del Zoppo, G. J., Mabuchi, T. Cerebral microvessel responses to focal ischemia. J Cereb Blood Flow Metab. 23, (8), 879-894 (2003).
  32. Fluri, F., Schuhmann, M. K., Kleinschnitz, C. Animal models of ischemic stroke and their application in clinical research. Drug Des Devel Ther. 9, 3445-3454 (2015).
  33. Noor, R., Wang, C. X., Shuaib, A. Effects of hyperthermia on infarct volume in focal embolic model of cerebral ischemia in rats. Neurosci Lett. 349, (2), 130-132 (2003).
  34. Shin, H. K., et al. Mild induced hypertension improves blood flow and oxygen metabolism in transient focal cerebral ischemia. Stroke. 39, (5), 1548-1555 (2008).
  35. Bottiger, B. W., et al. Global cerebral ischemia due to cardiocirculatory arrest in mice causes neuronal degeneration and early induction of transcription factor genes in the hippocampus. Brain Res Mol Brain Res. 65, (2), 135-142 (1999).

Comments

0 Comments


    Post a Question / Comment / Request

    You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

    Usage Statistics