Det overordnede mål med denne fremgangsmåde er at give en meget reproducerbare teknik i vivo vurdering af blod – hjerne barrieren forstyrrelser i rotte modeller af iskæmisk slagtilfælde.
Iskæmisk slagtilfælde fører til vasogenic hjerneødem og efterfølgende primære hjerneskade, hvilket er medieret gennem destruktion af blod – hjerne barrieren (BBB). Rotter med inducerede iskæmisk slagtilfælde blev etableret og brugt som i vivo modeller til at undersøge den funktionelle integritet af BBB. Spektrofotometriske påvisning af Evans blå (EB) i hjernen prøver med iskæmisk skade kunne give pålidelige begrundelse for forskning og udvikling af nye terapeutiske metoder. Denne metode genererer reproducerbare resultater, og finder anvendelse på et laboratorium, uden behov for specialudstyr. Vi præsenterer her, visualiseret og tekniske retningslinjer på påvisning af ekstravasation af EB efter induktion af iskæmisk slagtilfælde i rotter.
Vasogenic hjerneødem på grund af blod – hjerne barrieren (BBB) afbrydelse er fortsat en vigtig komplikation af iskæmisk slagtilfælde og en væsentlig faktor for overlevelsesraten i apopleksi patienter1,2. Blod – hjerne barrieren (BBB), som er dannet af hjernen kapillære endotelceller (BCECs) og består af særskilte neurovaskulære komponenter (fx stramme kryds blandt BCECs, pericytes, astroglial og neuronale celler3), giver en specialiserede og dynamisk grænseflade mellem det centrale nervesystem (CNS) og perifere blodcirkulation4,5. Fornærmelser som iskæmi-reperfusion skader kunne forstyrre BBB funktionelle integritet og føre til efterfølgende penetration af cirkulerende leukocytter i hjernen parenkym, der i sidste ende udløser cerebral betændelse og primære hjerneskader 6 , 7. dyremodeller er nødvendige for den nøjagtige påvisning af dysfunktion af BBB efter forekomst af et slagtilfælde. Sådanne modeller er af stor betydning for at studere bagvedliggende patofysiologiske mekanismer og indføre nye neuroprotektive strategier. In vitro celle kultur-baserede modeller af BBB er blevet stærkt udviklet og anvendt til molekylære studier af BBB Patofysiologi8,9,10. Ikke desto mindre, i vivo animalske modeller, som producerer iskæmisk beskadigelse af BBB svarende til humane kliniske tilstande, er også meget værdifuldt i denne henseende. Kvantitativ påvisning af ekstravasation af Evans blå (EB) er et godt anerkendte og følsom teknik, der har været anvendt til vurdering af BBB integritet og funktion i neurodegenerative sygdomme, herunder iskæmisk slagtilfælde11, 12 , 13 , 14. denne metode er omkostningseffektiv, realistisk, reproducerbare og helt gældende i et forsøgslaboratorium. Dets gennemførelse kræver ikke avancerede udstyr, såsom radioaktive sporstoffer15 eller magnetisk resonans imaging (MR)16, som er en forudsætning for andre metoder. I denne artikel viser vi grundigt grundlæggende tekniske processer af BBB vurdering ved hjælp af EB ekstravasation i rotte modeller af iskæmisk slagtilfælde.
Hidtil, forskellige metoder såsom Autoradiografi og påvisning af radioaktive sporstoffer24,25, immunofluorescens mikroskopi26,27, og EB ekstravasation teknik20, 23 har været brugt til at evaluere den blod – hjerne barriere skade. EB farvestof er stærkt stand til at binde til serum albumin og bruges som røbestof til påvisning af vaskulær l?…
The authors have nothing to disclose.
Forfatterne er taknemmelige at vicekansler for forskning af Ardabil University of Medical Sciences (Ardabil, Iran) den finansielle støtte (indrømme ingen: 9607).
Isoflurane | Piramal | AWN 34041100 | 20 – 25 °C |
2,3,5-Triphenyltetrazolium chloride (TTC) | Molekula | 31216368 | 4 years |
Sprague–Dawley rats | Pasture Institute (Tehran, Iran) | 300-350g | |
Evans Blue | Sigma-Aldrich | 314-13-6 | |
Trichloroacetic acid | Sigma-Aldrich | 76-03-9 | 2 years |
Bupivacaine HCl (0.5%) | Delpharm Tours | below 25 °C | |
Bupernorphine | Exir (Iran) | ||
Sodium Carbonate | Sigma-Aldrich | 497-19-8 | |
Sodium chloride | Sigma-Aldrich | 7647-14-5 | |
Di- Sodium hydrogen phosphate | EMD Millipore | 231-448-7 | |
Potassium chloride | Sigma-Aldrich | 7447-40-7 | |
Ethanol | Sigma-Aldrich | 64-17-5 | |
silicone(Xantopren) | Heraeus | EN ISO 4823 | |
Activator universal plus | Heraeus | 66037445 | |
Micro-Dissecting forceps | Stoelting | 52100-41 | |
Spring Scisors | Stoelting | 52130-00 | |
Operating Scissors | Roboz | 52140-70 | |
Brain matrix | Stoelting | 51390 | |
Anesthesia Machine for Small Animals | | Kent Scientific | SS-01 | |
Power Lab system | AD Instruments | ML880 | |
Laser Doppler flowmeter | AD Instruments | ML191 | |
Heating feed back system | Harvard Appratus | 72-7560 | |
Vascular micro clamp | FineScience Tools | 18055-03 | |
Silk 5-0 suture thread | Ethicon | 682G | |
Ethilon 4-0 suture thread | Ethicon | EH6740G |