Cancer Research
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स्तन कैंसर कोशिकाओं के चूहों स्तन वसा पैड में Orthotopic इंजेक्शन
Chapters
Summary January 20th, 2019
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यहां, हम एक सरल, कम इनवेसिव, और आसान करने के लिए संभाल में स्तन वसा पैड में छाती कैंसर कोशिकाओं प्रत्यारोपण के लिए एक प्रोटोकॉल मौजूद, और एक उचित स्तन वसा पैड वातावरण के साथ इस माउस orthotopic स्तन कैंसर मॉडल के विभिंन पहलुओं की जांच करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता कैंसर.
Transcript
इस विधि में मदद कर सकते है कैंसर के क्षेत्र में महत्वपूर्ण सवालों के जवाब के बारे में कैसे माइक्रोएनवायरमेंट ट्यूमर विकास का समर्थन करता है या कि क्या एक विशिष्ट दवा प्रभावी ढंग से स्तन कैंसर प्रगति को बाधित कर सकते हैं । ट्यूमर इंडक्शन तकनीक के मुख्य फायदे यह है कि किसी सर्जरी की जरूरत नहीं है और यह एक कम आक्रामक तरीके से है जिसमें सीटू में स्तन कैंसर स्थापित करने के लिए है। इस तकनीक का उपयोग करके, ट्यूमर कोशिकाएं उपयुक्त ऊतक वातावरण में स्तन वसा पैड के भीतर बढ़ती हैं, मानव स्तन कैंसर की प्रगति को चूहों की कोशिकाओं को चमड़े के इंजेक्शन या ज़ेनोबेड़ा की तुलना में अधिक बारीकी से नकल करती हैं।
Ke-Xin काओ, हमारे तकनीशियन, और मैं, इस प्रक्रिया का प्रदर्शन करने में गन-लिन झांग की सहायता करेंगे । ऑपरेशन से पहले दिन, प्राप्तकर्ता माउस को मैन्युअल रूप से नियंत्रित करें और पशु पेट की ओर को चौथे निपल्स के चारों ओर मुंडा जाने के लिए फर तक घुमाएं। डिपिलेटरी क्रीम की पतली परत के साथ फर को पोंछें।
30 से 60 सेकंड के बाद क्रीम निकालने के लिए आसुत पानी का उपयोग करें और नरम कागज तौलिए के साथ माउस सूखी। ऑपरेशन के दिन, बर्फ पर एक बाँझ माइक्रोसेंट्रफ्यूज ट्यूब में, पीबीएस एकाग्रता के प्रति मिलीलीटर पांचवीं कोशिकाओं के लिए एक दो गुना दस करने के लिए मुरीन स्तन कैंसर सेल निलंबन पतला । प्रत्येक इंजेक्शन से पहले, प्रति माउस कोशिकाओं के 50 माइक्रोलीटर के साथ, एक 45 बाय 16 सुई से लैस एक मिलीलीटर सिरिंज लोड करें।
और प्रत्येक बेहोश जानवर में अंगुली चुटकी के लिए प्रतिक्रिया की कमी की पुष्टि करें । जानवर की आंखों पर मरहम लगाएं और पहले माउस के चौथे निप्पल के आसपास त्वचा को तम्बू करने के लिए चिमटी का उपयोग करें, सिरिंज का पालन करने के लिए एक सुरंग बनाने के लिए। ऊपर की ओर बेवेल के साथ सिरिंज पकड़ो और चमड़े के नीचे निप्पल से पांच से 10 मिलीमीटर पर त्वचा में प्रवेश, सुरंग के बाद जब तक सुई टिप लगभग निप्पल तक पहुंचता है ।
चिमटी का उपयोग करने के लिए पहले निप्पल के आसपास त्वचा तंबू सिरिंज का पालन करने के लिए एक सुरंग बनाता है । सुई चिमटी युक्तियों के बीच में प्रवेश किया जाना चाहिए और ऊतक में निराशाजनक के बजाय उठाना चाहिए। ध्यान से सुई टिप को स्तन वसा पैड में तब तक ले जाएं जब तक कि बेवेल निप्पल के नीचे न हो जाए, और कैंसर कोशिकाओं के धीमे इंजेक्शन की अनुमति देने के लिए त्वचा के तम्बू को छोड़ दें।
प्रविष्टि पर, ध्यान से सुई टिप को स्तन वसा पैड में ले जाएं जब तक कि बेवेल निप्पल के नीचे न हो जाए। और आप सही स्थान पर कोशिकाओं की डिलीवरी सुनिश्चित करने के लिए प्रतिरोध महसूस करेंगे। जब सभी कोशिकाओं को इंजेक्शन दिया गया हो, तो सुई को थोड़ा साइड में घुमाएं और सिरिंज को धीरे-धीरे वापस लें।
10 से 20 सेकंड के लिए सुई घाव पर दबाव लागू करने के लिए एक कपास झाड़ू का उपयोग करें, बनाने के लिए कोई तरल पदार्थ रिसाव नहीं है । इंजेक्शन निप्पल केंद्र में निप्पल के साथ एक पारदर्शी, सफेद, सपाट क्षेत्र के रूप में दिखाई देना चाहिए। ट्यूमर की मात्रा स्थापित करने के लिए, माउस पेट की ओर को नियंत्रित करें और ट्यूमर की लंबाई और चौड़ाई को मापने के लिए एक कैलिपर का उपयोग करें।
ट्यूमर बायोल्यूमिनेसेंस पर कब्जा करने के लिए, इमेजिंग से 10 मिनट पहले माउस की गर्दन के पीछे डी-लूसिफ़ेरिन के प्रति किलोग्राम 150 मिलीग्राम इंजेक्ट करें। और उपयुक्त बायोल्यूमिनेसेंस इमेजिंग मापदंडों के तहत प्राथमिक ट्यूमर और मेटास्टेस की बायोल्यूमिनेसेंस छवियों पर कब्जा करें। उचित प्रयोगात्मक समय बिंदु पर, त्वचा से ट्यूमर को काटने के लिए कैंची का उपयोग करें।
और पोस्ट-ऑपरेटिव दर्द को दूर करने के लिए सर्जिकल साइट पर एनाल्जेसिक समाधान लागू करें। फिर मानक प्रोटोकॉल के अनुसार सर्जिकल टांके के साथ त्वचा को बंद करें। पूर्ण वसूली तक निगरानी के साथ एक वार्मिंग लैंप के तहत जानवर को ठीक करने की अनुमति दें।
प्राथमिक ट्यूमर को दो बराबर टुकड़ों में काटने के लिए स्केलपेल का उपयोग करें। बाद में हेमेटॉक्सीलिन और ईओसिन स्टेनिंग और इम्यूनोहिस्टोकेमिस्ट्री के लिए 4% पैराफॉर्मल्डिहाइड में ऊतक का आधा स्टोर करें। पश्चिमी ब्लॉटिंग या आरएनएआई अलगाव के लिए तरल नाइट्रोजन में दूसरे आधे को फ्रीज करें।
उचित प्रयोगात्मक अंत बिंदु पर मानक विच्छेदन प्रोटोकॉल के अनुसार फेफड़ों की फसल और पीबीएस में अंग धोने । फिर हेमेटॉक्सीलिन और ियोसिन स्टेनिंग द्वारा मेटास्टेसिस को सत्यापित करने के लिए 4% पैराफॉर्मलडिहाइड में फेफड़ों को ठीक करें। प्राथमिक ट्यूमर विकास ट्यूमर की मात्रा और जीवित ट्यूमर सेल बायोल्यूमिनेसेंस द्वारा मापा जा सकता है, जैसा कि प्रदर्शन किया गया है।
टीका के शुरुआती चरणों के दौरान मेटास्टेस नहीं मनाया जाता है क्योंकि या तो कोई माध्यमिक ट्यूमर स्थापित नहीं किया गया है, या प्राथमिक ट्यूमर के मजबूत बायोल्यूमिनेसेंट संकेत कमजोर संकेतों के साथ छोटे मेटास्टैटिक फोसी का पता लगाने में बाधा डालते हैं। रीसेक्शन के बाद, दूर के अंगों के मेटास्टैटिक फोसी से बायोल्यूमिनेसेंस सिग्नल का पता लगाया और विश्लेषण किया जा सकता है। हेमेटॉक्सीलिन और इओसिन स्टेनिंग द्वारा प्राथमिक स्तन ट्यूमर और फेफड़ों के दोनों वर्गों के आकृति विज्ञान के विश्लेषण से ट्यूमर सेल टीका लगाए गए जानवरों में उत्पीडिंग से पता चलता है जैसा कि एंटी-सीडी 31 माइक्रोवेसेल मार्कर स्टेनिंग द्वारा सबूत है।
इस प्रक्रिया का प्रयास करते समय, यह सुनिश्चित करना याद रखना महत्वपूर्ण है कि ट्यूमर कोशिकाओं को वितरित करने से पहले सुई टिप सही स्थान पर है। इस प्रक्रिया के बाद, पशु अल्ट्रासाउंड की तरह परमाणु, वीवो में प्राथमिक ट्यूमर के मूत्राशय पूरकता के बारे में अतिरिक्त सवालों के जवाब देने के लिए प्रदर्शन किया जा सकता है। इसके विकास के बाद, इस तकनीक ने ट्यूमरजीनेसिस के क्षेत्र में शोधकर्ताओं के लिए मार्ग प्रशस्त किया और ट्यूमरजीनेसिस में शामिल प्रमुख कारकों और रास्तों और मुरीन पशु मॉडलों में कैंसर रोधी दवा के तंत्र की खोज में दवा विकास।
यह न भूलें कि आइसोफ्लुन या अन्य गैस संज्ञाहरण के साथ काम करना खुराक के लिए बेहद कठिन हो सकता है और इस प्रक्रिया को निष्पादित करते समय हमेशा सक्रिय कार्बन मास्क का उपयोग करने जैसी सावधानियां बरती जानी चाहिए।
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