씹는 곤충에 A.의 thaliana의 저항을 테스트하기 위해 선택과 노 - 선택 Assays

Biology
 

Summary

씹는 곤충 herbivores 식물의 저항은 여러 가지 방법으로 테스트할 수 있습니다. 여기, 우리는 선택과 해충 종 피에리스 rapae에 대한 저항을 식별하는 모델 식물 Arabidopsis thaliana의와 노 선택 실험을 셋업하는 방법을 보여줍니다.

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations | Reprints and Permissions

De Vos, M., Jander, G. Choice and No-Choice Assays for Testing the Resistance of A. thaliana to Chewing Insects. J. Vis. Exp. (15), e683, doi:10.3791/683 (2008).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

작은 흰 배추 나비의 유충은 농업 설정에서 해충입니다. 이 애벌레의 종류가 같은 양배추 많은 작물을 포함 양배추 가족 식물에서 피드, 곤충의 브로콜리, Val Thorens 호텔 콩나물 등 리어링은 온실의 양배추 식물에 이루어집니다. 최소한 두 케이지는 피에리스 rapae의 양육을 위해 필요합니다. 애벌레와 어른, 나비를 포함하는 다른 하나는. 식물 호르몬이 곤충 해충에 대한 저항의 유해 식물 화학 물질의 역할을 조사하기 위해 두 실험을 보여줍니다. 첫째, jasmonic 산성 (JA - 자주 곤충에 대한 저항에 표시된 식물 호르몬)의 역할 결정 씹는 곤충 피에리스 rapae에 저항 인치 캐타필러 성장 JA 생산에 장애인 야생 타입과 돌연변이 식물에 비교할 수 있습니다. 애벌레가 합성 또는 JA에서 결함있는 단일 공장에서 존속하도록 강요되기 때문에이 실험은, "아무도 선택"으로 간주되지 않습니다. 둘째, 우리는 산란 (달걀 부설) 신호로 사용됩니다 glucosinolates의 역할을 조사 실험을 보여줍니다. 여기서 우리는 여성의 나비가 두 유전자형의 식물에 자신의 알을 낳기 위해 선택할 수있는 "선택"실험에 glucosinolate 생산​​ 장애인 WT 및 돌연변이 Arabidopsis을 사용합니다. 이 비디오는 두 assays뿐만 아니라 대표적인 결과에 대한 실험 설정을 보여줍니다.

Protocol

선택의 여지가 실험도 :

  1. 조심스럽게 플라스틱 컵에 대한 관심의 Arabidopsis 공장을 묶으십시오. 이 경우 : 콜 - 0 (WT)와 JA의 생산에 장애인 돌연변이. 당신이 나뭇잎에 손상을 제한 있는지 확인하십시오. 그걸 위해서는이 페인트의 뒷면을 사용합니다.
  2. 양배추에있는 식민지에서 갓 부화 유충을 위해 좋은 페인트를 사용하십시오.
  3. Arabidopsis 식물에 유충을 조심스럽게 넣습니다.
  4. 일 4, 7, 10 중량 유충. 팁 : 식물 성장 (1 유충 1 공장의 전체 생명주기를 수행 수) 증가 짧은 하루 조건 (8 시간 조명) 아래 식물을 성장.

선택 실험 :

  1. 두 식물은 각각의 유전자형 중 하나를 선택합니다. 베스트는 트레이 효과 같은 다른 요인 등을 제한 같은 냄비에 식물을 성장하는 것입니다
  2. 나비 케이지에있는 식물을 놓으십시오.
  3. 비옥한 여성을 선택합니다. 난 보통 적극적으로 양육 식민지에서 알을 누워있는 여자를 잡으.
  4. 24 시간을위한 두 식물의 선택은 새장에있는 여성을 풀어주고있다.

팁 1 : 학습의 영향을 제거하기 위해, 이후의 선택 시험에 대한 여자를 재사용하지 않습니다.

팁 2 : 하나는 비슷한 성장 표현형을 가지고 식물을 비교할 수 있습니다. 또는, 당신은 Erlenmeyer 플라스크 위에 각 유전자형에서 나뭇잎을 탑재하고 여성들의 매력을 비교해 볼 수있을 텐데.

방문하십시오 식물 생물학의 연간 리뷰 곤충 herbivory이 프로토콜과 식물 면역에 대한 자세한 내용은.

Comments

6 Comments

  1. I thought you did an excellent job, nice and clear explainations, good transitions and summary.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    June 14, 2008 - 3:06 PM
  2. 1. perhaps you could explain why you use  arabidopsis instead of cabbage. My assumption is that much work, including sequencing of the genome, had been done on the arabidopsis so you were able to add-remove genetic components you wanted to test for. ². how long is a generation of the cabbage butterfly? 3. Choice experiment. Why did you not use multiple larvae released into cage with the two types of arabidopsis? Some what confusing because there were two different growth stages and two different stimuli tested for in the same testing 4. Excellent job of editing and presenting. It fit nicely on the video   Jay

    Reply
    Posted by: Anonymous
    July 6, 2008 - 8:00 AM
  3. Dear Jay, Thank you for your comments. Let me answer your questions and give you some additional information on the life cycle of Pieris rapae. 1. Larvae of the small white butterfly will feed from almost all cruciferous plants. We use Arabidopsis thaliana because of its short generation time, small size and above all its sequenced genome and vast number of available mutants. These mutants allow us to unravel the defense responses during the host-insect interaction. As demonstrated in the video, we show that jasmonic acid plays a major role in the plant's defensive capacities towards Pieris rapae. Interestingly, we also show that glucosinolates, whose breakdown products are toxic to many generalist caterpillars, are used as by Pieris rapae female butterflies (specialist on cruciferous plants) as oviposition cues. We have recently published a paper in Plant Physiology (March ²008) on this topic. ². Pieris rapae life cycle. The development of Pieris rapae strongly depends on the temperature and ranges from 5-7 weeks. We rear our insects at ²3C. Eggs hatch in 3-7 days; Larvae have 5 larval stages (L1-L5; ~ 10-14 day); Pupae (7-14 days); Adults (~14-²0 days). Under our rearing conditions eggs hatch in 5 days, complete larval development until pupation takes 1² days, pupa take ~7 days to eclosion, adult life is ~² weeks. 3. Using the video we wanted to show different experimental set-ups for testing plant-insect interaction. A choice test (preference) will give you additional insights that are not necessarily displayed in a no-choice test (edibility). There are other possibilities for choice tests, including the one you mentioned. The results obtained with this approach, e.g. leaf area eaten, are hard to quantify and rather subjective. Therefore, we mostly use the no-choice set-up to determine the effect on caterpillar performance. Martin 

    Reply
    Posted by: Anonymous
    July 7, 2008 - 11:05 AM
  4. The demo was very clear to me, but the music was .........
    Maybe you should point out in the video, that these experiments have to repeated.

    Reply
    Posted by: Birgid B. S.
    July 7, 2009 - 2:13 AM
  5. I had a question regarding the increase of weight of the Caterpillar.well the readings are taken on 4,7,10 day.The coi1 plants if are consumed earlier ,how come the weight is increased,if no plant material is left till 10th day?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    January 14, 2012 - 11:19 PM
  6. I love this vedio and may you tag this vedio to me

    Reply
    Posted by: Anonymous
    March 16, 2012 - 11:44 PM

Post a Question / Comment / Request

You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

Usage Statistics