Принципы сайт-специфического рекомбиназы (SSR) Технология

Biology

Your institution must subscribe to JoVE's Biology section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

 

Summary

Появление на конкретных участках рекомбиназы (SSR) технологию и Cre / жидкий кислород системы привело к многочисленным достижениям в области молекулярной биологии, а также зарекомендовал себя как ценный инструмент для оценки функции генов в трансгенных животных. Это интервью обсуждает механизм конкретного участка рекомбинации Циклизация рекомбиназы (CRE) и как использование этого фермента привело к развитию условных мутагенеза, который имеет значительные преимущества по сравнению с традиционными выбить стратегий.

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Bucholtz, F. Principles of Site-Specific Recombinase (SSR) Technology. J. Vis. Exp. (15), e718, doi:10.3791/718 (2008).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Сайт-специфическая рекомбиназы (SSR) технология позволяет манипуляций генной структуры для изучения функций генов и стала неотъемлемым инструментом молекулярной биологии. Сайт-специфическая рекомбиназ являются белки, которые связываются с различных последовательностей ДНК-мишени. Cre / жидкий кислород система была впервые описана в бактериофагов в течение 1980-х. Cre рекомбиназы является топоизомеразы типа I, который катализирует конкретных участков рекомбинации ДНК между двумя loxP (локус X-над P1) сайтов. Cre / жидкий кислород система не требует каких-либо кофакторов. LoxP последовательности содержат различные сайты связывания для рекомбиназ Cre, которые окружают ядро ​​направленной последовательности, где рекомбинации и перестройка происходит. Когда клетки содержат loxP сайтов и выразить Cre рекомбиназы рекомбинация происходит событие. Двухцепочечной ДНК разрезается на обоих loxP сайтов Cre рекомбиназы перестроен, и лигируют («ножницы и клей"). Продукты рекомбинации событие зависит от относительной ориентации асимметричных последовательностей.

ССР технология часто используется как инструмент для исследования функции генов. Здесь интерес гена примыкает с Cre целевых сайтов loxP ("floxed"). Животные затем скрещивали с животными выражения Cre рекомбиназы под контролем тканеспецифические промоутера. В тканях, которые выражают Cre рекомбиназы он связывается с целевой последовательности и акцизов floxed гена. Контролируемые удаления гена позволяет исследовать функции генов в специфических тканях и в различных точках времени. Анализ функции гена использованием технологии ССР --- условного мутагенеза - имеет значительные преимущества по сравнению с традиционными нокауты, где ген удаления часто смертельны.

Comments

3 Comments

  1. Hi. The presentation was good and substantial. It would much good if the delicate concepts of selection are also included. Thank you. Cheers, Lopez Gilsinia Gilroy

    Reply
    Posted by: Anonymous
    May 31, 2008 - 5:54 AM
  2. request for article

    Reply
    Posted by: Anonymous
    January 13, 2010 - 7:59 AM
  3. request for the articel

    Reply
    Posted by: Anonymous
    July 8, 2010 - 4:52 PM

Post a Question / Comment / Request

You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

Usage Statistics