部位特異的リコンビナーゼ(SSR)技術の原理

Biology

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Summary

部位特異的リコンビナーゼ(SSR)技術とCre / LOX系の出現は、分子生物学における数々の進歩につながっている、そしてトランスジェニック動物での遺伝子機能を評価するための貴重なツールとしての地位を証明しています。このインタビューでは、環化リコンビナーゼ(Cre)を、どのようにこの酵素の使用は、戦略より伝統的なノックアウト比べて大きな利点を持っている条件付き変異誘発、の開発につながっていることにより部位特異的組換えのメカニズムについて説明します。

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Bucholtz, F. Principles of Site-Specific Recombinase (SSR) Technology. J. Vis. Exp. (15), e718, doi:10.3791/718 (2008).

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Abstract

部位特異的リコンビナーゼ(SSR)技術は、遺伝子の構造の操作は、遺伝子機能を探索することができますし、分子生物学の不可欠なツールとなっています。サイト固有のリコンビナーゼは異なるDNAの標的配列に結合するタンパク質です。のCre / LOXシステムは最初に1980年代にバクテリオファージに記載されていた。 Creリコンビナーゼは、2つのloxP(X -オーバーP1の軌跡)サイト間でDNAの部位特異的組換えを触媒するタイプIトポイソメラーゼです。のCre / LOXシステムは補助因子を必要としません。 loxP配列は、組換えや再配置が行われる方向コア配列を囲むのCREリコンビナーゼのための別個の結合部位が含まれています。細胞がloxP部位部位を含有し、Creリコンビナーゼを表現するときに、組換えイベントが発生します。二本鎖DNAは、Creリコンビナーゼにより両方つのloxP部位で切断再配置、および("はさみと糊")連結されている。組換え事象の製品は、非対称のシーケンスの相対的な向きに依存する。

SSR技術は頻繁に遺伝子機能を探索するためのツールと​​して使用されます。ここに目的の遺伝子がCreを標的部位loxP部位("floxed")と並んでいる。動物は、組織特異的プロモーターの制御下にCreリコンビナーゼを発現している動物と交配されています。 Creリコンビナーゼを表現する組織では、標的配列に結合し、floxed遺伝子を消費税。制御された遺伝子の欠失は、特定の組織内および異なる時点での遺伝子機能の調査を可能にします。 SSRテクノロジー---条件付き変異導入を用いて遺伝子機能の解析 - 遺伝子の欠失が頻繁に致命的である伝統的なノックアウト比べて大きな利点があります。

Comments

3 Comments

  1. Hi. The presentation was good and substantial. It would much good if the delicate concepts of selection are also included. Thank you. Cheers, Lopez Gilsinia Gilroy

    Reply
    Posted by: Anonymous
    May 31, 2008 - 5:54 AM
  2. request for article

    Reply
    Posted by: Anonymous
    January 13, 2010 - 7:59 AM
  3. request for the articel

    Reply
    Posted by: Anonymous
    July 8, 2010 - 4:52 PM

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