一个现场的固定化酵母细胞可视化的快速技术

Biology

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Summary

一个快速增长的固定化酵母细胞的可视化技术,在这里沉默交配位点HML和HMR的荧光灯记者

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Zawadzki, K., Broach, J. A Rapid Technique for the Visualization of Live Immobilized Yeast Cells. J. Vis. Exp. (1), e84, doi:10.3791/84 (2006).

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Abstract

我们在座的一个epifluorescence显微镜日益增长的酵母细胞固定化和可视化的简单,快速,和极其灵活的技术。该技术同样适用于静态的酵母种群,或时间制课程实验达10个小时的长度可视化。我的显微镜调查在沉默交配基因在酿酒酵母中的后生继承。有两个位点的沉默交配,HML和HMR的,通常不会表达,因为它们是在异包装的。在sir1突变的背景沉默减弱等,每个座位可以表达或沉默的后生状态,所以在人口作为一个整体有一个HML和HMR的后生国家不同的细胞混合。我的显微镜证明在单个细胞之间的HML和HMR的后生状态,没有关系。 sir1细胞随机开关后生国家,建立在先前表示的轨迹沉默或表达了先前沉默的轨迹。我的时间当然显微镜跟踪个人sir1细胞和他们的后代将比分四种可能的后生开关频率,因此每个sir1细胞后生国家的稳定。也许等。分子。细胞2006年。

Protocol

  1. 时间当然epifluorescence显微镜固定化细胞。请注意,这个协议是唯一有用的,如果您的显微镜物镜低于显微镜阶段。

  2. 在液体介质中的浓度所需的位置细胞长盖玻片(大约24x50mm)

  3. 切割的一种人工合成的介质板(这些具有较低的自体荧光)和地点在细胞所需的大小的琼脂块。广场一侧的镊子处理与细胞接触的琼脂块。

  4. 对于较短时间的课程(最多3个小时),这个成立就足够了。如果细胞是动时,在显微镜观察,减少细胞或增加面积的琼脂块的体积。

  5. 对于更长的时间课程,放在琼脂块上下降了新鲜的液体介质,并将其置于载玻片上的琼脂块的顶部。这张幻灯片减少通过琼脂块顶部的蒸发。如果需要,可以用凡士林密封,以进一步减少水分与盖玻片接触的琼脂块的边缘。我已经使用这个设置为电影长达9小时长,与野生型速率分裂的细胞。

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Discussion

这是一种快速的技术,无法移动,酵母细胞中,而仍然允许增长。我们遵循长达十几个小时的酵母生长,与酵母在整个实验过程中显示野生型分工率。请注意,此安装需要的物镜显微镜下面的阶段。

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Acknowledgements

我们要感谢他们的帮助皮特休斯敦和尤金妮亚徐。

References

  1. Forthcoming.

Comments

1 Comment

  1. This is interesting. Is it possible somehow in this setup to apply a chemical and watch in real time the response? Is there a way to wash away the chamical and monitor the live cells without altering their positions?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    June 13, 2009 - 8:40 AM

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