一个现场的固定化酵母细胞可视化的快速技术

Published 11/09/2006
1 Comment
  CITE THIS  SHARE 
Biology

Your institution must subscribe to JoVE's Biology section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

Welcome!

Enter your email below to get your free 10 minute trial to JoVE!





By clicking "Submit", you agree to our policies.

 

Summary

一个快速增长的固定化酵母细胞的可视化技术,在这里沉默交配位点HML和HMR的荧光灯记者

Cite this Article

Copy Citation

Zawadzki, K., Broach, J. A Rapid Technique for the Visualization of Live Immobilized Yeast Cells. J. Vis. Exp. (1), e84, doi:10.3791/84 (2006).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

我们在座的一个epifluorescence显微镜日益增长的酵母细胞固定化和可视化的简单,快速,和极其灵活的技术。该技术同样适用于静态的酵母种群,或时间制课程实验达10个小时的长度可视化。我的显微镜调查在沉默交配基因在酿酒酵母中的后生继承。有两个位点的沉默交配,HML和HMR的,通常不会表达,因为它们是在异包装的。在sir1突变的背景沉默减弱等,每个座位可以表达或沉默的后生状态,所以在人口作为一个整体有一个HML和HMR的后生国家不同的细胞混合。我的显微镜证明在单个细胞之间的HML和HMR的后生状态,没有关系。 sir1细胞随机开关后生国家,建立在先前表示的轨迹沉默或表达了先前沉默的轨迹。我的时间当然显微镜跟踪个人sir1细胞和他们的后代将比分四种可能的后生开关频率,因此每个sir1细胞后生国家的稳定。也许等。分子。细胞2006年。

Protocol

  1. 时间当然epifluorescence显微镜固定化细胞。请注意,这个协议是唯一有用的,如果您的显微镜物镜低于显微镜阶段。

  2. 在液体介质中的浓度所需的位置细胞长盖玻片(大约24x50mm)

  3. 切割的一种人工合成的介质板(这些具有较低的自体荧光)和地点在细胞所需的大小的琼脂块。广场一侧的镊子处理与细胞接触的琼脂块。

  4. 对于较短时间的课程(最多3个小时),这个成立就足够了。如果细胞是动时,在显微镜观察,减少细胞或增加面积的琼脂块的体积。

  5. 对于更长的时间课程,放在琼脂块上下降了新鲜的液体介质,并将其置于载玻片上的琼脂块的顶部。这张幻灯片减少通过琼脂块顶部的蒸发。如果需要,可以用凡士林密封,以进一步减少水分与盖玻片接触的琼脂块的边缘。我已经使用这个设置为电影长达9小时长,与野生型速率分裂的细胞。

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

这是一种快速的技术,无法移动,酵母细胞中,而仍然允许增长。我们遵循长达十几个小时的酵母生长,与酵母在整个实验过程中显示野生型分工率。请注意,此安装需要的物镜显微镜下面的阶段。

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Acknowledgements

我们要感谢他们的帮助皮特休斯敦和尤金妮亚徐。

References

  1. Forthcoming.

Comments

1 Comment

  1. This is interesting. Is it possible somehow in this setup to apply a chemical and watch in real time the response? Is there a way to wash away the chamical and monitor the live cells without altering their positions?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    June 13, 2009 - 8:40 AM

Post a Question / Comment / Request

You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

Video Stats