Denne videoen beskriver en tradisjonell, platebasert metode for å måle levetiden til C. elegans. Eksempelprotokollen måler levetiden til ormer behandlet med RNAi.
Protocol
Følgende protokoll er et utdrag fra Cornwell et al, The Replica Set Method: A High-throughput Approach to Quantitatively Measure Caenorhabditis elegans Lifespan, J. Vis. Exp. (2018). 1. Forhindre avkomproduksjon ved tilsetning av 5-Fluoro-2′-deoksyuridin (FUdR) Dyr dyr til L4 stadium ved 20 °C. Kontroller om synkroniserte dyr har ut…
Representative Results
Figur 1: Den tradisjonelle metoden og replikasettet for å skåre C.elegans levetid (A). Den tradisjonelle metoden for å score C. elegans levetid. Flere små synkroniserte populasjoner av isogene dyr per tilstand følges over tid. Den samme populasjonen av dyr følges gjennom hele studiekurset. Levedyktighet vurderes ved bevegelse, som kan stimuleres a…
Materials
FuDR (5-Fluoro-2'-deoxyuridine)
Alfa Aesar
L16497
24 Well Culture Plates
Greiner Bio-One
#662102
600 µL 96-well plates
Greiner Bio-One
#786261
2mL 96-well plates
Greiner Bio-One
#780286
96-pin plate replicator
Nunc
250520
C. elegans RNAi clone library in HT115 bacteria- Ahringer
Source Bioscience
C. elegans RNAi Collection (Ahringer)
See also Kamath et. al, Nature 2003.
C. elegans RNAi clone library in HT115 bacteria- Vidal
Source Bioscience
C. elegans ORF-RNAi Resource (Vidal)
See also Rual et. al, Genome Research 2004. This library is also available from Dharmacon.