Abstract
Kilde: Cornwell, A.B., et al. Replikasætmetoden: En tilgang med høj overførselshastighed til kvantitativ måling af caenorhabditis elegans levetid. J. Vis. Exp. (2018).
Denne video beskriver en traditionel, pladebaseret metode til måling af levetiden for C. elegans. Eksempelprotokollen måler levetiden for orme, der er behandlet med RNAi.
Protocol
Følgende protokol er et uddrag fra Cornwell et al, The Replica Set Metode: En high-throughput tilgang til kvantitativt Foranstaltning Caenorhabditis elegans Levetid, J. Vis. Exp. (2018). 1. Forebyggelse af afkomproduktion ved tilsætning af 5-Fluoro-2′-deoxyuridin (FUdR) Dyr dyrkes indtil L4-trin ved 20 °C. Kontroller, om synkronise…
Representative Results
Figur 1: Den traditionelle og replikasætmetoden til scoring af C.elegans levetid (A). Den traditionelle metode til at score C. elegans levetid. Flere små synkroniserede populationer af isogene dyr pr. Tilstand følges over tid. Den samme population af dyr følges under hele forsøgsforløbet. Levedygtighed vurderes ved bevægelse, som kan stimuleres …
Materials
| FuDR (5-Fluoro-2'-deoxyuridine) | Alfa Aesar | L16497 | |
| 24 Well Culture Plates | Greiner Bio-One | #662102 | |
| 600 µL 96-well plates | Greiner Bio-One | #786261 | |
| 2mL 96-well plates | Greiner Bio-One | #780286 | |
| 96-pin plate replicator | Nunc | 250520 | |
| C. elegans RNAi clone library in HT115 bacteria- Ahringer | Source Bioscience | C. elegans RNAi Collection (Ahringer) | See also Kamath et. al, Nature 2003. |
| C. elegans RNAi clone library in HT115 bacteria- Vidal | Source Bioscience | C. elegans ORF-RNAi Resource (Vidal) | See also Rual et. al, Genome Research 2004. This library is also available from Dharmacon. |
| L4440 Empty Vector Plasmid | Addgene | 1654 | https://www.addgene.org/1654/ |
Cite This Article
Lifespan Analysis: Measuring C. elegans Longevity. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20155, doi: (2023).