Summary
여기 신생아 capsaicin 치료 쥐 및 아 토 피 성 피부염에 포름알데히드 흡입의 효과 조사 하기 위해 증발된 포름알데히드의 노출에 아 토 피 성 피부염을 유발 하는 방법을 설명 합니다.
Abstract
아 토 피 성 피부염 만성 습 진 pruritic 돌아가는 하 고 선진국에서 특히 세계 통용 한다. 유전과 환경 요인 사이의 복잡 한 상호 작용으로 아 토 피 성 피부염의 병 태 생리학에 중요 한 역할을 알려져 있습니다. 그러나, 우리는 여전히이 질환의 pathogenesis의 상세한 그림을 부족합니다. 따라서, elucidating 아 토 피 성 피부염의 진행에 대 한 적절 한 동물 모델을 개발 하는 중요성의 이다. 또한, 질병의 이해를 확장 하는 아 토 피 성 피부염에 공기 오염 물질 같은 환경 요인의 영향을 조사 합니다. 여기, 우리가 쥐 신생아 capsaicin 치료와 아 토 피 성 피부염 및 유아 및 청소년 아 토 피 성 피부염의 개발에 대 한 효과 나타내기 위해 쥐 포 름 알 데히드의 일정 농도의 노출에 대 한 프로토콜을 유도 하는 방법 설명 기간입니다. 이러한 프로토콜 성공적으로 여러 실험에 적용 되 고 다른 물질에 사용할 수 있습니다.
Introduction
아 토 피 성 피부염 (광고) 진행에 포름알데히드 (FA) 흡입의 효과가 우리 광고 유도 대 한 프로토콜을 설치 하 고 FA의 만성 노출에 대 한 기존의 순환 챔버 개발.
광고는 유전과 환경 트리거1,2사이 복잡 한 상호 작용에 기인 하는 만성 염증 성 피부 질병입니다. 적절 한 동물 모델은 전 임상 상태에서 광고를 공부 해야 합니다. 이 때 가장 중요 한 환경 요인의 영향 아래 광고의 pathogenesis elucidating. 또한, 더 나은 광고 진행에 환경 트리거 효과 조사, 개별 환경 요소를 분리 하 여 노출의 정도 계량 필수적 이다.
우리는 신생아 capsaicin 처리에 의해 유도 하는 광고의 새로운 쥐 모델을 증명 하고있다. 이 광고 모델3 epicutaneous 아니라, 유전자 조작 광고 모델, 광고4의 자발적인 마우스 모델에 의해 유도 된 광고 모델 같은 다른 광고 모델을 통해 몇 가지 장점이 있다. 첫째,이 모델은 유아 광고에 해당 광고의 다른 자연 스러운 마우스 모델 보다 이전 NC/Nga 마우스 같은 3 주의 나이에 광고와 같은 증상을 개발 합니다. 경우에 따라 유전자 조작 광고 모델과 달리 광고 모델의 증상 가시고 고 20 주 기간 동안 자발적으로 재발. 또한, 모델에서 광고 같은 증상의 유도 과정 더 유도 과정의 관점에서 알레르기 접촉 피부염과 유사한 epicutaneous 민감성 모델 보다 쉽습니다.
우리는 유아 및 청소년 시기에 광고의 개발에 FA 흡입의 효과 공부 하는 아크릴 유리 챔버와 기존의 의료 산소 레 귤 레이 터5 를 사용 하 여 동물 모델에 FA 노출에 대 한 새로운 프로토콜을 도입 했습니다. 레 귤 레이 터는 동물의 가스 흐름 율을 조정 하 여 일정 농도 솔루션 농도에 노출 수 있었습니다. 이전 연구는 동물 모델에 FA의 노출의 여러 가지 방법으로 보고 있다. Xu 그 외 는 FA에 솔루션 직접 피부6에 적용 된 노출 메서드를 설명 합니다. 또 다른 최근 연구는 FA 가스 노출 모델 49127전문된 휘발성 용 매 생성기를 사용 하 여 프로토콜을 해결. 이전 연구의 방법에 비해, 새로운 방법을 더 쉽게 장착 하 고 FA 이외에 다른 솔루션에 적용할 수 있습니다.
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Protocol
여기에서 설명한 모든 방법을 승인 국제 동물 관리 및 사용 위원회 (IACUC)의 한국 대학 대학의 약. 생 후 6 주, 경험 enthansasia를 유발 하 고 수집할 수 있습니다 피부와 쥐의 혈 청 등 다양 한 샘플.
1. 신생아 Capsaicin 치료에 의해 광고의 유도
- 준비 5 mg/mL capsaicin 솔루션, 1 mL 트윈 80의 그리고 100% 에탄올 15 mL 원뿔 튜브에의 1 mL에 capsaicin의 50 밀리 그램을 추가.
- 원뿔 튜브에 정상적인 염 분의 8 mL를 추가합니다. 분리 된 레이어가 없는 볼 수 있습니다 때까지 튜브를 적극적으로 악수
- 중간 및 신생아 Sprague-Dawley 쥐의 목에의 뒷면에 피하 조직에 주입 capsaicin 솔루션 (10 µ L/g).
- 제공 (중요) 출생 후 48 h 12 h 사이 capsaicin.
참고: 주사 몇 일 지연 되는 경우 피부염 개발 하지 것입니다 또는 그것은 몇 주 동안에만 지속 됩니다. 주사는 너무 일찍, 호흡 곤란 심한 통증으로 인해 발생할 수 있습니다. - Capsaicin 주입으로 인해 호흡기 체포에서 신생아 쥐를 방지 하기 위해 신생아 호흡을 격려 하거나 호흡 된다 정상. capsaicin 유발 통증 수 이후 때까지 산소 챔버에는 신생아를 유지의 가슴을 밀어 호흡 억제, 전신 마 취를 추가 가능 하 게 호흡 어려움을 악화 수 있습니다. 따라서, 경험 하지 사용 해야 anesthesics 쥐의 생존을 증가.
- 제공 (중요) 출생 후 48 h 12 h 사이 capsaicin.
2. 소 양 증 및 피부염 광고의 쥐 모델에서의 평가
- 자발적인 긁 동작을 계산 하 여 소 양 증의 측정
- 준비 플라스틱 챔버 (20 cm x 30 cm x 20 cm) 전체 범위에 대 한 수 있도록 거울 장착 보기 및 호흡을 쥐 수 있도록 구멍.
- 설정 하 고 제대로 미러와 쥐의 전면 보기를 동시에 기록 하는 디지털 비디오 카메라를 조정.
- 플라스틱에 장소 쥐 챔버와 오프닝에서 방지 하기 위해 무거운 개체와 챔버의 천장 커버.
- 1 시간에 대 한 쥐의 자발적인 행동을 기록, 비디오 클립을 재생 하 고 긁는 행동의 수를 계산.
- 득점 시스템을 사용 하 여 피부 장애의 평가
- 유도 실에서 쥐를 놓습니다.
- 2 L/min에 산소 유량 계 설정 유량과 마 취에 대 한 3 %isoflurane 기화 기 조정.
- 범위와 귀와 쥐의 다른 부분에 피부염의 심각도 식별.
- 0.25 c m 2와 다음 표 1에 의해 피부 장애의 심각도로 피부 장애의 정도 대 한 단위 크기 정의: 심각도 인덱스; 정도의 범위와 심각도 곱하여 피부염 점수 (피부염에 점수를 보고 < 강력한 클래스 "xfig" = > 그림 1B).
3. 동물에 가스 FA의 노출
- 흡입 챔버의 준비
- 아크릴 유리 상자 준비 (55 cm x 40 cm x 35 cm) 반대편에 2 개의 출구는.
- 주의입니다. FA 가스의 순환, 입구 보다 출구를 배치 하 고 콘센트의 크기는 입구의 그것 보다 더 큰 게.
- 주의입니다. 내부 가스 농도 콘센트의 또 다른 측면에서의 측정에 대 한 폐쇄가 될 수 있는 3 개의 작은 구절 드릴.
- 연결 튜브를 두 콘센트입니다. 순환 후드 나 가스의 방출에 대 한 건물 외부 콘센트 튜브를 놓고 의료 산소 레 귤 레이 터에 다른 콘센트 튜브를 연결.
- 아크릴 유리 상자 안에 기존의 쥐 감 금 소를 배치.
- 5 주 (2 시간/일 및 5 일/주)에 대 한 출생 후 1 주일에서 쥐를 케이지에 넣어.
- 아크릴 유리 상자 가스 누설을 방지 하기 위해 가능한 한 단단히 밀봉.
참고: 꽉 씰링에 대 한 챔버 뚜껑 고무를 포함 해야 합니다. 집착 영화 꽉 밀봉 챔버 포장 적용.
- 의료 산소 레 귤 레이 터를 사용 하 여 기체 FA의 세대
- 물 1 L에 FA의 5 g을 분해.
- 가습기 병 의료 산소 레 귤 레이 터의 0.5 %FA 솔루션을 넣어.
- 레 귤 레이 터에 입구 관을 연결한 후는 레 귤 레이 터 설정 하 고 5 L/분에 흐름 속도 설정
- 솔루션 농도 및 약 실에 있는 가스의 농도 결정 하기 위해 유량 조정.
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Representative Results
나이의 7 주에서 capsaicin 치료 광고 쥐 모델의 광고 같은 피부 염증 그림 1A에 제공 됩니다. Capsaicin 치료 광고 쥐 모델의 강력한 긁 동작 비디오 1에 표시 됩니다. 신생아 capsaicin 치료 elicited 피부염 악화 긁힘 행동 쥐의 나이, 3 주 및 광고와 같은 증상이 몇 주 (그림 1B, C)에 대 한 유지. 정도 덜 심각한, 하지만 일부 쥐의 초기 광고 같은 증상 (그림 1D)의 후 나이 16 주에 재발 피부염에서 고통. 또한, 혈 청 IgE 수준, 광고 심각도8에 대 한 생물 학적 마커 인 capsaicin 치료 광고 쥐 모델 (그림 1E)에서 상승 했다. IL-4, IL-13 mRNA 표현 또한 광고 capsaicin 치료 쥐 모델 (그림 1 층, G)에서 증가 했다.
대표 사진 FA (그림 2A) 나이의 5 주에서 capsaicin 치료 광고 쥐 모델에 피부염의 악화를 유발 했다. 1.2 ppm FA의 노출 2 주 이상에 대 한 긁 적 행동과 capsaicin 치료 광고 쥐 모델에 피부염을 악화. 그러나, 0.8 ppm FA 노출 긁 행동과 광고 capsaicin 치료 쥐 모델 (그림 2B, C)에 피부염 악화 하지 않았다. 또한, 1.2 ppm FA 노출 높은 혈 청 IgE 수준 광고 capsaicin 치료 쥐 모델 (그림 2D).
대 한 가스 FA의 노출, 환기 약 실이 프로토콜 (그림 3A)에 설명 된 대로 설정 했다. 노출, 전에 챔버에 FA의 농도 일관 된 농도의 보증에 대 한 반복적으로 측정 했다. FA 용액의 농도 변경할 때 챔버에서 가스 FA의 농도 측정 했다. 솔루션의 농도 증가, 천천히 증가 하는 약 실에 있는 가스의 농도 같은 솔루션에서 약 실에 있는 가스의 농도 않았다 하지 다 크게 반복된 측정 (그림 3B).
그림 1: 신생아 Capsaicin 치료 유도 재발 광고 같은 피부 염증과 소 양 증 쥐에. Capsaicin 치료 쥐 (A)에서 피부 염증의 대표 사진. 피부염 (B) 및 capsaicin 치료 쥐의 긁 동작 (C)의 연대기 특징. 16 주 된 capsaicin 치료 쥐 (D)의 재발 피부 장애의 대표적인 이미지입니다. (E) capsaicin 치료 동물의 혈 청 IgE 수준 중요 한 상승 (F) capsaicin 치료 동물에서 IL-4 mRNA 식 중요 한 상승 (G) capsaicin 치료 동물에 IL 3 mRNA 식 중요 한 상승 모든 결과 ± sem의 수단으로 표현 했다 고 스튜던트 t-검정을 사용 하 여 분석. *p < 0.05, * * p < 0.005, * * *p < 0.001. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
그림 2: FA 노출 격화 소 양 증 및 피부염 Capsaicin 치료 광고 쥐 모델에서. 1.2 ppm 및 0.8 ppm FA (A)를 사용 하 여 치료의 5번째 주의 대표 사진. 1.2 ppm, FA의 노출 하지만 하지 0.8 ppm FA 노출, 크게 악화 pruritus (B) 및 capsaicin 치료 광고 모델에 피부염 (C). 혈 청 IgE 수준 증가 capsaicin 치료 광고 쥐 모델에서 1.2 ppm FA 노출 (D)으로 치료. 결과 ± SEM을 의미 하 고 일방통행 ANOVA Tukey의 테스트 또는 스튜던트 t-검정을 사용 하 여 분석으로 표현 되었다. *p < 0.05, * * *p < 0.001 (신선한 공기에 노출 되는 대 쥐). 1.2 FA-광고: Capsaicin 치료 광고 쥐 모델 노출 1.2 ppm FA; 0.8 FA-광고: Capsaicin 치료 광고 쥐 모델 노출 0.8 ppm FA; 그리고 공기 광고: 신선한 공기에 노출 되는 광고 쥐 모델 capsaicin 취급. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
그림 3: FA 치료. 회로도 레 귤 레이 터 및 가스 실 (A)의 그림. 약 실에 있는 가스 FA의 농도 FA 솔루션 (B)의 농도에 비례 했다. 결과 ± SEM. 수단으로 표현 되었다 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
비디오 1: 측정의 Pruritus Capsaicin의 긁 기 행동 치료 쥐의 관찰 기록. 이 비디오를 보려면 여기 클릭 하십시오 (다운로드 오른쪽 클릭.)
| 지역 | 점수 | 설명 |
| 귀를 제외 하 고 | 0 | 정상 |
| 1 | 작게 묶은 모피 | |
| 2 | 탈모 증 또는 플레어 | |
| 3 | 출혈 또는 딱지가 | |
| 귀 | 0 | 정상 |
| 1 | 플레어 | |
| 2 | 출혈 또는 딱지가 | |
| 3 | 조직의 손실 |
표 1: 심각도 인덱스.
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Discussion
쥐에서 광고 같은 증상의 유도 대 한 여기에 설명 된 프로토콜 광고 이상 공부에 대 한 적응 고 약물 검사에 대 한 심사 도구로 사용 될 수 있습니다. Capsaicin 치료 쥐 기체 FA의 노출에 대 한 악기는 다양 한 동물 모델에 다양 한 가스에 노출의 효과 평가 하기 위해 적용할 수 있습니다.
신생아 capsaicin 치료 광고 모델 다른 아 토 피는 DNCB 치료 모델9 및 epicutaneous 민감성 모델4, 모델 보다는 더 간단한 절차에 의존 하며 NC/Nga 마우스4보다 더 저렴 한 가격 이다. 광고 모델의 광고 같은 증상의 발현은 일치 합니다. 또한, 일부의 경우,이 프로토콜3어떤 추가 치료 없이 영향을 받는 쥐에 자발적인 재발 광고 같은 피부 병 변 elicits. 과량 capsaicin 주입 신경 세포 죽음과 neurocutaneous 염증10 을 갖는 고 쥐에 심한 통증을 발생. 그들 중 일부는 가능성이 고통 인해 호흡기 체포에서 고통. 그것은 호흡기 체포에서 그들을 방지 하기 위해 중요 합니다. 따라서, capsaicin 주입 후 새끼 산소 챔버에 배치 해야 하 고 일부 새끼 가슴 압축을 요구할 수 있습니다 키를 누릅니다. 신생아 capsaicin 치료 쥐, 광고와 같은 증상을 유도 하지 않습니다 그리고 이것을 위한 원인은 아직도 알려져 있다. 따라서, 유전자 개입 거의 노크 아웃 긴장을 사용 하 여이 광고 모델에 적용 됩니다 하지만 siRNA 등 다른 유전 접근은 듯이 단점에 대 한 보상. 또한, 쥐 모델의 광고 같은 증상의 일관 된 형상 광고 질병 병 인, 공부 뿐만 아니라 마약 검사 도구에 적용에 대 한 도움이 됩니다.
FA 노출에 대 한 순환 챔버의 설립에는 기존 실험실 장비를 아크릴 상자 등 의료 산소 레 귤 레이 터만 필요 합니다. 또한, 산소 레 귤 레이 터의 가습기 병에 솔루션을 변경 하 여 다양 한 유형의 가스 실험에 적용할 수 있습니다. 약 실에 있는 가스의 농도 레 귤 레이 터의 유량과는 용액의 농도 조정 하 여 쉽게 유지할 수 있습니다. 그것은 아크릴 챔버와 의료 산소 레 귤 레이 터를 사용 하 여 capsaicin 치료 광고 쥐 모델에 FA 노출에 대 한 순환 시스템의 설치에 단단히 씰링을 보장 하기 위해 중요 한. 뿐만 아니라 때문에 약 실에 있는 가스의 농도 수 누설, 각 시간이 다르지만 또한 새 가스는 경험을 해칠 수 있다. 종종 일부 휘발성 유기 화합물 (VOC)의 증발 결정 화에 의해 튜브를 차단합니다. 따라서, 그것은 튜브를 정기적으로 교체 하 여 장기간 사용에 대 한 지속적인 관 관리를 통해 막힘 방지 관련이 있다입니다. 이 증발 시스템 보다 정확 하 게 질병 진행 환자에서 국 소 응용 프로그램 방법11보다 반영합니다. 이 방법은 순진한 동물7,12FA의 영향을 연구에 비해 광고의 쥐 모델에 FA 흡입의 효과의 고유 기능을 공개 했다.
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Disclosures
저자는 공개 없다.
Acknowledgments
이 연구는 공공 복지 지원 했다 & 안전 연구 프로그램을 통해 국가 연구 재단의 한국 (NRF) 자금과 교육, 과학 및 기술 (NRF-2014M3C8A5030612), 정 양, 차 영에 의해 지원 태양, MD 및 장 안녕 주 여 Sa 기념 기금.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Medical Oxygen Regulator | Yuyao Jiahua Medical | manufacturer will not affect results | |
| Tube | manufacturer will not affect results | ||
| Acrylic Chamber | Taejin Acryl | manufacturer will not affect results | |
| Plastic Chamber | Taejin Acryl | manufacturer will not affect results | |
| Paraformaldehyde, powder | Sigma | 158127 | manufacturer will not affect results |
| Wrap filme | Uniwrap | manufacturer will not affect results | |
| Capsaicin | Sigma | M2028 | manufacturer will not affect results |
| Tween 80 | Sigma | P4780 | manufacturer will not affect results |
| Digital Video Camera | Sony | HDR-CX380y | manufacturer will not affect results |
| Isoflurane | JW pharmaceutical | manufacturer will not affect results |
References
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