Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Immunology and Infection
Click here for the English version

Immunology and Infection

COVID-19 ile İlişkili Orta Kulak Patolojisinin Değerlendirilmesi için Yüksek Hızlı İnsan Temporal Kemik Kesiti

Published: May 18, 2022 doi: 10.3791/64012
Automatic Translation
1, 2, 3, 1
1Department of Otolaryngology - Head & Neck Surgery, Johns Hopkins University School of Medicine, 2W. Harry Feinstone Department of Molecular Microbiology and Immunology, Johns Hopkins University Bloomberg School of Public Health, 3Department of Pathology, Johns Hopkins University School of Medicine

Summary

Bu makalede, temporal kemik immünohistokimyasının hızlı dekalsifikasyonu ve analizi için ince dilimler oluşturmak üzere ikiz elmas bıçaklı bir mikro testere kullanan hızlı insan temporal kemik kesitleme tekniği açıklanmaktadır.

Abstract

İnsan temporal kemik kesitlerinin histopatolojik analizi, iç ve orta kulak patolojisini incelemek için temel bir tekniktir. Temporal kemik kesitleri postmortem temporal kemik hasadı, fiksasyon, dekalsifikasyon, gömme ve boyama ile hazırlanır. Temporal kemiğin yoğunluğu nedeniyle, dekalsifikasyon zaman alıcı ve kaynak yoğun bir işlemdir; tam doku hazırlığı ortalama 9-10 ay sürebilir. Bu, otopatoloji araştırmalarını yavaşlatır ve COVID-19 pandemisiyle ilgili olanlar gibi zamana duyarlı çalışmaları engeller. Bu yazıda, doku işlemeyi hızlandırmak için temporal kemik kesitlerinin hızlı hazırlanması ve kireçlenmesi için bir teknik anlatılmaktadır.

Temporal kemikler standart teknikler kullanılarak postmortem olarak toplandı ve% 10 formalin ile sabitlendi. Her bölümü üç kalın bölüme ayırmak için ikiz elmas bıçaklı hassas bir mikro testere kullanıldı. Kalın temporal kemik kesitleri daha sonra parafine gömülmeden önce 7-10 gün boyunca kireç çözücü çözeltide dekalsifiye edildi, bir kriyotom kullanılarak ince (10 μm) bölümlere ayrıldı ve yüksüz slaytlara monte edildi. Doku örnekleri daha sonra deparafinize edildi ve antikor boyama (ACE2, TMPRSS2, Furin) için rehidre edildi ve görüntülendi. Bu teknik, hasattan doku analizine kadar geçen süreyi 9-10 aydan 10-14 güne indirdi. Yüksek hızlı temporal kemik kesitleme, otopatoloji araştırmalarının hızını artırabilir ve doku hazırlığı için gerekli kaynakları azaltabilirken, COVID-19 ile ilgili olanlar gibi zamana duyarlı çalışmaları da kolaylaştırabilir.

Introduction

İnsan temporal kemik araştırması, iç ve orta kulağın patolojisini ve patofizyolojisini incelemek için paha biçilmez bir kaynak sağlar. 19. yüzyıldan önce, otolojik hastalık 1,2,3 hakkında çok az şey biliniyordu. Otolojik hastalığı daha iyi anlamak ve "işitsel cerrahiyi şarlatanların elinden kurtarmak" için Joseph Toynbee (1815-1866), insan temporal kemiğinin histolojik bölümlerini incelemek için yöntemler geliştirdi3. Bu çalışma, Viyana'da ve 19. yüzyılın geri kalanında Avrupa'daki diğer kişilerde Adam Politzer (1835-1920) tarafından ilerletildi ve kulak 2,3,4'ü etkileyen birçok yaygın durumun histopatolojisini tanımlamak için temporal kemik kesitlerini kullandı.

Amerika Birleşik Devletleri'ndeki ilk insan temporal kemik laboratuvarı, Stacy Guild'in (1890-1966)temporal kemik kesiti 5,6 için yöntemler geliştirdiği Johns Hopkins Hastanesi'nde 1927'de açıldı. Guild tarafından geliştirilen yöntemler, ölüm sonrası hasat, fiksasyon, nitrik asitte kireçlenme, etanolde dehidrasyon, celloidin gömme, kesitleme, boyama ve montajı içeren 9-10 aylık bir süreçten oluşuyordu. Bu teknikte değişiklikler daha sonra Harold Schuknecht (1917-1996)7 tarafından yapılmıştır; Bununla birlikte, bu sürecin temel bileşenleri esasen değişmeden kalır.

Bir temporal kemik laboratuvarını sürdürmek için gereken önemli kaynaklar, temporal kemik araştırması için bir zorluk oluşturmuş ve muhtemelen son 30 yılda azalan popülaritesine katkıda bulunmuştur 4,8. Temporal kemik laboratuar kaynaklarının önemli bir kısmı 9-10 aylık temporal kemik preparasyonu sürecine ayrılmalıdır. Hazırlıkta en çok zaman alan adımlardan biri, insan vücudundaki en yoğun kemik olan temporal kemiğin kireçlenmesidir. Dekalsifikasyon tipik olarak nitrik asit veya etilendiamintetraasetik asit (EDTA) içinde gerçekleştirilir ve çözeltilerin sık sık değiştirilmesini gerektirirken haftalar ila aylar sürer 7,9. Ayrıca, COVID-19 pandemisi ile ilgili olanlar gibi insan kulağının zamana duyarlı çalışmaları, bu yavaş hazırlık süreci tarafından engellenebilir. Bu yazıda, temporal kemik hasadından sonraki 10-14 gün içinde hızlı dekalsifikasyon ve doku analizine izin veren kalın kesitler oluşturmak için elmas mikro testere kullanan yüksek hızlı temporal kemik kesitleme tekniği açıklanmaktadır.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

Bu protokol IRB (IRB00250002) onayı ile ve insan dokusu ve enfeksiyöz materyal kullanımına yönelik kurumsal politikalara uygun olarak geliştirilmiştir. Her temporal kemik donörü ölümden önce yazılı onay verdi veya doğumdan sonra donörün ailesinden onay alındı. Bu protokolde kullanılan tüm malzemeler, ekipmanlar ve yazılımlar hakkında ayrıntılar için Malzeme Tablosu'na bakın.

1. Temporal kemik hasadı

  1. Bu protokolü kullanmadan önce yerel kurumsal inceleme kurulu (IRB) kurulu onayını alın, insan ve bulaşıcı materyallerin kullanımı için kurumsal politikaları gözden geçirin ve doku bağışı için onay alın.
  2. COVID-19 pozitif temporal kemik bağışçılarından gelen dokularla çalışmadan önce uygun kişisel koruyucu ekipman (KKD) takın. KKD'nin bir N-95 solunum cihazı ve yüz siperliği (veya alternatif olarak pozitif basınçlı hava temizleme sistemi), önlük ve iki çift eldivenden oluştuğundan emin olun. Bu protokole başlamadan önce KKD'yi düzgün bir şekilde takma ve çıkarma tekniklerini gözden geçirin10.
  3. Donör ölümünden sonraki 12-24 saat içinde temporal kemik dokusunu toplayın. Vücut soğutulmamışsa, hasatın ölümden sonraki 8 saat içinde gerçekleştiğinden emin olun.
    1. Otopsi sırasında osteotom7 ile dört kesi, blok yöntemi kullanılarak temporal kemiklerin toplanması.
      1. Kraniotomiden sonra, beyni çıkarın ve kraniyal sinirleri iç işitsel kanala keskin bir şekilde bölün.
      2. Osteotom ile ilk kemik insizyonunu temporal kemiğin skuamöz kısmına paralel ve sadece medial yapın.
      3. İkinci kemik kesisini temporal kemiğin medial sınırında birincisine paralel olarak yapın.
      4. Ardından, üçüncü kesiyi 3-4 cm ön ve petroz sırtına paralel yapın.
      5. Dördüncü insizyonu kabaca üçüncüye paralel, petroz sırtına 2 cm posterior yapın.
        NOT: Tüm insizyonların kafatası tabanından uzandığından emin olun.
      6. Daha sonra, numunenin alt kenarı boyunca yumuşak doku ekini serbest bırakmak için keskin diseksiyon kullanarak temporal kemiği çıkarın. Mumyalama temporal kemik hasadını takiben yapılacaksa, karotis arterin kütüğünü bağlayın.

2. Doku fiksasyonu, kireçlenme ve kesitleme

  1. Dokuyu derhal 200-300 mL% 10 tamponlu formalin (formaldehit) içine yerleştirin, böylece doku tamamen suya batırılır. Dokuyu oda sıcaklığında en az 72 saat formaldehit içinde bırakın ve çözeltileri günlük olarak değiştirin. Dokuyu hava geçirmez bir kapta saklayın ve virüsün yayılmasını önlemek için uygun KKD giyerken bir duman başlığı altında çözelti değişiklikleri yapın.
    NOT: 72 saatlik fiksasyon periyodunu takiben, örneklerin artık bulaşıcı olarak kabul edilmesine gerek yoktur.
  2. Daha hızlı doku kireçlenmesine izin vermek için her bir numuneyi üç "kalın" bölüme ayırmak için ikiz elmas bıçaklı hassas bir mikro testere kullanın. İkiz elmas bıçakları 5 mm'lik bir mesafeye ayarlayın, böylece temporal kemiğin orta kısmı 5 mm kalınlığındadır. Her iki uçtaki doku bölümlerinin 3-5 mm kalınlığında olduğundan emin olun.
  3. Kalın kesitleri, doku parafin gömme için yeterince yumuşak olana kadar, oda sıcaklığında 7-10 gün boyunca% 23 w / w formik asit kireç çözücü çözeltinin 200-300 mL'sine yerleştirin. Çözümleri günlük olarak değiştirin. Yumuşak hissetmesi gereken numuneyi palpe ederek yeterli doku dekalsifikasyonunu kontrol edin.
    NOT: Dekalsifikasyon röntgen ile de doğrulanabilir.
  4. Numuneleri, akan musluğun altındaki büyük bir beherin içine yerleştirerek 24 saat boyunca akan musluk suyunda durulayın.
  5. Dokuyu artan konsantrasyonda bir dizi alkolde dehidrateedin 7. Dokuyu 1.5 saat boyunca 100-200 mL% 70 etanol içine batırın, ardından sırasıyla% 95'te üç yıkama ve% 1.5 saat boyunca% 100 etanol ile yıkayın. Daha sonra, dokuyu 3 x 1,5 saat Ksilen içinde yıkayın.
  6. Kalın bölümleri parafine yerleştirin, her biri 45 dakikalık dört işlemle.
  7. İnce (10 μm) bölümleri kesmek için bir kriyotom kullanın. Dokuyu, doku eksenel düzlemde kesilecek şekilde konumlandırın. İsterseniz daha kalın (20 μm) kesitler kesin.

3. İmmünohistokimya ve görüntüleme

  1. Geleneksel hematoksilin ve eozin boyama isteniyorsa (burada tarif edilmemiştir), bölümleri cam slaytlara monte etmeden önce boyamayapın 7.
  2. Bölümleri pozitif yüklü cam slaytlara monte edin.
  3. Kızakları sıcak bir tabakta 60 ° C'de 20 dakika pişirin.
  4. Slaytları bir tutucuya yerleştirin ve dokuyu deparafiniz, rehidratlamak ve maskesini çıkarmak için organik bir çözücü (bu durumda dietanolamin) ve etanol içeren ticari bir ön işlem çözeltisine batırın.
    NOT: Bu adım, formalin ile sabitlenmiş ve parafin gömülü doku için immünohistokimya ile tatmin edici sonuçlar elde etmek için gereklidir.
  5. Kızakları düdüklü tencerede 20 dakika boyunca yüksek basınçta ısıtın.
  6. Slaytları nemlendirilmiş bir odaya yerleştirin ve dokuyu ticari bir blokaj çözeltisi ile bloke edin.
  7. Primer antikor içeren doku kesitlerini anjiyotensin dönüştürücü enzim 2 (ACE2; 1:50), transmembran proteaz serin 2 (TMPRSS2, 1:1.000) ve Furin proteazına (1:250) karşı araştırın.
    NOT: ACE2, TMPRSS2 ve Furin antikorları kullanılır, çünkü bu proteinlerin SARS-CoV-2 enfeksiyonu11,12'de rol oynadığına inanılmaktadır ve bu protokol SARS-CoV-2'nin orta kulağı enfekte edebileceği olası mekanizmaları araştırmaya çalışmıştır13.
  8. HRP konjuge anti-tavşan sekonder antikoru (ACE2, Furin; 1:100 seyreltme) veya anti-keçi (TMPRSS2, 1:100 seyreltme) sekonder antikoru ile tedavi edin.
  9. Slaytları suda% 70 hematoksilin ile karşı lekeleyin.
  10. Monte edilmiş bir dijital kamera ile ışık mikroskobunda görüntüler elde edin. Orta kulak mukozasının ve östaki tüpünün görüntülerini sırasıyla 20x ve 10x büyütmede elde edin.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

Orta kulak mukozası ve östaki tüpünün hematoksilin ve eozin boyaması, işlem sonrasında orta kulak mukozasının ve submukozal orta kulak dokusunun korunduğunu gösterdi (Şekil 1). İmmünohistokimyasal görüntülerde orta kulak mukozası ve östaki tüpü içinde ACE2, TMPRSS2 ve Furin proteinlerinin ekspresyonu görüldü (Şekil 1). Bu proteinlerin orta kulaktaki varlığı, SARS-CoV-2'nin orta kulaktaki solunum epitelini enfekte edebileceği olası bir yol sağlar11,12,13. Ayrıca, bu proteinlerin Östaki tüpü içindeki ekspresyonu, virüsün orta kulağa girdiği ve östaki tüpü aracılığıyla nazofarenksten orta kulağa gittiği bir yolu açıklayabilir.

Figure 1
Resim 1: Lekeli orta kulak dokusu örneği. Şekil, orta kulak mukozasının hematoksilin ve eozin, ACE2, TMPRSS2 ve Furin boyamasını (üst sıra, 20x büyütme) ve Östaki tüpünü (alt sıra, 10x büyütme) göstermektedir. Ölçek çubukları = 50 μm (üst sıra); 100 μm (alt sıra). Kısaltmalar: H & E = hematoksilin ve eozin; anjiyotensin dönüştürücü enzim 2; TMPRSS2 = transmembran proteaz, serin 2. Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

İnsan temporal kemik araştırması, iç ve orta kulak patolojisini incelemek için kritik öneme sahiptir, ancak zaman ve kaynak yoğun bir çaba olmaya devam etmektedir. Bu makalede, daha fazla bölümlemeden önce hızla dekalsifiye edilebilen kalın temporal kemik kesitleri oluşturmak için elmas mikro testere kullanan bir teknik açıklanmaktadır, böylece doku hasadından çalışmaya kadar geçen süre 9-10 aydan 10-14 güne düşürülebilir. Bu teknik, temporal kemik işleme için gereken kaynakları azaltabilir ve bu protokolün geliştirilmesinde motivasyon kaynağı olan COVID-19 orta ve iç kulak patolojisi13 ile ilgili olanlar gibi zamana duyarlı çalışmaları kolaylaştırabilir. Bu protokol, orta kulak ve östaki tüpünde ACE2, TMPRS22 ve Furin ekspresyonunun görselleştirilmesine izin verdi ve SARS-CoV-2'nin nazofarenksten Östaki tüpüne yayılarak orta kulağı enfekte edebileceği olası bir mekanizma sağladı.

Bu protokolün birincil yeniliği, dekalsifikasyondan önce dokuyu kesen bir elmas testerenin kullanılmasıdır; bu, kireç çözücü maddeye maruz kalan dokunun yüzey alanını artırarak hızla dekalsifiye edilebilen temporal kemiğin "kalın" bölümlerini oluşturur. Bu adım, doku dekalsifikasyonunun, geleneksel protokollerin dekalsifikasyon için gerektirebileceği 1-2 ay yerine 7-10 gün içinde gerçekleşmesine izin verir. Elmas testere ile oluşturulan "kalın" doku bölümleri de standart bir temporal kemik dokusu bloğundan daha hızlı bir şekilde dehidre edilebilir, böylece kireçlenme ve gömme arasındaki süre azalır. Ayrıca, bu protokol, parafini,7'yi sertleştirmek için yaklaşık 3 ay süren seloidin yerine bir gömme ajanı olarak kullanır. Seloidin koklear yapıların üstün korunmasını sağlarken, parafin çok daha hızlı sertleşir ve immün boyamayı kolaylaştırır. Bu modifikasyonlarla, temporal kemik dokusu, daha geleneksel işleme stratejilerinde gerekli olan 9-10 ayın aksine 10-14 gün içinde işlenebilir 7,9.

Bu protokolün birkaç sınırlaması vardır. Gömmeden önce dokunun elmas testere ile kesilmesi, Corti (OOC) organına zarar verme riski taşır. OOC, bu tekniğin geliştirilmesi sırasında çoğu örnekte ciddi şekilde hasar görmüştür, bu da iç kulağın hassas yapılarının korunmasının hayati önem taşıdığı yaşa bağlı işitme kaybı gibi patolojileri incelemek için bu tekniğin değerini sınırlayabilir. Numuneyi, elmas testerenin otik kapsül kemiğini doğrudan kesmeyecek ve iç kulak yapılarını koruyacak şekilde konumlandırmak mümkün olabilir, ancak bu aktif bir araştırma alanı olmaya devam etmektedir. Hayvan modelleri, bu protokolü daha da hassaslaştırmak ve bu değerli insan örneklerinde iç kulak yapılarını koruma şansını artırmak için değerli bir araç sağlayabilir. Bu protokoldeki doku kalitesi, zaman kısıtlamaları nedeniyle seçilen parafin gömme ajanının kullanımı ile de sınırlıdır. Celloidin gömülmesi, otopatolojik örneklerde hücresel bütünlüğü daha iyi korur, ancak7'nin sertleşmesi aylar sürer. Son olarak, bu protokol hala önemli zaman ve kaynak yatırımı gerektirmektedir. Bir elmas mikro testerenin kullanımı, geleneksel temporal kemik hazırlığı için gerekli malzemelere ek bir maliyettir ve kireçlenme için gereken 7-10 gün hala uzundur. Gelecekte, işleme için gereken süreyi daha da kısaltmak için bu yöntemleri mikrodalga destekli kireç çözme14 ile birleştirmek mümkün olabilir.

Sınırlamalarına rağmen, burada açıklanan yüksek hızlı temporal kemik işleme protokolü, orta kulak ve potansiyel olarak iç kulak patolojisini incelemek için başka bir araç sunmaktadır. Bu teknik, COVID-19 pandemisi sırasında yararlı olmuştur ve ayrıca doku işleme için gereken zamanı ve emeği azaltarak aktif bir temporal kemik laboratuvarının korunmasıyla ilgili maliyetleri de azaltabilir. Temporal kemik araştırması Amerika Birleşik Devletleri'nde popülaritesini azaltmış ve 1980'lerde 28 aktif laboratuvardan şu anda sadece 4 aktif laboratuvaradüşmüştür. Çalışan temporal kemik laboratuvarlarının sayısındaki bu düşüş, temporal kemiklerin toplanması ve işlenmesi ile ilgili önemli maliyetlerle ilişkili olabilir 4,8. Sonuç olarak, temporal kemik işleme için gerekli kaynakları azaltan ve ayrıca COVID-19 pandemisi gibi yeni bağlamlarda temporal kemik patolojisinin incelenmesine izin veren teknikler geliştirmeyi hedeflememiz önemlidir. Ayrıca, bu protokolde özetlenenler gibi yüksek hızlı doku işleme, orta ve iç kulak patolojisinin moleküler düzeyde değerlendirilmesine izin veren yeni biyolojik tekniklerin (örneğin, immünohistokimya, transkriptomik) kullanılmasına yardımcı olabilir15,16,17,18,19 . Otolojik hastalıkta insan dokusunu incelemek için moleküler tekniklerin kullanılması açısından yüzeyi zar zor çizdik ve hayvan modelleri tarafından sağlanamayan önemli bilgiler sağlayabilirler.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Yazarların beyan edecekleri herhangi bir çıkar çatışması yoktur.

Acknowledgments

Mohamed Lehar'a bu projedeki yardımları için teşekkür ederiz. Bu çalışma kısmen Ulusal Sağlık Enstitüleri (T32DC000027, NSA) tarafından desteklenmiştir.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Anti-ACE-2 Antibody (1:50 applied dilution) Novus Biologicals SN0754
Anti-Furin Antibody (1:250 dilution) Abcam EPR 14674
Anti-TMPRSS2 Antibody (1:1,000 dilution) Novus Biologicals NBP1-20984
BX43 Manual System Microscope Olympus Life Science Solutions
CBN/Diamond Hybrid Wafering Blade Pace Technologies WB-007GP
Collin Mallet - 8'' Surgical Mart SM1517
DS-Fi3 Microscope Camera Nikon
Dual Endogenous Enzyme Block (commercial blocking solution) Dako S2003
Eaosin Stain Sigma-Aldrich 548-24-3
Formalin solution, neutral buffered 10% Sigma-Aldrich HT501128
Formical-4 Decalcifier (formic acid decalcifying solution) StatLab 1214-1 GAL
Hematoxylin Stain Sigma-Aldrich H9627
HRP-Conjugated Anti-Rabbit Secondary Antibody (1:100 dilution) Leica Biosystems PV6119
ImmPRESS HRP Horse Anti-Goat igG Detection Kit, Peroxidase (1:100 dilution) Vector Laboratories MP-7405
Lambotte Osteotome Surgical Mart SM1553
Metallographic PICO 155P Precision Saw Pace Technologies PICO 155P microsaw
NIS Elements Software Version 4.6 Nikon
Paraplast Plus Sigma-Aldrich P3683 paraffin
Positive Charged Microscope Slides with White Frosted End Walter Products 1140B15
Thermo Shandon Crytome FSE Cryostat Microtome New Life Scientific Inc. A78900104 cryotome
Triology Pretreatment Solution (commercial pretreatment solution) Sigma-Aldrich 920P-05
Xylene Sigma-Aldrich 920P-05

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Nogueira, J. F., et al. A brief history of otorhinolaryngology: Otology, laryngology and rhinology. Brazilian Journal of Otorhinolaryngology. 73 (5), 693-703 (2007).
  2. Pappas, D. G. Otology through the ages. Otolaryngology-Head and Neck Surgery. 114 (2), 173-196 (1996).
  3. Schuknecht, H. F. Otopathology: The past, present, and future. Auris Nasus Larynx. 23, 43-45 (1996).
  4. Monsanto, R. D. C., Pauna, H. F., Paparella, M. M., Cureoglu, S. Otopathology in the United States: History, current situation, and future perspectives. Otology & Neurotology. 39 (9), 1210-1214 (2018).
  5. Crowe, S. J., Guild, S. R., Polvogt, L. M. Observations on the pathology of high-tone deafness. Journal of Nervous and Mental Disease. 80, 480 (1934).
  6. Andresen, N. S., et al. Insights into presbycusis from the first temporal bone laboratory within the United States. Otology & Neurotology. 43 (3), 400-408 (2022).
  7. Schuknecht, H. Pathology of the Ear. , Lea and Febiger. Philadelphia, PA. (1993).
  8. Chole, R. A. Labs in crisis: Protecting the science--and art--of otopathology. Otology & Neurotology. 31 (4), 554-556 (2010).
  9. Nager, G. T. Pathology of the Ear and Temporal Bone. , Williams and Wilkins. Baltimore, MD. (1993).
  10. COVID-19 Personal Protective Equipment (PPE). , Available from: https://www.cdc.gov/niosh/emres/2019_ncov_ppe.html (2022).
  11. Essalmani, R., et al. Distinctive roles of Furin and TMPRSS2 in SARS-CoV-2 infectivity. Journal of Virology. 96 (8), 0012822 (2022).
  12. Ueha, R., Kondo, K., Kagoya, R., Shichino, S., Yamasoba, T. ACE2, TMPRSS2, and Furin expression in the nose and olfactory bulb in mice and humans. Rhinology. 59 (1), 105-109 (2021).
  13. Frazier, K. M., Hooper, J. E., Mostafa, H. H., Stewart, C. M. SARS-CoV-2 virus isolated from the mastoid and middle ear: Implications for COVID-19 precautions during ear surgery. JAMA Otolaryngology - Head & Neck Surgery. 146 (10), 964-966 (2020).
  14. Cunningham, C. D., Schulte, B. A., Bianchi, L. M., Weber, P. C., Schmiedt, B. N. Microwave decalcification of human temporal bones. Laryngoscope. 111 (2), 278-282 (2001).
  15. Stephenson, R., et al. Immunohistochemical location of Na+, K+-ATPase α1 subunit in the human inner ear. Hearing Research. 400, 108113 (2021).
  16. McCall, A. A., et al. Extralabyrinthine manifestations of DFNA9. Journal of the Association for Research in Otolaryngology. 12 (2), 141-149 (2011).
  17. Wu, P. Z., O'Malley, J. T., de Gruttola, V., Liberman, M. C. Age-related hearing loss is dominated by damage to inner ear sensory cells, not the cellular battery that powers them. The Journal of Neuroscience. 40 (33), 6357-6366 (2020).
  18. Miller, M. E., Lopez, I. A., Linthicum, F. H., Ishiyama, A. Connexin 26 immunohistochemistry in temporal bones with cochlear otosclerosis. Annals of Otology, Rhinology & Laryngology. 127 (8), 536-542 (2018).
  19. Lopez, I. A., et al. Immunohistochemical techniques for the human inner ear. Histochemistry and Cell Biology. 146 (4), 367-387 (2016).

Tags

İmmünoloji ve Enfeksiyon Sayı 183
COVID-19 ile İlişkili Orta Kulak Patolojisinin Değerlendirilmesi için Yüksek Hızlı İnsan Temporal Kemik Kesiti
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Andresen, N. S., Wood, M. K.,… More

Andresen, N. S., Wood, M. K., Čiháková, D., Stewart, C. M. High-Speed Human Temporal Bone Sectioning for the Assessment of COVID-19-Associated Middle Ear Pathology. J. Vis. Exp. (183), e64012, doi:10.3791/64012 (2022).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter