Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Medicine
Click here for the English version

Medicine

Микро рассечение эмаль органа от нижней челюсти резцы крыс воздействию экологических токсикантов

Published: March 29, 2018 doi: 10.3791/57081
Automatic Translation
1,2, 1,2, 1,2, 1,2, 1,2
1Institut National de la Santé et Recherche Médicale (INSERM) UMRS 1138, Paris-Diderot University, Pierre & Marie Curie University, Paris-Descartes University, Laboratory of Molecular Oral Pathophysiology, Cordeliers Research Centre, 2Unit of Formation and Research (UFR) of Odontology, Paris-Diderot University

Summary

Понимание формирования и возможных изменений эмали требует изучения ameloblast деятельности. Здесь мы описываем надежного и последовательного метода микро-вскрыть эмаль органов, содержащие ameloblasts стадии секреции и созревания, которые могут быть использованы для дальнейших количественных и качественных экспериментальных процедур.

Abstract

Дефекты эмали, вытекающие из условий окружающей среды и образа жизни являются проблемы общественного здравоохранения из-за их высокой распространенности. Эти дефекты в результате измененный активность клеток, ответственных за эмаль синтеза, названный ameloblasts, который присутствует в эмаль органа. Во время Амелогенез ameloblasts следовать конкретные и точные последовательности событий распространения, дифференциация и смерти. Крыса, постоянно растущих резцов является подходящей Экспериментальная модель для изучения ameloblast активности и дифференциации этапов в физиологических и патологических условиях. Здесь мы описываем надежного и последовательного метода микро-вскрыть эмаль орган крыс воздействию экологических токсикантов. Микро расчлененный Стоматологическая эпителия содержат секрецию и созревания этап ameloblasts, который может использоваться для качественной экспериментов, например иммуногистохимия анализов и в situ гибридизация, а также для количественного анализа, такие как RT-ПЦР РНК seq и Западный blotting.

Introduction

Многие дефекты развития эмали может быть результатом воздействия экологических токсикантов и/или ненадлежащее life-style1,2,3,4. Характеристика срыва мероприятий и молекулы Амелогенез используя настоящее время описанная процедура будет содействовать использованию результирующей дефектов эмали как ранних маркеров воздействия ряда токсикантов и может помочь восстановить историю здоровья Каждый пациент в перинатальный период, когда эмаль синтезированный1,2. Синтез эмаль можно разделить на четыре основных этапа в зависимости от ameloblast деятельности5. Первый шаг объединяет клеток и pre-ameloblast распространения прекурсоров. На втором шаге дифференцированных ameloblasts выделяют эмаль матрицы белки (ИПК), главным образом amelogenin, enamelin и ameloblastin, которые определяют толщину окончательного эмали. Таким образом любое нарушение синтеза EMP приводит к количественным дефекты эмали. После осаждения Толщина полной эмали начинается этап созревания. На этом этапе апатита роста кристаллитов в ширины и толщины позволяет эмали для достижения высокой минерализации соотношение в биологической ткани, до 96% по весу. Нарушая события, которые происходят во время созревания этап приведет к качественным эмаль дефектов. Наконец ameloblasts вступит в фазу после созревания, также называется пигментации на грызунов и проходят apoptosis во время извержения зуба, делая дефектов эмали (если таковые имеются), необратимого и непоправимого, таким образом дефекты обеспечивают потенциальным ретроспективный запись ameloblast подчеркивает. Грызунов Амелогенез следующим же последовательность событий с особенностью, что их резцов непрерывно растет, что делает их подходящую модель для изучения общего процесса Амелогенез. Таким образом любое нарушение Амелогенез приводит изменений эмали качество или количество, в зависимости от окна времени нарушения события. В этом смысле воздействием диоксинов, свинец и эндокринные нарушения химических веществ (ЭЭС) как бисфенол А (BPA), генистеин и винклозолин, было показано, чтобы генерировать эмаль hypomineralizations1,2,3 ,6,,78. Асимметричная белый непрозрачный пятна были определены на резцы у крыс, получавших дозу BPA низкой дозы во время периода плода и в первый месяц после рождения1. Эти дефекты эмали у крыс и те из человека Молярная резца hypomineralization (MIH), имеют аналогичные структурные, клинические и биохимические характеристики. MIH-патология недавно описан зубной эмали, для которой этиологии по-прежнему остается неясным9,10 несмотря на множество причинных факторов была гипотеза9,10,11 ,12.

Еще один важный эмаль hypomineralization патологии из-за экологических факторов является флюороз (DF), который является следствием чрезмерного фторид поглощения (> 0,1 мг/кг/день)13,14. Основным источником Фтор является питьевая вода, которая дополняет или естественно обогащенного фторидами. Фторид также часто прописывают для предотвращения кариеса, но профилактическая доза составляет лишь 50% ниже, чем токсичные один (≤0.05 мг/кг/день). МИ и DF, два частые патологий, в результате воздействия факторов окружающей среды, могут представлять общие черты, которые должны квалифицироваться в результате потенцирования эффектов hypomineralizing фтора в сочетании с другими токсикантов например ЭЭС2 или амоксициллин15.

Микро рассечение крыса эмаль органа, содержащие ameloblasts на дифференциации различных стадиях поможет понять механизм действия молекул может нарушить деятельность ameloblast и вызвать дефекты эмали для постановки диагноза после извержения зуба. Иными словами характеристика изменения состава эмали ген выражение и эмаль матрицы из-за экологических токсикантов позволяет воссоздание истории воздействием токсикантов и облегчает мониторинг экологической безопасности для общественности здоровья.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

Все животные, используемые в настоящем исследовании были сохранены в соответствии с руководящими принципами для ухода и использования лабораторных животных от французского министерства сельского хозяйства (A-75-06-12).

1. животных воздействием токсикантов

  1. Перед выполнением этого протокола, получить необходимые институциональные одобрение и обязательно соблюдать все правила ухода за животными.
  2. Применить дизайн исследовательский протокол, позволяющий Конституции различных экспериментальных групп для того, чтобы проверить влияние molecule(s) на ameloblast секреции стадии и стадии созревания ameloblast. Здесь в зависимости от их воздействия фторид (NaF) в сочетании или не с BPA (рис. 1A)2были созданы четыре группы самцов крыс Wistar. Все животные были наблюдается и расчленены на день 65 (рис. 1B).

2. рассечение Hemi мандибулы от взрослых крыс

  1. Усыпить крыс CO2 удушение, при необходимости сопровождаемое обезглавливание в отдельном голову от остальной части тела. Разоблачить крысы CO2 для 5 минут в Специальный ящик16.
  2. Удалите все кожу от нижней губы, с помощью скальпеля #11 для того, чтобы получить легкий доступ к нижних резцов.
  3. С же скальпель надрезают между двух нижних резцов с небольшим давлением и нижней челюсти будет разделен на две половинки.
  4. Височной нижнечелюстной совместное с помощью скальпеля для отсоединения челюсти, удержания и отрезания пленки hemi челюсти с помощью пинцета, штраф.
  5. Вырезать окружающих мягких тканей с помощью скальпеля и удалить все мышцы, сухожилия и связки, скребком, до тех пор, пока кости совершенно чистой.

3. изоляция резца17,18

  1. Тщательно сбрить кости, поместив лезвия параллельно основной продольной оси резца. Начало в костлявые хребта возле советы резца (проксимальный конец) до конца резца возле шейки матки цикла. Разрез движения исходит из проксимальных в дистальном направлении.
  2. Сделать первый разрез дистально в шейки матки цикл с скальпеля для удаления gonion hemi челюсти и разрешение на взлет резца легко без повреждения шейки матки цикла или стадии секреторного ameloblasts (красная линия на рис. 2).
  3. Сделать второй сократить ниже второй молярной и вставьте скальпель между костью и медиальной поверхности резцов. Когда поднимается базальная кость, поверните наружу резца и снять его тщательно избегать эмаль ткани органов ослабить с помощью тонкой пинцета.

4. микро рассечение эмаль органа под объектив бинокля

  1. Падение 200 мкл физиологическим фосфатного буфера (PBS 1 X) на резец, с помощью пипетки. Возьмите резца с тонкой пинцет с лабиальной поверхности, обращенной вверх. Сделайте скальпель Марк между бесцветные и оранжевый частями ткани. Этот знак соответствует базовой белое пятно, который наблюдается после (рис. 2).
  2. Царапина, экскаватор или эквивалентные средства, клеточной поверхности от Марк скальпель в верхушечный конец соответствующий секрецию ameloblasts этап (бесцветный) и от Марк скальпель на кончик резца для созревания этап (оранжевый) ameloblasts.
  3. Удаление ткани 2-мм соответствует переходной стадии, как ранее описанных19. Не открывайте резца во время эмаль орган рассечение избежать загрязнения, мезенхимы.
  4. Вырежьте шейки матки цикла, расположенный сразу в апикальной части резца (рис. 2) как описано выше20.
  5. Соберите его в 10% растворе формалина или лизиса для дальнейшего расследования (см. Таблицу материалы).

5. коллекция тканей органа разлученных эмаль для дальнейшего расследования

  1. Капля 200 мкл буфера PBS 1 X на резца.
  2. С лезвием скальпеля #11 Аккуратно отсоедините Стоматологическая эпителиальные клетки постепенно в буфере, отдельно, для каждого этапа с помощью скальпеля марки, сделанные ранее.
  3. Для ячейки РНК и белков извлечений Положите ткани в лизис решение, которое позволяет извлечения белков и РНК (см. Таблицу материалы).
    Примечание: Подготовьте высокого качества РНК, повернув ткани экскаватор в трубе и затем измельчения клетки до получения однородной смеси. Смесь готова к РНК и белков извлечений согласно процедуре производителя, который был ранее описанных2,8,17. Обычно, около 5-10 мкг всего 150 мкг всего белков и РНК были получены для каждого приготовления.
  4. Для гистологического анализа иммуногистохимия (IHC) и в situ гибридизация (ISH), наносят слой клеток в формалина 10% за 2 ч, затем хранить при 4 ° C в PBS 1 X. Ткани затем можно внедрить в воск/парафин или ткани OCT для замороженных секций.
  5. Для извлечения EMP принимайте резца с тонкой пинцетом. После короткого воздействия воздуха (небольшое обезвоживание) белое пятно будет отображаться вокруг средней части лабиальной поверхности резцов, который представляет начало минерализации эмали. Это белое пятно соответствует переход- / раннего созревания этап ameloblasts, так что используйте его как индикатор для извлечения EMPs21.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

Многие эмаль дефекты, такие как флюороз12,13, могут в результате экологических условий вследствие чрезмерного фторид поглощения или эмали похож на MIH вследствие воздействия на некоторые ЭЭС1, hypomineralization 7,22. Эти дефекты развития эмали может быть экспериментально воспроизведена на крысах (рис. 1)1,2,7,23,24. Крыса hemi челюсти содержит один резца, отделены от трех моляров на разрыв под названием диастема. Непрерывно растущие резца содержит две минерализованных ткани, дентина, производимые odontoblasts и эмали, производимые ameloblasts в орган эмали с другими эпителиальных клеток (рис. 2). Грызун резца, как представляется, быть подходящей моделью для изучения Амелогенез как, вопреки моляров, он содержит все этапы распространения/дифференциация ameloblast на протяжении всей жизни животного.

Микро расчлененный эмаль орган от резцов крысы могут быть разделены согласно ameloblast дифференциация стадии с помощью белое пятно, которое появляется после небольшое обезвоживание, и это может быть использовано как показатель переходного этапа между секреция - и созревания этапы19,21,25. Качество микро расчлененный эмали, которую тканей могут быть проверены Trichrome Masson окрашивание (рис. 3A). Микроскопические наблюдения показали типичные эмаль эпителиальных клеток и ameloblast частокол. Отсутствие мезенхимальных загрязнения было подтверждено отсутствие коллагена зеленой окраски (Рисунок 3А) и выражения (рис. 3B). Эти микро расчлененный ткани может использоваться для qualitative analyses как ИХС (рис. 3 c) и ISH и количественного анализа как RT-ПЦР (рис. 3B), РНК seq и Западный blotting. К примеру, андрогена был специально локализуется в ameloblasts стадии созревания, с помощью специфического антитела, направленные против этого белка (см. Таблицу материалы) (рис. 3 c)8. Основные ameloblast дифференциация этапов характеризуются конкретный ген выражение модели26 , могут быть определены на микро расчлененный эмаль орган. К примеру, секреция этап ameloblasts Экспресс enamelin2 и созревания этап ameloblasts express калликреин 4 (KLK4) (рис. 3B). Они содержат высокие уровни ферритина, которые дают возможность хранить большое количество железа, которое отвечает за оранжевый цвет эмали27.

Фторид нарушение Амелогенез легко может сопровождаться наблюдения lysates клетки для экстракции РНК: управления стадии созревания лизатов были оранжевый, тогда как фтор лечить те свет желтого до бесцветные (рис. 4A). Анализ уровня РНК, извлеченные из микро расчлененный стадии созревания эмали орган показал KLK4 вниз регулирование после лечения фтора (рис. 4B), который также свидетельствует анализ крупномасштабных транскриптомики недавно сообщила2. Специфические белки, выраженному либо путем секреции - или созревания стадии ameloblasts также могут быть локализованы с помощью микро расчлененный эмаль орган28. Например андрогена был специально локализации с помощью микро расчлененный эмаль орган8,28.

Figure 1
Рисунок 1: эмаль дефектов, наблюдается на крыс фторид (NaF) в сочетании или не с бисфенол А (BPA). (A) схематическое представление четырех экспериментальных групп крыс Вистара, являются для целей настоящего исследования, группы, которые зависят от различных экологических условий, применяемых к крысам. От гестационный день 1 (fecondation) до отъема дня 21 (P21) 5 мкг/кг BPA в 0,5 мл кукурузного масла было перорально путем затравки ежедневно для беременных и кормящих женщин, тогда как кукурузное масло один вводили к группе элементов управления. После отнятия от груди, каждой плотины было выявлены и случайным образом распределены в одном из соответствующих двух групп. Самцов крыс были отобраны для этого исследования и подвергается 5 мкг/кг/день BPA только 5 мм NaF только, или в той же дозе до 65 дней после рождения (P65). Контрольной группе было дано только растворителем. (B) в послеродовом день 30 (P30), крыс хронически низких доз BPA выставлены белый непрозрачный пятен и для взрослых крыс (P65) было выявлено больше не очевидным Стоматологическая фенотип. Чередуя белый и оранжевый полос типичных флюороз (DF) наблюдались у крыс, получавших NaF. В крыс обоих агентов было выявлено более тяжелых фенотип характеризуется важным резца обесцвечивания. Однородной оранжевого инцизального эмаль квалифицируется управления крыс. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.

Figure 2
Рисунок 2: Схематическое представление процедуры. Изоляция ameloblasts от секреции - и созревания этапов от микро расчлененный эмаль орган. Крыса hemi челюсти содержит три моляров и постоянно растущей резца с двумя минерализованными тканей, дентин, производимые odontoblasts (в желтый) и эмали, производимые ameloblasts (в оранжевый). Когда резца изолирована и слегка обезвоженная, белое пятно в апикальной части лабиальной поверхности является наблюдаемый объект. Это помогает идентифицировать ameloblast стадии дифференцировки, как она охватывает переходный этап между секрецию и созревания этапов. Эмаль орган тщательно микро расчлененный, разлученных в 3 частях, в зависимости от стадии дифференцировки ameloblast и используется для качественного анализа (гистологический) или количественных экспериментальных подходов (мРНК и белковый анализ по RT-ПЦР и Западный blotting, соответственно).

Figure 3
Рисунок 3: контроль качества микро расчлененный секреция - и созревания стадий эмаль органа. Крыса эмаль орган разделена на 3 части, содержащие шейки матки цикла, секреция этап ameloblasts и ameloblasts стадии созревания. (A) Trichrome Masson пятнать микро расчлененный частей показал различных эпителиальных клеток и отсутствие мезенхимальных клеток. Шкалы, 100 мкм. (B) анализ выражения гена экспериментами RT-ПЦР РНК, извлеченные из стадии секреции и созревания эмали орган. Типичная схема enamelin и KLK4 выражение было отмечено, а также отсутствие коллагена 1 ожидается в мезенхимальных клеток. (C) люминесцентная, окрашивание используется антитела (см. Таблицу материалы) специально направлены против андрогена, только выраженные стадии созревания ameloblasts. Шкалы, 20 мкм. пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.

Figure 4
Рисунок 4: представитель результаты, полученные с микро расчлененный крыса эмаль орган. (A) при клетки были высокомобильна литического буфера для извлечения РНК (см. Таблицу материалы), стадии созревания тканей, содержащих пигментированной ameloblasts появился оранжевый в условиях лечить контроля и анализатором соответствия рекомендациям. Секреция этап часть желтого независимо от условий. В лечении NaF, все лизатов были свет желтого до бесцветные. (B) пример RT-ПЦР данных, полученных с РНК препаратов из эмали органов крыс, представленные в различных условиях окружающей среды. NaF вниз регулируется KLK4 в стадии созревания, и BPA увеличилось enamelin выражение в стадии секреции. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Изменены ameloblast деятельности и/или нарушается ameloblast распространения, дифференцировки и созревания процессы привести к необратимым эмаль дефекты и, в свою очередь, характеристика дефектов эмали может помочь развить понимание изменены ameloblast деятельность во время Амелогенез. Таким образом исследования на изолированные эмалью органа являются определяющим для выяснения патологические события, приведшие к эмали дефекты независимо от их происхождения, экологические или генетические.

Эта техника первоначально был описан Хиллер и др. 17 и Робинсон и др. 18и используется для демонстрации специфические эффекты на каждой стадии дифференцировки орган эмали. Он тогда был адаптирован для EMP извлечений19,24,25. Мы в настоящее время эта процедура позволяет отделить основные части органа эмаль и сбор биологических образцов в различных экологических условиях для анализа РНК и белков (возможно внутри и загородный cellular белки) с использованием количественных и качественных методы.

Точность микро рассечение требует существенной подготовки перед его применением, чтобы позволить коллекции сохранились эмаль органа и избежать мезенхимальных загрязнение и разрушение любых тканей. Кроме того весьма трудно добиться успеха с малых крыс или мышей. Действительно сложная часть процедуры является сохранение морфологии тканей, гистология и ориентации в МГС и ISH, в отличие от классических методов, обычно проводится на резцы для этих двух подходов.

Одно из главных преимуществ использования микро расчлененный эмаль орган по сравнению с деминерализованной весь hemi-нижней челюсти является поддержание эмали РНК и белков, благодаря отсутствие любой коллекции после лечения. Микро расчлененный эмаль орган непосредственно может использоваться для всех методов молекулярной биологии и биохимии без выбора или культивирование клеток. Преимущество этой процедуры является прямых измерений уровня РНК и белка, которые отражает их количества в конкретных ameloblasts в естественных условиях в физиологических и патологических условиях. Кроме того некоторых токсикантов выступать на сцене один дифференциация специально, как в случае с фтором, который действует на стадии созревания ameloblasts и не на секрецию этап те23,24. Микро рассечение различных регионов эмаль органа позволяет изучение механизма действия некоторых токсикантов или конкретные гены, последствия которого могут быть обнаружить на весь эмаль орган или на отдельные клетки. Действительно ameloblasts, особенно дифференцированы, те, которые трудно собрать и культуры в пробирке, который подтверждается отсутствие исследований, сообщил по этому вопросу. Pre-ameloblasts и стволовые клетки шейки матки петли20только Стоматологическая эпителиальные клетки, которые могут быть изолированы. Кроме того, сообщил ameloblastic клеточных линий, главным образом крыса ХЕТ-729, мыши LS830, ALC31и человека AM-132, часто теряют характеристик дифференциация в vivo ameloblasts: они выражают внеклеточная матрица белки (ИПК), например ameloblastin подобно к ameloblasts секреция стадии и также KLK4 или SLC26A4/pendrin, таких как стадии созревания ameloblasts8, но более или менее не в состоянии выразить amelogenin и минерализации матрицы для производства эмали. Изоляции Стоматологическая стволовых клеток эпителия и эмбриональных ameloblasts может представлять собой возможность для изучения первых этапов дифференцировки ameloblast, но исследования в процессе минерализации терминала эмаль не может осуществляться по-разному чем с в естественных условиях модели. Эта последняя часть Амелогенез является определяющим фактором качества эмали. В то время как ключевые факторы, связанные с зуба развития, например Bmp, Msx, ФБП, паз, Тсс, Wnt хорошо описана33,34, плотно вовлеченных в эмаль качества все еще плохо поняты. Характеристика ключевых факторов качества эмали необходимо расшифровать зубного кариеса и обнаружить инновационных восстановительных или предупредительных лечение кариеса, которые представляют собой проблему общественного здравоохранения как 92% от 20 до 64 лет старых взрослых в мире имеют или имели по крайней мере один кариеса35,,3637.

Грызуны, воздействию экологических токсикантов способны нарушить Амелогенез и изменению качества эмали могут являться хорошей моделью для исследования экологических факторов. Аналогичные процедуры могут также использоваться для функциональных исследований на гены интереса, прямо или косвенно участвующих в Амелогенез. Микро расчлененный эмаль органом является подходящим материалом для характеристики механизмов действия токсикантов и их целевых генов в vivo избегая любой экспериментальной предвзятости. Когда будет характеризоваться дефекты развития эмали, такой подход может использоваться как модель прогнозирования потенциального патологического воздействия новых загрязнителей.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Авторы не имеют никаких конфликтов интересов раскрыть.

Acknowledgments

Эта работа финансировалась университета Париж-Diderot, французский Национальный институт здравоохранения и медицинских исследований (INSERM) и французский институт одонтологического характера исследований (ИФРО).

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Bisphenol A Sigma Aldrich, Saint Louis MO 239658
formalin 10% Sigma-Aldrich, Saint Louis, MO HT5012
Tri-Reagent Euromedex, France TR118
RLT buffer Qiagen, Les Ulis, France 74126 RNeasy Protect Mini Kit
Androgen receptor antibody Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA) sc-816 rabbit polyclonal antibody
PBS 10x EUOMEDEX ET330.A
Sodium fluoride (NaF) Sigma-Aldrich, Saint Louis, MO S-1504
paraplast regular Leica microsystems, Nanterre cedex, France 39601006 called was/parafin in the text
tissue OCT VWR, Fontenay-sous-Bois, France 411243
Extra Fine Bonn Scissors - Straight/8.5 cm PHYMEP , Paris, France 14084-08
Handle for Scalpel Blades - 12.5 cm PHYMEP, Paris, France 10035-12
Curved Scalpel Blade PHYMEP , Paris, France 10035-20
Dissecting Knife - Fine/Straight Tip PHYMEP , Paris, France 10055-12
Circle Knife PHYMEP, Paris, France 10059-15
scalpel blades n°11 Swann-Morton VWR, Fontenay-sous-Bois, France 233-0024
binocular lens Leica biosystems, Nanterre cedex, France MZFLIII

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Jedeon, K., et al. Enamel defects reflect perinatal exposure to bisphenol A. Am J Pathol. 183, 108-118 (2013).
  2. Jedeon, K., et al. Chronic Exposure to Bisphenol a Exacerbates Dental Fluorosis in Growing Rats. J Bone Miner Res. 31, 1955-1966 (2016).
  3. Alaluusua, S., et al. Developmental dental aberrations after the dioxin accident in Seveso. Environ Health Perspect. 112, 1313-1318 (2004).
  4. Chapple, I. L., et al. Interaction of lifestyle, behaviour or systemic diseases with dental caries and periodontal diseases: consensus report of group 2 of the joint EFP/ORCA workshop on the boundaries between caries and periodontal diseases. J Clin Periodontol. 44, S39-S51 (2017).
  5. Nanci, A. Enamel: Composition, Formation, and Structure. Ten Cate's Oral Histology Development, Structure, and Function. , 8th ed, Elsevier mosby. 122-164 (2012).
  6. Leite, G. A., Sawan, R. M., Teofilo, J. M., Porto, I. M., Sousa, F. B., Gerlach, R. F. Exposure to lead exacerbates dental fluorosis. Arch Oral Biol. 56, 695-702 (2011).
  7. Jedeon, K., et al. Enamel hypomineralization due to endocrine disruptors. Connect Tiss Res. 55, 1-5 (2014).
  8. Jedeon, K., et al. Androgen receptor involvement in rat amelogenesis: an additional way for endocrine disrupting chemicals to affect enamel synthesis. Endocrinology. 157, 4287-4296 (2016).
  9. Weerheijm, K. L., Jalevik, B., Alaluusua, S. Molar-incisor hypomineralisation. Caries Res. 35, 390-391 (2001).
  10. Jälevik, B. Prevalence and Diagnosis of Molar-Incisor- Hypomineralisation (MIH): A systematic review. Eur Arch Paediatr Dent. 11, 59-64 (2010).
  11. Alaluusua, S. Aetiology of Molar-Incisor Hypomineralisation: A systematic review. Eur Arch Paediatr Dent. 11, 53-58 (2010).
  12. Jedeon, K., Berdal, A., Babajko, S. The tooth, target organ of Bisphenol A, could be used as a biomarker of exposure to this agent. Bisphenol A: Sources, Risks of Environmental Exposure and Human Health Effects. Gibert, Y. , Nova Science Publishers. 205-225 (2015).
  13. Fejerskov, O., Larsen, M. J., Richards, A., Baelum, V. Dental tissue effects of fluoride. Adv Dent Res. 8, 15-31 (1994).
  14. Robinson, C., Connell, S., Kirkham, J., Brookes, S. J., Shore, R. C., Smith, A. M. The effect of fluoride on the developing tooth. Caries Res. 38, 268-276 (2004).
  15. Sahlberg, C., Pavlic, A., Ess, A., Lukinmaa, P. L., Salmela, E., Alaluusua, S. Combined effect of amoxicillin and sodium fluoride on the structure of developing mouse enamel in vitro. Arch Oral Biol. 58, 1155-1164 (2013).
  16. Pritchett-Corning, K. R. Euthanasia of neonatal rats with carbon dioxide. J Am Assoc Lab Anim Sci. 48, 23-27 (2009).
  17. Hiller, C. R., Robinson, C., Weatherell, J. A. Variations in the composition of developing rat incisor enamel. Calcif Tissue Res. 18, 1-12 (1975).
  18. Robinson, C., Kirkham, J., Nutman, C. A. Relationship between enamel formation and eruption rate in rat mandibular incisors. Cell Tissue Res. 254, 655-658 (1988).
  19. Smith, C. E., Nanci, A. A method for sampling the stages of amelogenesis on mandibular rat incisors using the molars as a reference for dissection. Anat Rec. 225, 257-266 (1989).
  20. Chavez, M. G., et al. Isolation and culture of dental epithelial stem cells from the adult mouse incisor. J Vis Exp. (87), (2014).
  21. Brookes, S. J., Kingswell, N. J., Barron, M. J., Dixon, M. J., Kirkham, J. Is the 32-kDa fragment the functional enamelin unit in all species? Eur J Oral Sci. 119, 345-350 (2011).
  22. Babajko, S., Jedeon, K., Houari, S., Loiodice, S., Berdal, A. Disruption of Steroid Axis, a New Paradigm for Molar Incisor Hypomineralization (MIH). Front Physiol. 8, 343 (2017).
  23. Houari, S., et al. Asporin and the mineralization process in fluoride-treated rats. J Bone Min Res. 29, 1446-1455 (2014).
  24. Denbesten, P., Li, W. Chronic fluoride toxicity: dental fluorosis. Monographs in oral science. 22, 81-96 (2011).
  25. Kirkham, J., Robinson, C., Phull, J. K., Shore, R. C., Moxham, B. J., Berkovitz, B. K. The effect of rate of eruption on periodontal ligament glycosylaminoglycan content and enamel formation in the rat incisor. Cell Tissue Res. 274, 413-419 (1993).
  26. Lacruz, R. S., et al. Identification of novel candidate genes involved in mineralization of dental enamel by genome-wide transcript profiling. J Cell Physiol. 227, 2264-2275 (2012).
  27. Wen, X., Paine, M. L. Iron deposition and ferritin heavy chain (Fth) localization in rodent teeth. BMC research notes. 6, 1 (2013).
  28. Houari, S., Loiodice, S., Jedeon, K., Berdal, A., Babajko, S. Expression of Steroid Receptors in Ameloblasts during Amelogenesis in Rat Incisors. Front Physiol. 7, 503 (2016).
  29. Kawano, S., et al. Establishment of dental epithelial cell line (HAT-7) and the cell differentiation dependent on Notch signaling pathway. Connect Tissue Res. 43, 409-412 (2002).
  30. Zhou, Y. L., Snead, M. L. Identification of CCAAT/enhancer-binding protein alpha as a transactivator of the mouse amelogenin gene. J Biol Chem. 275, 12273-12280 (2000).
  31. Nakata, A., et al. Establishment and characterization of a spontaneously immortalized mouse ameloblast-lineage cell line. Biochem Biophys Res Commun. 308, 834-839 (2003).
  32. Harada, H., et al. Establishment of ameloblastoma cell line, AM-1. Journal of oral pathology & medicine: official publication of the International Association of Oral Pathologists and the American Academy of Oral Pathology. 27, 207-212 (1998).
  33. Jussila, M., Thesleff, I. Signaling networks regulating tooth organogenesis and regeneration, and the specification of dental mesenchymal and epithelial cell lineages. Cold Spring Harb Perspect Biol. 4, a008425 (2012).
  34. Tucker, A., Sharpe, P. The cutting-edge of mammalian development; how the embryo makes teeth. Nat Rev Genet. 5, 499-508 (2004).
  35. Vos, T., et al. Years lived with disability (YLDs) for 1160 sequelae of 289 diseases and injuries 1990-2010: a systematic analysis for the Global Burden of Disease Study 2010. Lancet. 380, 2163-2196 (2012).
  36. Marcenes, W., et al. Global burden of oral conditions in 1990-2010: a systematic analysis. J Dent Res. 92, 592-597 (2013).
  37. National Institute of Dental and Craniofacial Research. Dental Caries (Tooth Decay) in Adults (Age 20 to 64). , Available from: https://www.nidcr.nih.gov/DataStatistics/FindDataByTopic/DentalCaries/DentalCariesAdults20to64.htm (2017).

Tags

Ретракция выпуск 133 крыса резца эмаль орган Амелогенез минеральные эмаль Hypomineralization эндокринные расстройства фторид
Микро рассечение эмаль органа от нижней челюсти резцы крыс воздействию экологических токсикантов
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Houari, S., Babajko, S., Loiodice,… More

Houari, S., Babajko, S., Loiodice, S., Berdal, A., Jedeon, K. Micro-dissection of Enamel Organ from Mandibular Incisor of Rats Exposed to Environmental Toxicants. J. Vis. Exp. (133), e57081, doi:10.3791/57081 (2018).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter