Summary
혈관 화 된 복합 알로이 식은 이식 받는 사람에 게 생명을 바꾸는 혜택을 제공 하지만, 이식 거부와 레이의 생물학적 원인은 제대로 이해 되지 않습니다. 여기에 제시 된 설치류 수술 모델은 재현 가능 하 고 임상적으로 관련 된 모델을 제공 하 여 연구원 들이 그 발생을 막기 위해 거부 사건과 잠재적인 치료 전략을 평가할 수 있도록 합니다.
Abstract
혈관 화 된 복합 동종 이식 (VCA)은 재건 수술에서 비교적 새로운 분야 이다. 인간적 인 VCA에 있는 임상 성과는 손과 얼굴 이식 및, 더 최근에, 복 부 벽, 자 궁 및 비뇨 생식 기 이식 포함 합니다. 기능적 결과는 초기 기대치를 초과 했으며 대부분의 수신자는 향상 된 삶의 질을 즐깁니다. 그러나 임상 경험이 축적 되 면 면역 억제에서 만성 거부 및 합병증을 해결 해야 합니다. 접목에 실패 한 많은 경우에, 원인이 되는 병리학은 허 혈 성 레이 되었습니다. VCA, 특히 허 혈 성 레이 관련 된 급성 및 만성 거절의 생물학적 기전은 연구의 중요 한 영역입니다. 그러나, VCA 환자의 아주 작은 수로 인해, 제안 된 메커니즘의 평가는 실험 모델에서 더 나은 해결 된다. 여러 그룹은 VCA 거부 및 레이 관련 미해결 문제 중 일부를 해결 하기 위해 동물 모델을 사용 했다. 다양 한 종을 포함 하는 몇몇 모형 디자인이 문헌에 기술 되어 있다. 여기에서 우리는 번역 VCA 연구를 위해 이용 될 수 있는 쥐에 있는 VCA 이성애 주제 힌 사지 골이 피부 플랩의 재현성 있는 모형을 제시 합니다. 이 모델은 낮은 수준의 사망률을 유지 하면서 생 검 및 다양 한 이미징 방식을 포함 한 접목의 시리얼 평가를 가능 하 게 합니다.
Introduction
절단에서 치명적인 조직 손실에 대 한 재건 수술, 폭발 부상, 악성, 그리고 선 천 성 결함은 환자에서 조직의 가용성과 기증자 사이트에서 발생 하는 추가 사망률에 의해 제한 됩니다. 일부 경우, 예컨대 화상 피해자 또는 사변형 수족, 재건을 위한 생 가능한 조직은 환자 로부터 사용할 수 없다. 1964에서, 최초의 현대 손 이식이 에콰도르에서 수행 되었다. 이것은 기술적인 성공, 당시에 유효한 면역 억제는 거절을 방지 하기 위하여 불충분 했 고, 이식 편 3 주 미만에서 분실 되었습니다1. 1998 및 1999에서, 면역 억제의 현대 시대에 있는 첫번째 손은 리옹, 프랑스2 및 미국 켄터키 주 루이스 빌에서 수행 되었다3. 처음으로, 재건 외과 의사 처럼 대체 수 있습니다. 얼굴이 식은 20054에서 처음 수행 되었으며, 다 수의 다른 VCA 접목은 이제 복 벽5, 자 궁 및 비뇨 생식 기 이식6과 같은 일상적으로 수행 되 고 있다.
고체 장기이 식을 달리, 대부분의 VCA 기술은 고도로 항 원 성 기증자 피부의 존재를 포함 한다. 임상 경험은 피부의 급성 거부 반응이 상대적으로 제어 하기 쉽지만 치료7에 잘 반응 하지 않는 기저 조직과 혈관의 만성 거부에 기여할 수 있다고 결정 했습니다. Alloimmune 반응과 관련 되었던 관 기능 장애는 VCA7의 필드를 위한 더 불길 한 장애물입니다. Macrovasculopathies는 관류 적자, 지연 된 치유, 및 염증 성 조건으로 이끌어 냅니다. Confluent 공격적인 대형 혈관 레이 및 국 소 막 증식은 손 이식 받는 사람7에서 발생 합니다. 또한 microvasculopathies는 VCA 합병증에도 기여할 가능성이 있으며 거부 이벤트로 이어질 수도 있습니다. 면역 및 비 면역 인자가 모두 손 이식 수용자의 레이에서 역할을 하는 반면, VCA에서 말단 혈관 기능 장애를 촉진 하는 특이 적 기전은 특히 저급, 만성 거부의 맥락에서 알려지지 않았다. 이러한 답이 없는 질문은 VCA 거부/유지 보수 및 레이 임상 과정 중에 접목의 시리얼 평가를 허용 하는 동물 VCA 모델의 개발을 필요로 합니다. 이러한 모델은 면역 억제, 전염 성 챌린지 및/또는 기타 수술 후 외상 부상8,9에 대 한 거부 및 레이에 대 한 통찰력을 제공 할 것입니다.
여기에 제시 된 동종의 쥐의 VCA 이성애 주제 힌 사지 골 독 피부 플랩 모델입니다. 이전에 출판 된 VCA 모델을 기반으로,이 절차는 기술적으로 수행 하기 쉽고, 많은 수의 재현성이 있으며, 수령인 동물에 게 최소한의 사망률과 불편 함을 나타냅니다. 이 모델은 VCA 수락 대 거부의 임상 및 조직 병리학 적 평가를 허용 하 고 거부에 관련 된 기저 면역 및 비 면역 메커니즘을 평가할 수 있는 기회를 제공 하도록 설계 되었습니다.
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Protocol
모든 동물 수술은 루이스 빌의 기관 동물 관리 및 사용 위원회 (IACUC 승인 프로토콜 18198) 및 관리 및 사용에 대 한 국립 건강 연구소 (NIH) 가이드에 의해 승인 된 프로토콜에 따라 수행 되었다 실험실 동물10. 4 개월 된 남성 브라운-노르웨이 (RT1. An) 및 4 개월 된 남성 루이스 (RT1. L) 랫 트는 각각 VCA 공여 및 수혜자로 서 사용 되었다.
1. 기증자의 동종 재배 수확
- 기화 된 아이 소 루 레인을 사용 하 여 공여 동물을 챔버를 통해 적용 한다.
- 사 타 구니 및 복 부 부위 뿐만 아니라 이식 편 공여 부위 (힌 사지)를 면도 한다. 그 다음에는가 위가 남긴 퍼지 양을 줄이기 위해 탈모 크림으로 치료 하십시오.
- 복 강 내를 사용 하 여 기증자 동물을 깊숙이 마 취 (60) 케 타 민 (15mg/kg)/acepromazine (2mg/kg). 0.2 mL/100g의 초기 용량을 투여 하 고 모든 시간에 0.2 mL의 추가 용량을 제공 합니다. 편의상 2 단계 전에이 단계를 수행 하는 것은 선택 사항입니다.
- 호흡, 체온 및 마 취의 깊이를 위해 마 취하에 있는 동안 동물을 지속적으로 모니터링 하 고 발가락 핀치 인출 반사 테스트를 사용 합니다.
- 응고를 방지 하기 위해 수술 전에 목 덜 미 영역에서 헤 파 린 용액을 피하 (SC)로 30 U를 투여 한다.
- 마스크, 헤드 커버, 일회용 절연 가운 및 일회용 장갑을 착용 하십시오.
- 기증자 동물 부정사을가 열 패드에 놓습니다. 다리의 복 부 및 등 쪽 측면을 포함 하 여 수술 부위를 미리 준비, 스크러빙 및 드레이 핑 하 여 멸 균 수술 장을 생성 합니다. 돈 멸 균 장갑.
- 메스 블레이드 #15를 사용 하 여 사 타 구니 오목한 구멍에 3cm 피부 절 개를 만들고 아이리스가 위를 사용 하 여 서 혜 부 지방 패드를 측면으로 반영 합니다.
- 일반적인 대 퇴 혈관을 노출 하 고 복 부 근육을 철회 하는 탄성 밴드와 와이어 후크를 배치 합니다.
- 해 부 현미경 (40x)을 사용 하 여 사 타 구니 인 대 아래에 있는 일반적인 대 퇴 혈관의 출현에서 척추를 근접 하 게 하 고 슬와 혈관의 합류에 대 한 거리를 이식 편으로 분해 합니다.
- 마이크로 클립 및 양극 보석상의 집게를 사용 하 여, ligate 및 횡 정 대 퇴 골, 표 재 상 상 복 부 혈관, 사 포 성 동맥 및 근 위 꼬리 대 퇴 혈관과 같은 큰 동맥 및 정 맥 가지를 분할 하 여 동원 주요 대 퇴 혈관. 미세한 양극 집게를 사용 하 여 작은 가지를 소 작을.
- 꽃 창포가 위를 사용 하 여, 뒷 다리의 복 부 쪽을 따라 자른 이전 피부의 중심에서 발목 부 위에 피부 절 개를 만드십시오.
- 그 아래에 있는 다른 내 전근 근육 뿐만 아니라, gracilis 근육을 절단 하 고, 수직으로는 중간 근 위부 혈관을 노출 및 ligate, 깊은 분기 작은 혈관, 그리고 좌 골 신경.
참고: 이 시점에서, 별도의 수술 테이블에, 다른 외과 의사는 삽 관 및 마 취 해야한다 (2.5%-3% 아이 소 잠복) 받는 동물; 이것은 외과 의사가 이식 편 배치를 위한 시간에 수령인 외과 부 대를 준비 하 고 접목의 허 혈 시간을 극소화 하는 것을 허용 합니다. - 기증자 동물에, 무릎과 발목의 수준에서 원주 형 피부 절 개를 확인 합니다. 무릎과 발목을 디스명료 하 게 하 고, 불필요 한 근육과 조직을 제거 하 고, 다리의 등 쪽 면에 수직 피부 절 개를 만들어 접목을 해제 합니다. 이 시점에서, 이식 편 (불 라와 경골으로 구성 된 관련 근육과 그 천공 기에 의해 양육 된 피부 섬으로 덮여)는 척추에 의해서만 연결 됩니다.
- 작은 클램프를 대 퇴 동맥과 정 맥에 최대한 근접 하 게 배치 하 고, 사 타 구니 인 대 근처에서 척추를 가능한 한 근접 하 게 자릅니다.
- 혈액의 접목을 플러시 하려면 27g의 플러싱 무딘 캐 뉼 러를 사용 하 여 대 퇴 동맥에 혈장 염 수 (30u/mL)를 주입 합니다.
참고: 헤 파 린 플러시 전에 동맥을 팽창 시켜 캐 뉼 러의 삽입을 위해 쉽게 접근 할 수 있습니다. 플러시 동안 대 퇴 정 맥 으로부터의 유출을 면밀히 관찰 합니다. 맑은 액체가 대 퇴 정 맥을 벗어나면, 플러시를 중지 하십시오. - 격리 된 접목을 따뜻한 생리 식 염 수에 젖은 거 즈에 싸서 즉시 수령인 동물의 식탁에 운반 하십시오. 이 때, 수용자 수술 부위는 이미 혈관 문 합을 위해 준비 되어야 한다.
- 이식 후 수확 후 즉시 기 흉을 통해 기증자의 쥐를 안락사 시킵니다.
2. 수용자 이식 수술
- 챔버를 통해 적용 되는 기화 된 아이 소 루 레인을 이용한 진정 유도에이 어, 수용자 동물을 인공 호흡기 조절 기관 튜브 및 2.5%-3% 아이 소 루 레인을 통해 깊이 마 취 시켰다.
참고: 이 단계에서 기증자 쥐는 여전히 마 취 됩니다. - 발가락 핀치 인출 반사 시험을 사용 하 여 수용자 동물의 심 박수, 호흡 률, 체온 및 마 취 깊이를 지속적으로 모니터링 합니다.
- 탈수와 저 혈당을 예방 하기 위해서는 처음에는 2 mL의 락 트 링 된 링거 용액과 2.5%의 덱 스트로 스를 주사 하 고 수술 끝에 2 mL를 더 주입 합니다.
- 사 타 구니 부위를 면도 한 다음 탈모 크림으로 치료 하 여가 위가 남긴 퍼지 양을 줄이십시오.
- 마스크, 헤드 커버, 일회용 격리 가운 및 멸 균 장갑을 착용 하십시오.
- 동물 부정사을가 열 패드 위에 놓습니다. 마 취 동안 각 막 찰과상을 방지 하기 위해 안과 연 고를 바르 십시오. 수술 부위를 준비 하 고, 닦 고, 드레이 핑 하 여 멸 균 수술 장을 만듭니다.
- 메스 블레이드 #15를 사용 하 여 사 타 구니 오목한 구멍에 3cm 피부 절 개를 만들고 아이리스가 위를 사용 하 여 서 혜 부 지방 패드를 측면으로 반영 합니다.
- 일반적인 대 퇴 혈관을 노출 하 고 복 부 근육을 철회 하는 탄성 밴드와 와이어 후크를 배치 합니다.
- 머피 지점을 리 게이트 하 고 나눕니다.
- 10-0 나일론 단속 봉합 사를 사용 하 여, 정 맥 엔드-투-사이드 기술과 동맥 종단 간 기술을 통해 수령인 혈관을 아 스 톨 mose 기증자 혈관. 서서히 동맥과 정 맥에서 클램프를 풀어. 출혈에 대 한 anastomotic 사이트를 모니터링 하 고 필요한 경우 추가 봉합을 추가.
- 효과적인 접목 재 관류를 보장 하기 위해 혈관 문 합을 시각적으로 평가 합니다.
- 접목을 사 타 구니 주머니에 끼워 넣고 거꾸로 뒤집어 발목 관절이 우수 하 고 무릎 관절이 열 등 합니다.
- 투 킹 봉합을 사용 하 여 인접 한 근육에 접목을 고정 시킵니다. 중단 된 수평 매트리스 피부 흡수 4-0 봉합을 통해 피부를 닫습니다.
- 마 취에서 받는 동물을 제거 하 고 통풍 기에서 벗으 십시오. 열 지지대를 위해 동물을가 열 패드 위에 놓으십시오.
참고: 전체 작동 시간은 외과 의사의 경험과 외과 수술과 친분에 따라 3에서 4 시간 사이입니다. - 멜 록 시 캄 (1 밀리 그램/kg)을 피하로 통증을 억제 하 고 동물이 완전히 회복되 고 이동할 때까지 모니터링 합니다.
3. VCA 수신자 모니터링
- 수용자 쥐를 단독으로 집 하 고 통증, 탈수, 체중 감소 및 외과 적 장애 (첫 번째 48 – 72 시간 동안) 또는 거절의 임상 징후에 대해 매일 모니터링 합니다. 통증 억제를 위해 처음 3 일 동안 매일 멜 록 시 캄을 피하 (1mg/kg)를 투여 한다.
- 연구 엔드포인트에 기초 하 여, 투여 될 면역 억제제를 선택 한다.
4. 조직학
- 흡입 된 아이 소 루 네 마 취 (2.5%-3%) 하에서, 원하는 시간 지점에서 기증자 이식 편 으로부터 시리얼 피부 및 기저 근육 생 검을 얻습니다. 피부는 생 검을 얻기 전에 긁 고 드 레이프 되어야 하며 멸 균 필드와 기술이 수행 되어야 합니다.
- 흡수 4-0 봉합 사를 사용 하 여 1 ~ 2 개의 스티치로 상처를 닫습니다. 그것의 케이지에 동물을 반환 하 고 마 취에서 회복을 허용.
- 10% 포 르 말린에 별도의 튜브에 생체 조직 조직을 고정 합니다.
- 터미널 타임 포인트와 흡입 된 아이 소 루 네 마 취 (2.5%-3%)에서 기증자/받는 사람 경계에 걸쳐 있는 더 큰 피부 생 검을 취합니다. 조심 스럽게, 낙 지의 사이트에서 선박 가죽 끈 쌍을 찾습니다; 적절 한 사이트는 봉합으로 인해 명백 할 것입니다. 동맥 및/또는 정 맥에서 원하는 용기 샘플을 채취 하십시오. 10% 포 르 말린에서 모든 샘플을 개별적으로 수정 합니다. 조직 샘플을 수집 하 고, 동물이 여전히 아이 소 루 칸 마 취 하에 있는 동안, 그리고 기 흉을 통해 동물을 즉시 안락사 시킵니다.
- 조직 프로세서 (또는 다른 바람직한 포함 기술)를 사용 하 여 파라핀-각 생 검을 자신의 블록에 포함 시킵니다. 피부 샘플의 경우, 모든 표 피 및 진 피 층이 단일 슬라이스 내에서 보일 수 있도록 조직의 방향을 잡습니다. 용기 샘플의 경우, 횡단면을 얻을 수 있도록 혈관의 방향을 잡습니다.
- 마이크로 톰을 사용 하 여 6 µm 절편을 자르고 헤 마 톡 실린 및에 오신 (H & E) 염색을 위한 슬라이드에 적용 한다.
- 표준 프로토콜을 사용 하 여 H & E에 얼룩.
- 명시 야 현미경 기술을 사용 하 여 모든 원하는 조직 샘플의 대표 이미지를 얻습니다.
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Representative Results
쥐의 VCA 이성애 주제 힌 사지 골 피부 플랩 모델은 면역 억제 하에서 장기 동종 요법 생존을 허용 합니다. 이 모델은 신뢰할 수 있고 재현 가능 하며 간편 하 게 수행할 수 있습니다. 플랩은 사 타 구니 지역에 잘 숨겨져 있으며 동물에 게 최소한의 사망률과 불편 함을 구성 합니다. 피부 프레 젠 테이 션은 동종의 생존 및 거부의 임상 징후입니다 (그림 1). 플랩 디자인은 총 임상 모니터링을 가능 하 게 하 고 레이저 도플러와 같은 다양 한 이미징 기술을 위한 기회를 만듭니다 (그림 2). 피부, 근육 및 동맥의 시리얼 생 검을 통해 다양 한 거부 단계에서 조직 병리학 적 후속 조치 및 분석을 달성할 수 있습니다 (그림 3).
그림 1 : 이식 동물의 대표적인 이미지. (A) 수술 후 45에 면역 억제 처리를 하지 않고 장기 생존 (POD 45); 접목의 반전 된 방향 때문에 털이 자라는 방향의 차이를 주목 하십시오. (B) 면역 억제제로 매일 처리 된 동종 VCA 5. (C) POD 40에서 면역 억제제 약물로 매일 치료 한 동종 요법의 장기 생존; 일반 모피 성장 거부의 흔적 없이 접목의 적절 한 관류를 나타내는 참고. (D) 포드 33에 대 한 거부에서 동종의 VCA. 면역 억제 처리는 포드 14에서 완전히 중단 되었다; 거부의 임상적 징후 (피부 위축, 박 리, 털 상실)를 유의 하십시오. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
그림 2 : 동종의 표면 피부 혈관 신생을 모니터링 하는 레이저 도플러 이미징 시스템. 제시 된 동종은 수술 후 일 4, 14 및 64에서 모니터링 되었다. 왼쪽에 있는 패널은 도플러 이미징에 의해 측정 된 혈액 관류를 보여줍니다, 오른쪽 패널은 도플러에 의해 촬영 되는 영역을 표시 하면서. 최소 혈 관류 직후부터 64 일째에 플랩의 완전 한 혈관 화에 이르기까지 변화를 주목 한다. 이 이식은 거부의 징후 없이 적절 한 면역 억제 하에 유지 되었다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
그림 3 : 신 유전학 대 동종 이식의 동종 조직 병리학 H &Amp; E . (A) POD 45 (10 배 확대)에서 신 유전학 동종의 피부 생 검; 피부 성분의 정상적인 형태학 (표 피, adnexa 및 단 핵 세포 침 윤의 징후 없음)을 참고 하십시오. (B) 포드 75에 대 한 거부 반응의 피부 생 검, 면역 억제제의 저용량으로 매일 처리 (10 배 확대); 표 피 위축 증, 부속 기 위축, 단 핵 세포 침 윤, 혈관 주위 침 윤 및 모세 혈관 혈전을 참고 한다. (C) POD 45 (10 배 배율)의 신 유전학 동종의 근육 생 검; 줄무늬 근육의 정상적인 형태학을 주목 하십시오. (D) 포드 98에 대 한 거부의 동종 동종 동종의 근육 생 검, 면역 억제제 (10 배 배율)의 낮은 복용량으로 매일 치료; 근육 위축 및 단 핵 세포 침 윤에 유의 하십시오. (E) POD 45 (20 배 확대)에서 신 유전학 동종의 대 퇴 동맥 생 검; 동맥의 정상적인 형태를 주목 하십시오. (F) 포드 98에 거부 된 동종 동종 동종의 대 퇴 동맥 생 검, 면역 억제제 (20x 배율)의 저용량으로 매일 치료; 내 막 증식, 좁은 루멘 및 혈관 주위 침투를 유의 하십시오. 스케일 바 = 200 µm); 100 µm (E 및 F) 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
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Discussion
VCA의이 모델을 개발, 몇 가지 주요 문제가 고려 되었다. 첫째, 그대로 뼈 (경골과 비 골), 골 수 및 이식에 피부를 포함 하는 것이 중요 했다. 성인 기증자에서 임상 손 이식 상당한 양의 활발 한 조 혈을 전송 하지 않는 동안, 골 수 틈새의 역할의 연구는 그대로 사용 하 여 더 나은 미러링, 혈관을 절단 보다는 긴 뼈, 어떤 결과 노출 된 골의 섬유 증. 또한, 폐쇄 된 골 골 절 세포 피부 플랩 디자인은 감염과 출혈의 위험을 감소 시킨다. 골 수와 피부는 모두 면역 반응을 유발 하는 데 사용 될 수 있는 고도로 면역 원 성 조직입니다. 둘째, 접목을 기능적으로 할 필요는 없으며, 복잡 한 골 합성과 접목을 필요로 하는 직교 모델의 필요성을 없애줍니다. 이것은 또한 장기 수술 절차 및 동물 불편 함11,12와 같은 기립 모델의 잘 알려진 귀찮은 결과 중 일부를 방지 합니다. 그러나, 이성애 디자인은 VCA 연구에 있는 중요 한 관심사의 전부 뿐 아니라 뼈와 연골의 기능적인 결과 측정, 뿐 아니라 근육 기능을 허용 하지 않다는 것을 주의 하는 것이 중요 합니다. 셋째,이 식은 이미징 시스템, 임상 후속 및 일련의 생 검을 이용할 수 있어야 했습니다. 마지막으로, 처리 목적을 위해, 접목 수술은 합병증 없이 쉽게 수행 되어야 했습니다. 이러한 고려 사항 들을 염두에 두고, VCA의 변형 된 쥐 골 절 피부 모델을 개발 하 고,이는 오버-피부 및 관련 맥 관을 포함 하는 공여 체 (브라운-노르웨이)의 무릎과 발목 사이에, 이식 된 받는 사람의 사 타 구니 지역 (루이스). 이 경우, 이식에 대 한 혈관 공급은 대 퇴 동맥 및 정 맥을 통해 발생 하였다.
이 스킨은 VCA 거부를 모니터링 하는 중요 한 핵심 요소 이기 때문에, 피부 관류를 지 원하는 작은 동맥 천공 기를 보존 하기 위해 접목을 준비 하는 데 특정 주의를 기울여야 했습니다. 이 모형을 수립할 때, 우리는 모델의 피부 관류 설계를 확인 하기 위해 indocyanine green (ICG) 혈관 조 영 법 (표시 되지 않은 결과)을 사용 하 여 예비 실험을 수행 했습니다.
접목의 방향이 거꾸로 되어 있기 때문에 접목의 말단 부분이 우수 하 고 접목의 근 위 부분이 열 등 하기 때문에, 긴 척추를 피하기 위해 길이가 깁니다. 따라서, 기증자 대 퇴 혈관이 가능한 한 근접 하 게 분할 되어야 하 고, 수용자 대 퇴 동맥이 가능한 한 말단으로 분할 되어야 한다는 것을 강조 해야 한다.
두 외과 의사의 동시 참여는 기증자 접목의 최종 준비/분리 중에 권장 됩니다. 한 외과 의사는 이식 편 분리를 끝내 야 하 고, 다른 외과 의사는 받는 동물을 마 취 시키고, 외 톨 모세를 위한 혈관을 준비 하기 시작 합니다. 공간 및 장비를 사용할 수 있는 경우, 제 3의 외과 의사가 두 번째 수용자 동물을 준비 할 수 있으며, 두 기증자 다리는 VCA 접목에 사용할 수 있습니다. 외과 의사는 anastomoses 전에 이식 가능한 허 혈 시간을 최소화 하기 위해 서로 협조 해야 합니다. 우리의 경험에의 하면, 수술 후의 대부분은 무감각 기술에 기인 합니다. 가능 하다 면, 우리는 팀의 다른 일원은 수술 도중 무감각 감시를 담당 하는 것이 좋습니다. 이 모델을 성공적으로 수행 하기 위해 기본적인 미세 혈관 기술을 갖춘 훈련 된 외과 의사가 필요 하다는 것은 말할 필요도 없습니다. 외과 의사의 경험에 따라이 모델은 2 ~ 6 개의 수술 시도를 성공적으로 수행 할 수 있습니다.
신 유전학 쥐는 거부와 무관 한 치유 역학을 고려 하 여 대조 군으로 사용 될 수 있다. 수령인 쥐의 반대편 다리는 또한 화상 진 찰과 생 검을 수행 하는 경우에, 통제로, 특히 사용 될 수 있습니다.
이식 된 피부에 모피 재 성장 성공적인 동종 이식 관류의 가장 좋은 징후 중 하나입니다. 한편, 모피 손실, 피부 홍 반 및 탈 상피 화는 플랩의 일부 부분에 대 한 거절 이벤트 및 감소 된 혈액 공급을 지시할 수 있다. 아주 진보 된 거절 단계에서, 피부는 괴 사와 각 질 제거를 보여줄 수 있습니다. 이식 근육 량의 감소는 근 위축 때문에 진보 된 단계에서 나타난다. 동물은 일반적으로 체중을 잃게 (10%까지) 첫 번째 7-10 일, 하지만 다음 복구 하 고 번 창. 수술 후 처음 몇 일 동안 영양 강화 워터 젤 (예: 디에 트 겔 회수)을 추가 하 여 받는 쥐의 영양을 지원 하는 것이 좋습니다. 동물의 아주 작은 수 (이상에서 2 50 실험 동물), 우리는 피부 감염과 자동 포식을 목격 했다.
결론적으로, 여기에 소개 된 동종 주제의 변형 된 모델은, 다양 한 재현성 있는 이식 패러다임을 제공 합니다. 시리얼 생 검 및 이미징은 거부 이벤트의 시간 과정에 대 한 정보를 제공 합니다. 이 방법으로 공부 될 수 있는 임상 현상의 다양성은 앞으로 수 년에 있는 수많은 통찰력 있는 발견을 위한 잠재력을 가진 높게 적응 가능한 번역 모형 만듭니다.
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Disclosures
저자는 공개 할 것이 없습니다.
Acknowledgments
이 작품은 상 무에의 한 의원 지시 의료 연구 프로그램을 통해 건강 문제에 대 한 국방부 장관 비서에 의해 지원 되었다. W81XWH-13-2-0057. 의견, 해석, 결론 및 권장 사항은 저자의 것 이며 반드시 국방부가 승인 하지는 않습니다.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Acepromazine | Henry Schein | 5700850 | |
| Adventitia Scissors | ASSI | SAS15R8 | |
| Approximator Clamp (Double) | ASSI | ABB2V, ABB22V | |
| Approximator Clamp (single) | FST | 00398-02 | |
| Clamp Applying Forceps | ASSI | CAF4 | |
| Dissecting Scissors | ASSI | SDS18R8 | |
| Flushing blunt needle 27 G | SAI | ||
| Heparin Sodium | Sagent | 25021-400-30 | |
| Isoflurane | Patterson Veterinary | 14043-704-06 | |
| Jewelers Bipolar | ASSI | 103000BPS03 | |
| Jewelers forceps #3 | FST | 11231-30 | |
| Ketamine HCl 100 mg/mL | Zoetis | 043-304 | DEA License required |
| Lactated Ringer Solution | Hospira | 0409-7953-03 | |
| Lactated Ringer Solution + 5% Dextrose | Hospira | 0409-7953-09 | |
| Meloxicam | Henry Schein | 11695-6925-2 | |
| Micro forceps | ASSI | JFAL3 | |
| Micro needle holder | ASSI | B138 | |
| Prograf (Tacrolimus) 5 mg/mL | Astellas | 0469-3016-01 | |
| Suture, 10-0 Prolene | Ethicon | W2790 | or 10-0 Ethilon (2830) |
| Suture, 4-0 Coated Vicryl | Ethicon | J714D | |
| Vessel Dilator Forceps | ASSI | D5AZ | |
| Xylazine | VetOne | 13985-612-50 |
References
- Gilbert Fernandez, J. J., Febres-Cordero, R. G., Simpson, R. L. The Untold Story of the First Hand Transplant: Dedicated to the Memory of one of the Great Minds of the Ecuadorian Medical Community and the World. Journal of Reconstructive Microsurgery. , (2018).
- Dubernard, J. M., et al. Human hand allograft: report on first 6 months. Lancet. 353 (9161), 1315-1320 (1999).
- Jones, J. W., Gruber, S. A., Barker, J. H., Breidenbach, W. C. Successful hand transplantation. One-year follow-up. Louisville Hand Transplant Team. The New England Journal of Medicine. 343 (7), 468-473 (2000).
- Devauchelle, B., et al. First human face allograft: early report. Lancet. 368 (9531), 203-209 (2006).
- Broyles, J. M., et al. Functional abdominal wall reconstruction using an innervated abdominal wall vascularized composite tissue allograft: a cadaveric study and review of the literature. Journal of Reconstructive Microsurgery. 31 (1), 39-44 (2015).
- Kollar, B., et al. Innovations in reconstructive microsurgery: Reconstructive transplantation. Journal of Surgical Oncology. 118 (5), 800-806 (2018).
- Kaufman, C. L., et al. Graft vasculopathy in clinical hand transplantation. American Journal of Transplantation. 12 (4), 1004-1016 (2012).
- Brandacher, G., Grahammer, J., Sucher, R., Lee, W. P. Animal models for basic and translational research in reconstructive transplantation. Birth Defects Research Part C: Embryo Today. 96 (1), 39-50 (2012).
- Kaufman, C. L., et al.
- Committee for the Update of the Guide for the Care and Use of Laboratory Animals, Institute for Laboratory Animal Research, Division on Earth and Life Studies, National Research Council of the National Academies. Guide for the Care and Use of Laboratory Animals, 8th edition. , National Academies Press. Washington, DC. (2011).
- Nazzal, J. A., Johnson, T. S., Gordon, C. R., Randolph, M. A., Lee, W. P. Heterotopic limb allotransplantation model to study skin rejection in the rat. Microsurgery. 24 (6), 448-453 (2004).
- Ulusal, A. E., Ulusal, B. G., Hung, L. M., Wei, F. C. Heterotopic hindlimb allotransplantation in rats: an alternative model for immunological research in composite-tissue allotransplantation. Microsurgery. 25 (5), 410-414 (2005).
