Encyclopedia of Experiments: Biology
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Transcript
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- En un tubo que contiene amortiguador M9, recoge hasta 150 gusanos hermafrodita en la etapa deseada de desarrollo.
Ver el tubo bajo un microscopio diseccionador al quitar el sobrenadante para evitar la pérdida de la muestra.
Localice la cabeza del gusano y el faringe, o foregut, que contiene dos estructuras en forma de bulbo.
Una vez que la cutícula se interrumpe, los dos brazos gonad son extruidos o expulsados del cuerpo debido a la presión interna del gusano.
En este ejemplo, diseccionaremos las gónadas de los gusanos adultos para el análisis de inmunofluorescencia.
- Recoger de 100 a 150 gusanos en la etapa de desarrollo deseada y recogerlos en un tubo de microcentrífuga de 1,5 mililitros que contiene 100 microlitros de amortiguador M9. Entonces, llene el tubo de microcentrífuga con 900 microlitros más de amortiguador M9 y centrífulo a 1.000 veces g durante 1 minuto a temperatura ambiente.
Bajo un microscopio diseccionador, retire suavemente 900 microlitros del tampón M9.
A continuación, utilizando una punta de micropipette de 200 microlitros con un agujero ensanchado, transfiera los gusanos en 100 microlitros de amortiguador M9 a una platillo de reloj de vidrio de fondo plano.
Bajo un microscopio diseccionador, coloque cada aguja debajo y sobre cada gusano y haga un corte fino en cada gusano cerca de la segunda bombilla faríngea usando una tijera como movimiento.
- Es muy importante que la disección de los animales en el plato se complete en menos de cinco minutos.
- En caso de que una gónada extruida no sea visible, simplemente salta sobre ese animal.
