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Disección de la glándula del anillo larvario

 
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Disección de la glándula del anillo larvario: Aislamiento de órganos endocrinos del desarrollo de Drosophila

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- Para diseccionar la glándula tórica, necesitarás un microscopio diseccionador, dos fórceps, una aguja de calibre fino para servir como un cuchillo diseccionador, y una solución tamponada.

La glándula anillada larvaria es una estructura endocrina compleja que contiene tres órganos endocrinos diferentes. El corpus allatum se encuentra en el centro de la glándula tórica y produce hormona juvenil, que regula el desarrollo y el envejecimiento. La glándula protorácica rodea el corpus allatum y constituye la mayor parte de la estructura.

En este ejemplo, diseccionaremos cerebros larvarios y glándulas tóricas para la inmunohistoquímica.

- Después de preparar las larvas, iniciar la disección del curso en un plato de tres centímetros lleno de PBS bajo un microscopio diseccionador. Primero, agarrar el gancho de la boca con fórceps. Luego, usando micro tijeras, cortar el cuerpo a aproximadamente un tercio de la longitud de la punta anterior.

Preparar hasta 20 larvas de esta manera en un plazo de 10 minutos y luego transferirlas a solución fija. Después de 30 minutos, lave las preparaciones y proceda con inmunostaining. Después de inmunostaining las larvas, utilice una pipeta desechable para transferir las muestras a un plato lleno de 0.3% PBT.

Bajo un microscopio diseccionador, agarre la cutícula o el gancho de la boca con un par de fórceps.

A continuación, usando fórceps, separe cuidadosamente el esófago y el intestino del complejo del disco del ojo de la glándula del anillo cerebral. Tire del intestino hacia el lado posterior, ya que el esófago pasa a través del cerebro por encima del cordón nervioso ventral. Finalmente, para aislar el complejo de la glándula del anillo cerebral, cortar cuidadosamente las conexiones entre el disco cerebral, los discos oculares y los discos de las piernas con un cuchillo de aguja.

- Es bastante esencial utilizar fórceps finos con bordes afilados durante la disección. también recomiendo encarecidamente que afila los fórceps con una piedra de molienda de Arkansas para unir sus bordes sin huecos.

- Para transferir las muestras, utilice un micropipette con una punta de agujero ancha. Deposite las muestras en el centro de la diapositiva de vidrio. Entonces, utilice fórceps para colocar las muestras en sus lados ventrales para que la glándula del anillo, que se encuentra en el lado dorsal del cerebro, pueda ser imagen.

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