显微注射斯氏按蚊胚胎以培育抗疟疾蚊子

每15秒，世界上就有一名儿童死于疟疾。在这里，詹姆斯实验室正致力于培育无法传播疟原虫的法国按蚊。我叫TIUs，目前在美国加利福尼亚大学欧文分校分子生物学与生物化学系的Anthony James实验室工作。

今天我将向您展示如何制作转基因的斯蒂文斯氏眼。我们开展这项研究的目的是使疟疾媒介蚊子对疟原虫产生抗性，从而无法携带疟疾寄生虫。目前，我已准备好一个含有等渗缓冲液的小瓶，用于让蚊子在其中产卵。

我将使用这个吸虫器吸取蚊子并放入小瓶中。然后将这个小瓶放入30摄氏度的培养箱中，在杯中放置约一小时。现在我们将拉制显微注射针。

这些是石英材质的针，我们必须使用非常精细的尖端。因此，我们需要使用这种拉针仪。我们采用 Suter Instruments 公司的拉针仪，以及 SU Instruments 公司提供的精细针具。

现在取出蚊子，将这些卵放入培养皿中，培养皿内已放置一张用等渗缓冲液浸湿的滤纸，目的是在注射期间保持胚胎湿润。滤纸上的液体量非常关键：既不能让卵漂浮起来，也不能让其变干。

现在，我将把胚胎从卵纸转移到另一张已浸透等渗缓冲液的3毫米沃特曼滤纸上。这样做的目的是在进行显微注射前排列胚胎时去除绒毛膜。接下来，我将去除卵子表面这层银色的绒毛膜。

我用刷子轻轻刷去它们。因此，上方的胚胎仍带有绒毛膜，具有银色光泽的部分。下方的胚胎在哪儿？

我已经成功取出了Corian，顶部的这个可能会在胶带上滑动，而底部的则会粘住。这在进行不对称操作时非常重要。现在我正在对齐胚胎。

胚胎的前端较大，我将其放置在右侧。左侧是较细的后端，我将在此处注射胚胎。我尝试将它们并排放置，以便相互支撑，保持位置稳定。

通常我会将大约10个样本排成一行。现在我已经排好了一行胚胎，接下来会将它们转移到盖玻片上。在盖玻片上。

我使用假发胶带使其固定。完成后，我会用另一张滤纸吸干胚胎所在位置的滤纸，将胚胎转移到盖玻片上，并在加油前静置干燥30秒。现在我们已将胚胎排列整齐，并置于油下。

在显微镜载物台上，我们将使用这种特殊的微生物图案微量移液头，将混有食用染料的 DNA 注入，并将该液体注入端口的针头中。现在我们已经填充了针头，并将其重新安装到微量注射仪上。现在我们已准备好进行显微注射。

现在我移动针头以将其调至清晰，以便能够清晰地观察其焦点。完成这一步后，我移动配重针，并将胚胎移入视野，同时对胚胎进行聚焦。当这些操作完成后，我再次调整针头位置，直至其定位准确，然后继续处理我的胚胎。

当针头穿过油层时，视野会变得模糊，需要再次进行调节。这就是鲨鱼，没错，就是鲨鱼蜱。

现在我准备进行注射。可以看到，我用针头接触了胚胎，通过这种方式使针尖断裂，可以看到有小液滴渗出，这将被注入胚胎中。因此，这里进行注射，然后将针头抽出。

每次注射完一个胚胎后，我都会检查针尖是否有一小滴液体渗出。正如您所见，我需要为每个胚胎重新调整位置，以确保达到最佳角度。现在这个胚胎出现了渗漏。

如您所见，当我第二次将样品注入油中时，气泡变得非常大，因此我需要重新调整显微注射器的压力。现在显微注射已经完成，我们将把胚胎从显微镜下转移到已加入等渗缓冲液的培养皿中。我会擦去盖玻片上的油，并将其切成小片，放入培养皿中。

现在我们将它们留在这里，直至当天结束，并保持室温。然后将其转移至昆虫培养室。今天我向大家演示了如何注射史蒂文森氏菌（Steven side），以制备瞬时转基因蚊子。

现在我们只需等待幼虫全部孵化。待其发育至成虫后，它们将进行交配。此后，无论它们是否为重组个体，我们都需等待三周才能开始筛选。