0 次观看 • 3:27 分钟 • October 30th, 2025
从添加了荧光标记细菌培养物的无碳缓冲液开始。
离心以沉淀细菌,并弃去上清液。
将沉淀重悬于含有温和去污剂的新鲜无碳缓冲液中。
缺乏碳源会停止细胞生长,而洗涤剂可防止细胞聚集并保持其悬浮状态。
将细菌悬液装入注射器,并连接至泵。
将悬浮液注入含有带底部嵌入式捕获结构通道的微流控芯片入口。
缓慢从通道出口处吸出液体。
随着液体的退去,毛细作用力引导细菌向出口移动。
在此过程中,单个细菌细胞落入陷阱,从而实现细菌的图案化排列。
用预热的富含营养的肉汤持续冲洗通道。
细菌恢复生长并在陷阱内形成微菌落。
使用荧光显微镜在受控环境中捕获延时图像,并分析细菌生长情况。
用移液器将1毫升MOPS培养基加入离心管中,再加入10微升0.132摩尔的磷酸钾溶液。
取100微升过夜培养物加入离心管中,在2,300 × g条件下离心2分钟。轻柔弃去上清液,将沉淀重悬于1毫升含0.015%吐温20和0.01%磷酸钾的新鲜MOPS培养基中,并将菌液悬液装入1毫升注射器中。为确保注射器与管路连接牢固,可直接将针头插入管路。
现在将注射器安装到注射泵上,并通过通道上游入口处将悬浮液注入微流控芯片,直至悬浮液覆盖带有捕获结构的模板区域。将注射泵设置为0.07至0.2微升/分钟的流速,回抽细菌悬浮液,并通过显微镜软件监测图案形成过程。一旦细胞在模板上完成排列,即提高回抽流速,迅速排空微流控通道,并用已预先脱气至少30分钟并预热至30摄氏度的新鲜LB培养基冲洗通道。
将注射泵的流速设置为每分钟2 µL,以缓慢冲洗通道。待通道完全充满后,再次提高流速。在所需的放大倍数和时间间隔下采集正在生长的细菌图像。
本文介绍了一种利用微流控芯片对细菌细胞进行图案化的方法。该过程包括将细菌悬浮液注入通道,通过毛细作用力将单个细胞引导至捕获结构中,以便观察其生长情况。
微流控图案化技术与基于荧光的单细胞细菌生长追踪为在严格控制条件下研究微生物行为提供了高分辨率平台。该方法可精确分离单个细胞,支持稳健的假设检验和定量分析,对于抗感染药物研发中的早期发现和靶点验证至关重要。该方法具有良好的可重复性和可扩展性,可作为适用于全产品线筛选和机制性风险评估的可重复利用资源。
这种基于微流控和荧光的实验流程整合了早期发现、检测方法开发和临床前模型优化的界面。
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最后更新:29 八月 2026