微流控图案化和基于荧光的单细胞细菌生长跟踪

首先将荧光标记的细菌培养物添加到无碳缓冲液中。

离心以沉淀细菌并丢弃上清液。

将沉淀重悬于含有温和洗涤剂的新鲜无碳缓冲液中。

缺乏碳源会停止生长，而洗涤剂可以防止结块并保持细胞悬浮。

将细菌悬浮液装入注射器并将其连接到泵。

将悬浮液注入微流体芯片的入口中，该芯片包含带有地板嵌入陷阱的通道。

慢慢地从通道出口中抽出液体。

当液体退去时，毛细管力将细菌引导至出口。

在此过程中，单个细菌细胞沉积在陷阱中，从而形成细菌图案。

用预热的、营养丰富的肉汤连续冲洗通道。

细菌恢复生长并在陷阱内形成微菌落。

使用荧光显微镜捕获延时图像并分析受控环境中的细菌生长。

将一毫升 MOPS 培养基移液到离心小瓶中，并加入 10 微升 0.132 摩尔磷酸钾。

将100微升过夜培养物等分到离心瓶中，并以2,300倍g离心培养物两分钟。轻轻弃去上清液，将沉淀重悬于一毫升含有 0.015% 吐温 20 和 0.01% 磷酸钾的新鲜 MOPS 培养基中，并将细菌悬浮液加载到一毫升注射器中。要固定注射器和管道连接，请直接将针头插入管道中。

现在将注射器安装在注射泵上，并通过位于通道上游部分的入口将悬浮液注入微流体芯片中，直到悬浮液用陷阱覆盖模板区域。将注射泵设置为每分钟 0.07 至 0.2 微升的流速，以提取细菌悬浮液并通过显微镜软件监控图案形成过程。一旦模板用细胞图案化，增加提取流速以快速排空微流体通道，并用先前脱气至少 30 分钟并在 30 摄氏度下预热的新鲜 LB 冲洗它。

现在将注射泵设置为每分钟两微升的流速，以轻轻冲洗通道。通道填满后，再次增加流量。以所需的放大倍率和时间间隔获取生长细菌的图像。