利用变数串联重复（VNTR）分析检测鱼类病原体

先用含有福酰胺基变性溶液的PCR板。

将从鱼类致病菌提取的稀释PCR扩增剂加入每个孔中。

这些扩增子含有荧光标记的变数串联重复序列（VNTR），这些短重复序列被用作细菌鉴定的遗传标记。

密封板材和离心机以消除气泡。

用热循环器加热板材，使双股VNTR变性。

甲酰胺促进链分离并抑制再退火。

快速冷却板块以稳定单链DNA。

离心机收集样本体积。

拆掉密封条，用框架固定板子。

放置毛细管并进行毛细管电泳。

在电泳过程中，VNTR片段在电场下通过毛细管迁移，并按大小分离。

激光激发每个片段上的荧光标签，产生颜色编码信号。

所得的电泳图显示了与致病细菌对应的VNTR峰值模式。

确认PCR扩增后，使用新的PCR试纸或平板，将1至10的PCR产物稀释至纯化水。旋涡和离心机的短暂反应。在烟雾舱工作时，在离心管中准备由甲酰胺和参考级标准溶液组成的主混合液。

根据需分析的PCR产物数量，使用手稿中详细描述的试剂体积。允许10%的盈余体积。短暂地涡旋，并将9.5微升的液体分布到适合现有毛细管电泳系统的PCR板上的单个孔中。

然后加入0.5微升稀释的PCR产物。短暂密封并离心。然后，将装有样品的板子放入PCR热循环仪，在95摄氏度下使样品变性三分钟，然后无限冷却至4摄氏度。

在1000 克 离心机下离心一分钟，小心拆除密封，并按照制造商说明将板子装入校准的毛细电泳系统中。运行片段分析毛细管电泳，使用适合所选设备试剂的试剂，并根据稿件描述调整运行条件。