一种基于微珠的多重免疫检测,用于定量多种细胞因子靶标

0 次观看4:49 分钟 • July 8th, 2025

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

取一个底部带有过滤器的多孔板。

添加含有不同细胞因子的测试样品。

添加按大小和内部荧光强度区分的不同微球组。

每组都与靶向特定细胞因子的抗体偶联。

鼓动下在黑暗中孵育板。

抗体与其靶细胞因子结合,将它们固定在微球上。

应用真空以去除未结合的细胞因子。由于膜的孔径较小,微球结合的细胞因子被保留。

添加与微球结合的细胞因子结合的生物素偶联检测抗体混合物。

加入荧光报告偶联链霉亲和素,并在搅拌下在黑暗中孵育。链霉亲和素与生物素结合,将报告基因固定在微球复合物上。

去除未结合的分子并重悬微球。

使用流式细胞术,通过确定微球的大小和内部荧光来识别结合的细胞因子。

要确定特定细胞因子的量,请测量报告基因的荧光强度。

要进行测定,请在使用前让所有试剂加热至室温。

本演示中使用了聚丙烯滤板。在整个测定过程中(包括清洗步骤)保持板直立是绝对必要的,以避免丢失珠子。

通过向每个孔中加入 100 微升 1x 洗涤缓冲液来预润湿滤纸,并让板在室温下静置 1 分钟。使用真空歧管去除缓冲液体积。将板压在一叠干净的纸巾上,从板底部吸干多余的洗涤缓冲液。然后将板放在倒置的板盖上。

对于细胞培养上清液样品,向所有孔中加入 25 微升测定缓冲液。向标准孔中加入 25 微升每种标准品。最后,将每个样品的 25 微升添加到样品孔中。涡旋混合的珠子 30 秒。然后,向每个孔中加入 25 微升混合珠子,间歇性摇动珠子瓶以避免珠子沉淀。

用封板机密封板。密封后,用铝箔包裹整个板,包括倒置的板盖。将板放在摇板器上,固定好,在室温下以约 500 RPM 摇动两小时。在不倒置的情况下,将板放在真空歧管上并像以前一样施加真空。然后,向每个孔中加入 200 微升 1x 洗涤缓冲液。

通过真空过滤去除测定板孔中的内容物。在再次重复此步骤之前,用吸水垫或纸巾吸干板底部多余的洗涤缓冲液。接下来,向每个孔中加入 25 微升检测抗体。用新鲜的封板机密封板材后,用铝箔包裹整个板材,包括倒置的板盖。

将板放在摇板器上,在室温下以约 500 RPM 摇动 1 小时。在不抽真空的情况下,将 25 微升链霉亲和素藻红蛋白试剂直接添加到每个孔中。像以前一样密封并包裹盘子。然后。将板放在摇板器上,在室温下以约 500 RPM 摇动 30 分钟。

重复真空过滤步骤两次后,向每个孔中加入 200 微升 1x 洗涤缓冲液。将珠子重悬于摇床上 1 分钟。使用多通道移液器,将样品从滤板转移到FACS管中,以便在流式细胞仪上读取样品。

09:22

基于磁珠复合法的撕裂细胞因子分析

相关视频

0 观看次数

07:08

基于多路复用珠子的流量分析系统的快速、多路双记者 IgG 和 Igm SARS-CoV-2 中和检测

相关视频

0 观看次数

08:48

使用多分析物免疫珠测定法对Covid-19进行血清转换的动态监测

相关视频

0 观看次数

14:48

转换到一个点阵仪XMAP含量,使用多重抗体筛查方法的捕获ELISA

相关视频

0 观看次数

04:45

多分析物免疫珠测定:一种基于流式的免疫测定技术,用于同时检测人血清样品中的多种抗体亚型

相关视频

0 观看次数

04:46

一种基于微珠的多重检测方法,用于分析人泪液样本中的细胞因子

相关视频

0 观看次数

11:00

细胞 Bead-based 免疫分析平台对受激小鼠脾多重细胞因子的研究

相关视频

0 观看次数

08:26

人干扰素α超灵敏单分子阵列数字酶联免疫吸附试验的研制与验证

相关视频

0 观看次数

06:37

使用参考试剂确认细胞因子释放测定法预测单克隆抗体安全性的稳健性

相关视频

0 观看次数

05:25

在多重血清学检测中同时检测不同抗体类别

相关视频

0 观看次数

最后更新:1 八月 2026