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神经科学
0 次观看 • 4:53 分钟 • July 8th, 2025
从一个含有经多聚-D-赖氨酸包被的可渗透膜插件的多孔板开始。
向孔中加入星形胶质细胞生长培养基，并将星形胶质细胞（一种特化的胶质细胞）接种至插入式培养小室中。
孵育以促进细胞在聚-D-赖氨酸上的黏附 通过 静电相互作用并形成单分子层。
将星形胶质细胞培养基更换为神经元培养基。
将该插入物转移至多孔板中，多孔板内含有贴附在聚合物包被的盖玻片上的原代小鼠胚胎神经元。
孵育以建立间接神经元-星形胶质细胞共培养体系，其中两种细胞在物理上相互分离，但共享相同的培养基。
星形胶质细胞分泌多种对神经元存活和生长至关重要的神经营养因子。
这些因子穿过可渗透的支撑层并与原代神经元相互作用，促进其分化并形成神经元突起。
这些突起延长并在神经元之间形成突触连接，表明存在神经元-胶质细胞相互作用。
用每毫升10微克的多聚-D-赖氨酸包被每个插入膜，孵育1小时。1小时后，用PBS洗涤插入膜两次。
在此期间，吸除星形胶质细胞培养基，并用 10 毫升 PBS 洗涤培养物一次，以确保去除残留的血清。接着，向培养瓶中加入 3 毫升 0.05% 胰蛋白酶 EDTA，将细胞置于约 10 分钟的胰蛋白酶消化孵育中。随后，用 7 毫升星形胶质细胞培养基轻轻重悬细胞。
将细胞悬液转移至15毫升离心管中，在216 × g 条件下离心5分钟。随后，小心吸除上清液，并将细胞沉淀用1毫升星形胶质细胞培养基重悬。使用细胞计数板对细胞进行计数。接着，向24孔板每孔加入500微升星形胶质细胞培养基。吸除PBS，将25,000个细胞溶于500微升星形胶质细胞培养基中，分别加入各个独立插件中，并于37摄氏度培养细胞。
为分离海马体，准备三个盛有制备液的10厘米培养皿，以及一个含有1毫升制备液的2毫升离心管。从大脑皮层组织中解剖出海马体，并将其收集至装有制备液的2毫升离心管中。
必须将海马体从中枢神经系统其他区域的邻近组织中完全分离出来，这一点至关重要。因此，在取出海马体后，还需进一步去除混入的外来污染组织。
解剖后，将试管转移至无菌超净工作台。小心移除培养基，并用含有木瓜蛋白酶的1毫升消化液消化海马组织。消化15分钟后，用移液器轻柔抽吸，小心吸出消化液。
由于神经元具有高度敏感性，必须小心地对海马体进行吹打，以避免产生气泡并获得最佳的吹打强度。
用神经元培养基洗涤海马组织三次，每次洗涤加入1毫升新鲜培养基，然后小心吸除。最后一次洗涤后，用1毫升神经元培养基小心吹打组织。随后使用细胞计数板进行细胞计数。将35,000个细胞接种至24孔板的每孔中，每孔体积为500微升神经元培养基，并将神经元在37摄氏度条件下孵育1小时。
现在，将已接种有融合星形胶质细胞单层的预置小室从培养箱中取出。通过吸除星形胶质细胞培养基，并替换为 500 微升新鲜的神经元培养基，进行培养基更换。
然后，使用无菌镊子小心地将含有星形胶质细胞的插入物放入含有神经元培养物的孔中。随后，将得到的间接神经元-星形胶质细胞共培养体系放回培养箱中，直至进行实验。